1.有機物中的胺根在強熱和CuSO4
，濃H2SO4作用下，硝化生成（NH4）2SO4
反應式為
2NH2 H2S04 2H＝（NH4）2S04（其中CuSO4做催化劑）
2.在凱氏定氮器中與堿作用，通過蒸餾釋放出NH3
，收集於H3BO3溶液中
反應式為:
（NH4）2SO4 2NaOH＝2NH3 2H2O Na2SO4
2NH3 4H3BO3＝（NH4）2B4O7 5H2O
3.用已知濃度的H2SO4（或HCI）標準溶液滴定，根據HCI消耗的量計算出氮的含量
，然後乘以相應的換算因子，既得蛋白質的含量點焊機
反應式為：
（NH4）2B4O7 H2SO4 5H2O＝（NH4）2SO4 4H3BO3（NH4）2B4O7 2HCl 5H2O＝2NH4Cl 4H3BO3

凱氏定氮儀操作步驟：（一）消化1、準備6個凱氏燒瓶，標號。1、2、3號燒瓶中分別加入適當濃度的蛋白溶液1.0mL，樣品要加到燒瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶頸上。再依次加入硫酸鉀-硫酸銅接觸劑0.3g
，濃硫酸2.0mL，30%過氧化氫1.0mL。4、5、6號燒瓶作為空白對照，用以測定試劑中可能含有的微量含氮物質，對樣品測定進行校正。4、5、6號燒瓶中加入蒸餾水1.0mL代替樣液
，其餘所加試劑與1、2、3號燒瓶相同。2、jiangjiahaoshijidegeshaopingfangzhixiaohuajiashang，jiehaochouqizhuangzhi。xianyongweihuojiarezhufei，cishishaopingneiwuzhitanhuabianhei，bingchanshengdaliangpaomo

，wubizhuyifangzhiqipaochongchuguankou。daipaomoxiaoshitingzhichanshenghou


，jiadahuoli，baochipingneiyetiweifei，zhirongyechengqinghou
，zaijixujiareshixiaohuayeweifei15min。在消化過程中要隨時轉動燒瓶

，以使內壁粘著物質均能流入底部，以保證樣品完全消化。消化時放出的氣體內含SO2，juyouqiangliecijixing，yincizishizizhongyingdakaichoushuibengjiangqitichouruzilaishuipaichu。zhenggexiaohuaguochengjunyingzaitongfengchuzhongjinxing。xiaohuawanquanhou
，guanbihuoyan

，shishaopinglengquezhishiwen。（二）蒸餾和吸收蒸餾和吸收是在微量凱氏定氮儀內進行的。

凱氏定氮蒸餾裝置種類甚多
，大體上都由蒸氣發生、氨的蒸餾和氨的吸收三部分組成。

1、儀器的洗滌儀器安裝前
，各部件需經一般方法洗滌幹淨，所用橡皮管
、塞須浸在10%NaOH溶液中，煮約10min

，水洗、水煮10min
，再zai水shui洗xi數shu次ci，然ran後hou安an裝zhuang並bing固gu定ding在zai一yi隻zhi鐵tie架jia台tai上shang。儀yi器qi使shi用yong前qian，微wei量liang全quan部bu管guan道dao都dou須xu經jing水shui蒸zheng氣qi洗xi滌di，以yi除chu去qu管guan道dao內nei可ke能neng殘can留liu的de氨an
，正zheng在zai使shi用yong的de儀yi器qi，每mei次ci測ce樣yang前qian，蒸zheng氣qi洗xi滌di5min即(ji)可(ke)。較(jiao)長(chang)時(shi)間(jian)未(wei)使(shi)用(yong)的(de)儀(yi)器(qi)，重(zhong)複(fu)蒸(zheng)氣(qi)洗(xi)滌(di)，不(bu)得(de)少(shao)於(yu)三(san)次(ci)，並(bing)檢(jian)查(zha)儀(yi)器(qi)是(shi)否(fou)正(zheng)常(chang)。仔(zai)細(xi)檢(jian)查(zha)各(ge)個(ge)連(lian)接(jie)處(chu)，保(bao)證(zheng)不(bu)漏(lou)氣(qi)。首(shou)先(xian)在(zai)蒸(zheng)氣(qi)發(fa)生(sheng)器(qi)中(zhong)加(jia)約(yue)2/3體積蒸餾水，加入數滴硫酸使其保持酸性，以避免水中的氨被蒸出而影響結果，並放入少許沸石（或毛細管等），以防爆沸。沿小玻杯壁加入蒸餾水約20mL讓(rang)水(shui)經(jing)插(cha)管(guan)流(liu)入(ru)反(fan)應(ying)室(shi)
，但(dan)玻(bo)杯(bei)內(nei)的(de)水(shui)不(bu)要(yao)放(fang)光(guang)，塞(sai)上(shang)棒(bang)狀(zhuang)玻(bo)塞(sai)，保(bao)持(chi)水(shui)封(feng)，防(fang)止(zhi)漏(lou)氣(qi)。蒸(zheng)氣(qi)發(fa)生(sheng)後(hou)，立(li)即(ji)關(guan)閉(bi)廢(fei)液(ye)排(pai)放(fang)管(guan)上(shang)的(de)開(kai)關(guan)，使(shi)蒸(zheng)氣(qi)隻(zhi)能(neng)進(jin)入(ru)反(fan)應(ying)室(shi)，導(dao)致(zhi)反(fan)應(ying)室(shi)內(nei)的(de)水(shui)迅(xun)速(su)沸(fei)騰(teng)，蒸(zheng)出(chu)蒸(zheng)氣(qi)由(you)反(fan)應(ying)室(shi)上(shang)端(duan)口(kou)通(tong)過(guo)定(ding)氮(dan)球(qiu)進(jin)入(ru)冷(leng)凝(ning)管(guan)冷(leng)卻(que)，在(zai)冷(leng)凝(ning)管(guan)下(xia)端(duan)放(fang)置(zhi)一(yi)個(ge)錐(zhui)形(xing)瓶(ping)接(jie)收(shou)冷(leng)凝(ning)水(shui)。從(cong)定(ding)氮(dan)球(qiu)發(fa)燙(tang)開(kai)始(shi)計(ji)時(shi)
，連(lian)續(xu)蒸(zheng)煮(zhu)5min，然ran後hou移yi開kai煤mei氣qi燈deng。衝chong洗xi完wan畢bi，夾jia緊jin蒸zheng氣qi發fa生sheng器qi與yu收shou集ji器qi之zhi間jian的de連lian接jie橡xiang膠jiao管guan，由you於yu氣qi體ti冷leng卻que壓ya力li降jiang低di
，反fan應ying室shi內nei廢fei液ye自zi動dong抽chou到dao反fan應ying室shi外wai殼ke中zhong
，打da開kai廢fei液ye排pai出chu口kou夾jia子zi放fang出chu廢fei液ye。如ru此ci清qing洗xi2～3次，再在冷凝管下換放一個盛有硼酸-指示劑混合液的錐形瓶使冷凝管下口完全浸沒在溶液中
，蒸餾1～2min，觀察錐形瓶內的溶液是否變色。如不變色
，表示蒸餾裝置內部已洗幹淨。移去錐形瓶
，再蒸餾1～2min，用蒸餾水衝洗冷凝器下口，關閉煤氣燈
，儀器即可供測樣品使用。

2、無(wu)機(ji)氮(dan)標(biao)準(zhun)樣(yang)品(pin)的(de)蒸(zheng)餾(liu)吸(xi)收(shou)由(you)於(yu)定(ding)氮(dan)操(cao)作(zuo)繁(fan)瑣(suo)，為(wei)了(le)熟(shu)悉(xi)蒸(zheng)餾(liu)和(he)滴(di)定(ding)的(de)操(cao)作(zuo)技(ji)術(shu)
，初(chu)學(xue)者(zhe)宜(yi)先(xian)用(yong)無(wu)機(ji)氮(dan)標(biao)準(zhun)樣(yang)品(pin)進(jin)行(xing)反(fan)複(fu)練(lian)習(xi)，再(zai)進(jin)行(xing)有(you)機(ji)氮(dan)未(wei)知(zhi)樣(yang)品(pin)的(de)測(ce)定(ding)。常(chang)用(yong)巳(si)知(zhi)濃(nong)度(du)的(de)標(biao)準(zhun)硫(liu)酸(suan)銨(an)測(ce)試(shi)三(san)次(ci)。取(qu)潔(jie)淨(jing)的(de)100mL錐形瓶五隻，依次加入2%硼酸溶液20mL
，次甲基藍-甲基紅混合指示劑（呈紫紅色）3～4滴
，蓋好瓶口待用。取其中一隻錐形瓶承接在冷凝管下端

，並使冷凝管的出口浸沒在溶液中。注意：在此操作之前必須先打開收集器活塞

，以免錐形瓶內液體倒吸。準確吸取2mL硫酸銨標準液加到玻杯中，小心提起棒狀玻塞使硫酸銨溶液慢慢流入蒸餾瓶中，用少量蒸餾水衝洗小玻杯3次，一並放人蒸餾瓶中。然後用量筒向小玻杯中加入10 mL 30%NaOH溶液，使堿液慢慢流入蒸餾瓶中，在堿液尚未完全流入時，將棒狀玻塞蓋緊。向小玻杯中加約5mL蒸zheng餾liu水shui，再zai慢man慢man打da開kai玻bo塞sai
，使shi一yi半ban水shui流liu入ru蒸zheng餾liu瓶ping，一yi半ban留liu在zai小xiao玻bo杯bei中zhong作zuo水shui封feng。關guan閉bi收shou集ji器qi活huo塞sai，加jia熱re蒸zheng氣qi發fa生sheng器qi
，進jin行xing蒸zheng餾liu。錐zhui形xing瓶ping中zhong的de硼peng酸suan-指示劑混合液由於吸收了氨，由紫紅色變成綠色。自變色時起
，再蒸餾3～5min
，移動錐形瓶使瓶內液麵離開冷凝管下口約lcm，並用少量蒸餾水衝洗冷凝管下口，再繼續蒸餾1min，移(yi)開(kai)錐(zhui)形(xing)瓶(ping)

，蓋(gai)好(hao)
，準(zhun)備(bei)滴(di)定(ding)。在(zai)一(yi)次(ci)蒸(zheng)餾(liu)完(wan)畢(bi)後(hou)
，移(yi)去(qu)煤(mei)氣(qi)燈(deng)，夾(jia)緊(jin)蒸(zheng)氣(qi)發(fa)生(sheng)器(qi)與(yu)收(shou)集(ji)器(qi)間(jian)的(de)橡(xiang)膠(jiao)管(guan)

，排(pai)除(chu)反(fan)應(ying)完(wan)畢(bi)的(de)廢(fei)液(ye)，用(yong)水(shui)衝(chong)洗(xi)小(xiao)玻(bo)杯(bei)幾(ji)次(ci)，並(bing)將(jiang)廢(fei)液(ye)排(pai)除(chu)。如(ru)此(ci)反(fan)複(fu)衝(chong)洗(xi)幹(gan)淨(jing)後(hou)，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)下(xia)一(yi)個(ge)樣(yang)品(pin)的(de)蒸(zheng)餾(liu)。按(an)以(yi)上(shang)方(fang)法(fa)用(yong)標(biao)準(zhun)硫(liu)酸(suan)銨(an)再(zai)做(zuo)兩(liang)次(ci)。另(ling)取(qu)2mL蒸餾水代替標準硫酸銨進行空白測定二次。將各次蒸餾的錐形瓶一起滴定。

3、未知樣品及空白的蒸餾吸收將消化好的蛋白樣品三支，空白對照液三支，依次作蒸餾吸收。加5mL熱的蒸餾水至消化好的樣品或空白對照液中，通過小玻杯加到反應室中，再用熱蒸餾水洗滌小玻杯3次，每次用水量約3mL，xidiyeyibingdaorufanyingshinei。qiyucaozuoanbiaozhunliusuanandezhengliujinxing。youyuxiaohuayeneiliusuanjianongdugaoerchengzhanchouzhuang，buyicongkaishishaopingneidaochu
，bixujiarurezhengliushui5 mL稀xi釋shi之zhi，如ru果guo有you結jie晶jing析xi出chu，必bi須xu微wei熱re溶rong解jie，趁chen熱re加jia入ru玻bo杯bei
，使shi其qi流liu入ru反fan應ying室shi。此ci外wai，還hai應ying當dang注zhu意yi趁chen儀yi器qi洗xi滌di尚shang未wei完wan全quan冷leng卻que時shi立li即ji加jia入ru樣yang品pin或huo空kong白bai對dui照zhao液ye，否fou則ze消xiao化hua液ye通tong過guo冷leng卻que的de管guan道dao容rong易yi析xi出chu結jie晶jing，造zao成cheng堵du塞sai。（三）凱氏定氮儀滴定樣品和空白蒸餾完畢後，一起進行滴定。打開接受瓶蓋，用酸式微量滴定管以0.0100mol/Ldebiaozhunyansuanrongyejinxingdiding。daidizhipingneirongyechenganhuiseshi，yongzhengliushuijiangzhuixingpingneibisizhoulinxiyici。ruozhenyaohoufuxianlvse

，yingzaixiaoxindirubiaozhunyansuanrongyebandi，zhenyaoguanchapingneirongyeyansebianhua
，anhuisezaiyierfenzhongneibubian，dangshiweidaodadidingzhongdian。ruochengfenhongse
，biaomingyichaoyuedidingzhongdian，kezaiyididinghaoyongdebiaozhunyansuanrongyeyongliangzhongjianqu0.02mL
，meizuyangpindedingdanzhongdianyansebixuwanquanyizhi。kongbaiduizhaoyejieshoupingneiderongyeyansebubianhuolveyoubianhuashangweichuxianlvse
，keyibudiding。jilumeicididinghaoyongbiaozhunyansuanrongyehaoshengshu，gongjisuanyong。