物理性質:
柱長,內徑,如250*4.6mm。一般柱長在2―250mm,柱越長,分離度越高,但柱壓更高,分離所需時間更長;但分離度與理論塔板數的平方根成正比,所以一昧增加柱長並不是最有效的分離手段,一般情況下,150mm、5um的填料可以提供足夠的塔板數。
粒徑,影響色譜分離度。粒徑越小,分離越快,柱效越高,但柱壓力越高,柱容易被汙染,導致柱壽命降低。常見分析柱通常使用5um填料,複雜的多組分樣品分離一般使用3.5umlijing,gengdaneijingdezhibeisepuzhutongchangshiyonggengdadelijing。ruguogudingxiangxuanzeshizhengque,danshifenlidubugou,namexuanyonggengxiaodelidudetianliaoshihenyouyongde。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍,因此如何選擇填料粒徑需要根據現實情況而定。
孔徑,60A,120A,300A等。孔徑小,則含孔率高,比表麵積大,載碳量高;色(se)譜(pu)柱(zhu)填(tian)料(liao)孔(kong)徑(jing)大(da)小(xiao)需(xu)和(he)分(fen)子(zi)大(da)小(xiao)相(xiang)匹(pi)配(pei),保(bao)證(zheng)分(fen)子(zi)自(zi)由(you)進(jin)出(chu)填(tian)料(liao)孔(kong)並(bing)與(yu)孔(kong)內(nei)表(biao)麵(mian)的(de)鍵(jian)合(he)相(xiang)進(jin)行(xing)分(fen)離(li)分(fen)配(pei),通(tong)常(chang)要(yao)求(qiu)孔(kong)徑(jing)直(zhi)徑(jing)是(shi)分(fen)子(zi)直(zhi)徑(jing)的(de)3倍以上,一般小分子使用80―120A,大分子使用300A。
顆粒形狀,一般有球形和不規則形,當使用黏度較大的流動相時,球形顆粒可以降低柱壓,延長色譜柱壽命。
比表麵積,指的是每克填料的表麵積,如180m2/g―350m2/g,與粒度和含孔率有關;比表麵積大,會增加樣品與鍵合相之間的反應,增加保留和分離度;比表麵積小則可以縮短分析時間和平衡時間,並不是比表麵積大或者小就更好,需要選擇合適的比表麵積。
化學性質:
矽膠基質:最通用的基質,強度大,化學修飾容易,但使用的pH值範圍有限(一般為2―8,特殊修飾的可以達到1―12)。
聚合物基質:多為聚苯乙烯―二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂,化學穩定,應用pH範圍寬,具有更強的疏水性,對蛋白質等樣品分離效果較好;但強度較小,有機溶劑可能導致聚合物溶脹而受損,批次重複性較差,商品化色譜柱不多,一般價格較貴。
載碳量:基質表麵鍵合相的比例,載碳量高,則保留增加,適合分析非極性化合物。
鍵合相:鍵合試劑不同,對化合物的選擇性不同,一般長鏈的烷基鍵合相(C18 C8)比短鏈的(C4 C3)穩定;非極性的鍵合相比極性的鍵合相(-NH2)穩定。
封端:用yong短duan鏈lian將jiang裸luo露lu的de矽gui羥qiang基ji鍵jian合he後hou封feng閉bi起qi來lai,以yi減jian少shao殘can留liu的de矽gui醇chun基ji,減jian輕qing待dai測ce組zu分fen與yu酸suan性xing矽gui羥qiang基ji反fan應ying而er引yin起qi的de色se譜pu峰feng拖tuo尾wei現xian象xiang。尤you其qi對dui於yu極ji性xing樣yang品pin而er言yan,未wei封feng端duan處chu理li的de色se譜pu柱zhu分fen離li效xiao果guo較jiao差cha。
目前市場上主要以反相色譜為主,約占80%的比例。
固定相極性
流動相極性
出峰順序
反相吸附色譜
非極性
強極性(水、甲醇、乙腈等)
強極性物質先出峰
正相吸附色譜
極性
弱極性(己烷、庚烷等)
弱極性物質先出峰
柱長及內徑的選擇:
長度的選擇:柱越長,總柱效越高(n值越大),柱越長,分析時間也越長。250―300mm是最普遍的柱長,實驗室一半以上的工作都是采用此規格柱子,一般用來分離l0到50個組份的中等至複雜混合物;500―600mm,要求較高分辨率的應用,―般用來分離大於50個組份或包含有難分離物質的複雜樣品程序升溫分析。
內徑:柱zhu效xiao率lv與yu柱zhu半ban徑jing平ping方fang成cheng反fan比bi,內nei徑jing越yue小xiao柱zhu效xiao越yue高gao,但dan內nei徑jing越yue大da,柱zhu容rong量liang也ye增zeng加jia,允yun許xu進jin樣yang量liang就jiu越yue多duo。當dang進jin樣yang量liang超chao過guo柱zhu容rong量liang時shi,則ze因yin柱zhu內nei每mei塊kuai理li論lun板ban內nei不bu能neng建jian立li真zhen正zheng的de平ping衡heng,將jiang會hui導dao致zhi色se譜pu蜂feng畸ji變bian,柱zhu分fen辨bian率lv降jiang低di,重zhong現xian性xing不bu好hao。因yin此ci對dui於yu複fu雜za樣yang品pin需xu要yao精jing確que分fen離li,必bi須xu使shi用yong小xiao內nei徑jing柱zhu子zi。另ling一yi方fang麵mian若ruo樣yang品pin中zhong存cun在zai具ju有you很hen不bu相xiang同tong濃nong度du組zu份fen化hua合he物wu,為wei了le增zeng加jia樣yang品pin容rong量liang就jiu必bi須xu使shi用yong內nei徑jing大da的de柱zhu子zi,目mu前qian實shi驗yan室shi使shi用yong最zui常chang見jian的de柱zhu子zi內nei徑jing一yi般ban是shi4.6mm。
一般選擇原則:分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱;對於高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱,以改善峰形,延長色譜柱使用壽命等。
xianzaishangpinhuadeyexiangsepuzhulinlangmanmu,genjusepuzhudecanshukeyigeiwomentigongyigechubudexuanze,danyouyugegeyiqichangshangdetianliaojishuhejianhejishudouyouchayi,jishidoushiC18柱,同一品牌不同係列都有不同的功能,有能耐受低pH值的、有耐高溫的、有(you)適(shi)合(he)堿(jian)性(xing)樣(yang)品(pin)的(de)等(deng)等(deng)。所(suo)以(yi)在(zai)選(xuan)擇(ze)色(se)譜(pu)柱(zhu)前(qian)要(yao)好(hao)好(hao)研(yan)究(jiu)色(se)譜(pu)柱(zhu)參(can)數(shu),仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)色(se)譜(pu)柱(zhu)說(shuo)明(ming)書(shu),才(cai)能(neng)找(zhao)到(dao)合(he)適(shi)的(de)色(se)譜(pu)柱(zhu)和(he)適(shi)宜(yi)的(de)分(fen)離(li)方(fang)法(fa)。
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