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色(se)譜(pu)雙(shuang)峰(feng)指(zhi)的(de)是(shi)明(ming)明(ming)是(shi)同(tong)一(yi)種(zhong)物(wu)質(zhi)，但(dan)在(zai)色(se)譜(pu)圖(tu)中(zhong)卻(que)呈(cheng)現(xian)雙(shuang)峰(feng)，讓(rang)實(shi)驗(yan)人(ren)員(yuan)誤(wu)認(ren)為(wei)含(han)有(you)兩(liang)種(zhong)物(wu)質(zhi)。那(na)麼(me)，出(chu)現(xian)雙(shuang)峰(feng)的(de)原(yuan)因(yin)主(zhu)要(yao)有(you)哪(na)些(xie)呢(ne)？今天小編就和大家聊一聊，液相色譜出現“雙峰”的原因。
在HPLC分fen析xi中zhong，在zai色se譜pu柱zhu正zheng常chang，樣yang品pin濃nong度du適shi宜yi，分fen析xi方fang法fa合he適shi，色se譜pu峰feng在zai出chu峰feng時shi間jian較jiao短duan的de條tiao件jian下xia，峰feng型xing應ying對dui稱cheng而er尖jian銳rui。但dan在zai實shi際ji操cao作zuo中zhong，如ru果guo對dui樣yang品pin不bu了le解jie，前qian處chu理li不bu恰qia當dang或huo者zhe分fen析xi方fang法fa不bu合he理li等deng，會hui出chu現xian峰feng形xing不bu正zheng常chang的de情qing況kuang，其qi中zhong雙shuang峰feng現xian象xiang就jiu是shi液ye相xiang色se譜pu中zhong常chang見jian的de問wen題ti之zhi一yi。
出現色譜雙峰的原因一般有以下幾種原因：色譜柱的問題、溶劑、進樣量、樣品特性，以及pH。
色譜柱
如(ru)果(guo)在(zai)樣(yang)品(pin)分(fen)析(xi)時(shi)發(fa)現(xian)每(mei)個(ge)色(se)譜(pu)峰(feng)都(dou)有(you)雙(shuang)峰(feng)出(chu)現(xian)，尤(you)其(qi)在(zai)采(cai)用(yong)單(dan)一(yi)純(chun)物(wu)質(zhi)時(shi)，則(ze)可(ke)以(yi)確(que)定(ding)是(shi)色(se)譜(pu)柱(zhu)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)了(le)，一(yi)般(ban)是(shi)柱(zhu)頭(tou)受(shou)損(sun)或(huo)者(zhe)柱(zhu)頭(tou)固(gu)定(ding)相(xiang)汙(wu)染(ran)引(yin)起(qi)的(de)。
ruguojinyangliangshao，yuanlaisepuzhuzhengchang，sepufengdexingzhuangduoweiyidafengdaiyixiaofeng，buyidingtuowei，zheyibanyingshizhutoushoudu，jiangsepuzhufanguolaijie，yongliudongxiangchongxihuosuanxihuoqitarongji，jiangduzaizhutoudecanliuwuchongdiao，zaifanguolai，yibanqingkuangxiajiuxingle。dangranbufanchong，zhengchongyoushiyehuizhengchangde。
如ru果guo峰feng拖tuo尾wei，雙shuang峰feng強qiang弱ruo相xiang差cha不bu大da，柱zhu頭tou固gu定ding相xiang變bian髒zang或huo流liu失shi可ke能neng性xing更geng大da，這zhe時shi可ke以yi將jiang進jin樣yang頭tou擰ning開kai，將jiang微wei孔kong濾lv片pian超chao聲sheng，柱zhu頭tou刮gua去qu一yi部bu分fen填tian料liao，重zhong新xin填tian上shang新xin填tian料liao擰ning緊jin，不bu過guo這zhe個ge對dui技ji術shu要yao求qiu較jiao高gao且qie不bu能neng經jing常chang做zuo，否fou則ze用yong不bu了le幾ji次ci，色se譜pu柱zhu就jiu會hui應ying柱zhu效xiao降jiang低di而er報bao廢fei。
如果上述不能解決問題，可能是柱塌陷造成的，此時需要更換色譜柱。
溶劑問題
目前HPLC分析多為反相色譜，流動相多為甲醇、乙腈、shui，jiagezhongtianjiajiyigaishanfenlixingneng。yangpinyibanyongyuliudongxiangxiangrongderongjirongjie，zuijiaderongjiefangfashiyongliudongxiangrongjie。zaishijifenxizhong，youshihouweileyangpinderongjiexinghuowendingxingjiaruleyidiandehuanchongye，huanchongyedesuanjianxingkenenghuidaozhiyangpinzhuanhua，congerchanshengshuangfengxianxiang。cishixuyaogenghuanhuanchongye，tiaozhengrongjipH值，或者用流動相配置樣品。
此外，樣品要現配現用，避免樣品溶解液的有機相比例、pH值發生變化而導致的溶劑效應。
進樣量
當用溶劑極性強度大的試劑，如純甲醇、純乙腈，純乙醇，而分析體係中以水為主時，如果樣品進樣量大，如定量管為20ul，此時單一的純物質會出現雙峰，第二峰比第一峰小(每次都不太一樣)，且拖尾，保留時間會提前(相對進樣量少而言)，將jiang進jin樣yang量liang減jian少shao一yi半ban以yi上shang，峰feng型xing將jiang變bian為wei正zheng常chang。這zhe是shi樣yang品pin的de溶rong劑ji與yu流liu動dong相xiang極ji性xing相xiang差cha太tai大da，而er流liu動dong相xiang來lai不bu及ji將jiang其qi稀xi釋shi達da到dao平ping衡heng造zao成cheng的de，此ci情qing況kuang下xia需xu要yao減jian少shao進jin樣yang量liang。
另一個原因是，進樣量不一定大，但絕對量很大，色譜圖上的雙峰緊靠在一起，基本上齊高，不拖尾(如果出峰很快，也可能是色譜柱問題)。將樣品稀釋再進樣就可以了，這是由於進樣量過大，色譜柱過載造成的。
樣品特性
有you些xie樣yang品pin由you於yu其qi化hua學xue結jie構gou的de特te點dian，存cun在zai互hu變bian異yi構gou現xian象xiang，而er這zhe種zhong互hu變bian異yi構gou體ti無wu法fa分fen開kai，而er是shi以yi一yi個ge動dong態tai平ping衡heng存cun在zai。在zai色se譜pu分fen析xi時shi，在zai一yi個ge特te定ding的de條tiao件jian下xia(如pH值、流動相極性、溫度等)，一種物質將出現雙峰，雙峰靠的很近，基本齊高，不拖尾，條件稍一變化，尤其pH，雙峰現象將消失，如紅黴素等。
有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰，但在LC-MS下，用質譜檢測器，其質譜的總離子流圖上較明顯，如農藥啶蟲眯(吡蟲清)。
pH值
體係pH值對色譜雙峰的影響出現在各個環節上(前麵已經提到)，尤其在緩衝液流動相平衡過程中其影響更為明顯。當連續進樣時，受pH的連續變化影響會經常遇到這種雙峰的情況。另外，在樣品分析時，流動相的pH盡量遠離被分析物的等電點，否則也容易引起雙峰的產生。在用離子對試劑分析時，選擇不好條件也會容易引起雙峰的產生。
HPLC分析中，在色譜柱正常，樣品靈敏度足夠，分析方法合適，色譜峰在出峰時間較短的條件下（不包括梯度），fengxingyingduichengerjianrui。danshi，zaiduiyangpinlejiechengdubugou，fangfabutuo，yangpinchulifangfajijinyangfangshibuhelixia，huichuxiangezhongyixiangbudaodewenti，erduisepufengnanyizuochuhelidejieshi，youqiduiyuxinshougengshiruci，suoyi，lejiemeizhongguifengchuxiandeyuanyinduiwomendefenxigongzuoshifeichangzhongyaode。
文章來源：藥物分析化學社
文章（文字）來源：網絡
