液相色譜對於多數人來說都是很好上手的儀器了，但是就算是用過幾年、經驗豐富的分析員都會習慣於一些錯誤的操作（師傅教錯了嗎圖片），經常導致一些儀器故障。
fangbiankuaijiedefenxiguochengguranzhongyao，danshiweileduozuoyangpinerhulveleyixiebibukeshaodebuzhou，wangwangdebuchangshi，naxiecaozuobunengzuo？naxielanerbunengtou
？naxiexiaogailvdeguzhangshifumeijiaozenmeban
？yexiangshiyongguochengzhongyounasidaguanjianyinsuyaozhuyi？benwenyiyigaosunio！

流動相不過濾

因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞
、密封環、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內蒸餾

，而常用的方法是濾過
，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。

使用後沒有及時清洗泵

liudongxiangbuyinghanyourenhefushixingwuzhi，hanyouhuanchongyedeliudongxiangbuyingbaoliuzaibengnei，youqishizaitingbengguoyehuogengchangshijiandeqingkuangxia。ruguojianghanhuanchongyedeliudongxiangliuzaibengnei，youyuzhengfahuoxielou，shenzhizhishiyouyurongyedejingzhi，jiukenengxichuyandeweixijingti，zhexiejingtijiangheshangshugutiweiliyiyangsunhuaimifenghuanhezhusaideng。yinci
，bixubengruchunshuijiangbengchongfenqingxihou，zaihuanchengshiheyusepuzhubaocunheyouliyubengweihuderongji（對於反相鍵合矽膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。

流動相走空

泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完
，否則空泵運轉也會磨損柱塞
、缸體或密封環，最終產生漏液。

沒有流動相流出
，又無壓力指示怎麼辦？

可能是泵內有大量氣體

，這時可打開泄壓閥
，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉，將氣泡排盡
，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環磨損，需更換。

壓力和流量不穩？

原因可能是氣泡
，需要排除；huozheshidanxiangfaneiyouyiwu，kexiexiadanxiangfa，jinrubingtongneichaoshengqingxi。youshikenengshishalvbangneiyouqipao
，huobeiyandeweixijinglihuozishengdeweishengwubufendusai，zheshi
，kexiexiashalvbangjinruliudongxiangneichaoshengchuqipao，huojiangshalvbangjinruxisuan（如4mol/L硝酸）內迅速除去微生物
，或將鹽溶解
，再立即清洗。

壓力為啥過高或過低？

可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應逐段進行。

在進行梯度洗脫時，由於多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題
，必須充分重視。


PS：在(zai)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)中(zhong)對(dui)組(zu)分(fen)複(fu)雜(za)的(de)樣(yang)品(pin)采(cai)用(yong)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)的(de)方(fang)法(fa)。在(zai)同(tong)一(yi)個(ge)分(fen)析(xi)周(zhou)期(qi)中(zhong)
，按(an)一(yi)定(ding)程(cheng)序(xu)不(bu)斷(duan)改(gai)變(bian)流(liu)動(dong)相(xiang)的(de)濃(nong)度(du)配(pei)比(bi)，稱(cheng)為(wei)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)。從(cong)而(er)可(ke)以(yi)使(shi)一(yi)個(ge)複(fu)雜(za)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)性(xing)質(zhi)差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)的(de)組(zu)分(fen)能(neng)按(an)各(ge)自(zi)適(shi)宜(yi)的(de)容(rong)量(liang)因(yin)子(zi)k達到良好的分離目的。

梯度洗脫的優點：1.縮短分析周期


；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。

梯度洗脫的流動相選擇不當

要yao注zhu意yi溶rong劑ji的de互hu溶rong性xing，不bu相xiang混hun溶rong的de溶rong劑ji不bu能neng用yong作zuo梯ti度du洗xi脫tuo的de流liu動dong相xiang。有you些xie溶rong劑ji在zai一yi定ding比bi例li內nei混hun溶rong，超chao出chu範fan圍wei後hou就jiu不bu互hu溶rong，使shi用yong時shi更geng要yao引yin起qi注zhu意yi。當dang有you機ji溶rong劑ji和he緩huan衝chong液ye混hun合he時shi，還hai可ke能neng析xi出chu鹽yan的de晶jing體ti，尤you其qi使shi用yong磷lin酸suan鹽yan時shi需xu特te別bie小xiao心xin。

忽略的空白梯度洗脫

梯ti度du洗xi脫tuo所suo用yong的de溶rong劑ji純chun度du要yao求qiu更geng高gao，以yi保bao證zheng良liang好hao的de重zhong現xian性xing。進jin行xing樣yang品pin分fen析xi前qian必bi須xu進jin行xing空kong白bai梯ti度du洗xi脫tuo，以yi辨bian認ren溶rong劑ji雜za質zhi峰feng

，因yin為wei弱ruo溶rong劑ji中zhong的de雜za質zhi富fu集ji在zai色se譜pu柱zhu頭tou後hou會hui被bei強qiang溶rong劑ji洗xi脫tuo下xia來lai。用yong於yu梯ti度du洗xi脫tuo的de溶rong劑ji需xu徹che底di脫tuo氣qi，以yi防fang止zhi混hun合he時shi產chan生sheng氣qi泡pao。

忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化

混hun合he溶rong劑ji的de粘zhan度du常chang隨sui組zu成cheng而er變bian化hua，因yin而er在zai梯ti度du洗xi脫tuo時shi常chang出chu現xian壓ya力li的de變bian化hua。例li如ru甲jia醇chun和he水shui粘zhan度du都dou較jiao小xiao
，當dang二er者zhe以yi相xiang近jin比bi例li混hun合he時shi粘zhan度du增zeng大da很hen多duo，此ci時shi的de柱zhu壓ya大da約yue是shi甲jia醇chun或huo水shui為wei流liu動dong相xiang時shi的de兩liang倍bei。因yin此ci要yao注zhu意yi防fang止zhi梯ti度du洗xi脫tuo過guo程cheng中zhong壓ya力li超chao過guo輸shu液ye泵beng或huo色se譜pu柱zhu能neng承cheng受shou的de最zui大da壓ya力li。

六通閥的正確使用和維護

①樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾
，以減少微粒對進樣閥的磨損。

②轉動閥芯時不能太慢
，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；再轉到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。

③為防止緩衝鹽和樣品殘留在進樣閥中，每次分析結束後應衝洗進樣閥。通常可用水衝洗
，或先用能溶解樣品的溶劑衝洗，再用水衝洗。

色譜柱的使用和維護

色譜柱的正確使用和維護十分重要
，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題

，以維護色譜柱。


調節流速太快

避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會衝動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩（如前所述）。

反衝色譜柱

一般說來色譜柱不能反衝，隻有生產者指明該柱可以反衝時
，才可以反衝除去留在柱頭的雜質。否則反衝會迅速降低柱效。

預柱和保護柱

選擇使用適宜的流動相（尤其是pH）

，以(yi)避(bi)免(mian)固(gu)定(ding)相(xiang)被(bei)破(po)壞(huai)。有(you)時(shi)可(ke)以(yi)在(zai)進(jin)樣(yang)器(qi)前(qian)麵(mian)連(lian)接(jie)一(yi)預(yu)柱(zhu)
，分(fen)析(xi)柱(zhu)是(shi)鍵(jian)合(he)矽(gui)膠(jiao)時(shi)，預(yu)柱(zhu)為(wei)矽(gui)膠(jiao)，可(ke)使(shi)流(liu)動(dong)相(xiang)在(zai)進(jin)入(ru)分(fen)析(xi)柱(zhu)之(zhi)前(qian)預(yu)先(xian)被(bei)矽(gui)膠(jiao)“飽和”，避免分析柱中的矽膠基質被溶解。

避(bi)免(mian)將(jiang)基(ji)質(zhi)複(fu)雜(za)的(de)樣(yang)品(pin)尤(you)其(qi)是(shi)生(sheng)物(wu)樣(yang)品(pin)直(zhi)接(jie)注(zhu)入(ru)柱(zhu)內(nei)，需(xu)要(yao)對(dui)樣(yang)品(pin)進(jin)行(xing)預(yu)處(chu)理(li)或(huo)者(zhe)在(zai)進(jin)樣(yang)器(qi)和(he)色(se)譜(pu)柱(zhu)之(zhi)間(jian)連(lian)接(jie)一(yi)保(bao)護(hu)柱(zhu)。保(bao)護(hu)柱(zhu)一(yi)般(ban)是(shi)填(tian)有(you)相(xiang)似(si)固(gu)定(ding)相(xiang)的(de)短(duan)柱(zhu)。保(bao)護(hu)柱(zhu)可(ke)以(yi)而(er)且(qie)應(ying)該(gai)經(jing)常(chang)更(geng)換(huan)。

小概率故障如何排除
？


【1】泵壓跳動
，跳動範圍10bar左右。

解決方法：

1、原先小白頭有點髒，更換後尚未解決；

2、將主動閥上的閥芯取出後，發現有類似氣泡存在，浸入甲醇-水溶液超聲5min，以試著去除氣泡
，重新將其安裝後再觀察
，仍未解決
；

3、更換新的閥芯，將其安裝後，不再有跳動，觀察一段時間後比較平穩
，成功解決。

【2】發生故障：

①plug homing over pressure

② 灌注及設流速時均無壓力也不見液體流出

③檢測器光閘不能複位④進完大濃度樣品後，進空白相應位置也出峰。


可能原因：

①在線過濾器堵了

②泵頭下單向閥堵了

③有可能是檢測池髒了，也有可能是光路有點堵，再不行可能是燈壽命到了

④小抹布髒了
，需要換


解決方法：

①在線過濾器卸下來
，置燒杯，加純化水煮沸5-10分鍾後甲醇超一下一般就可以了，如果還堵的話就拿稀硝酸泡，還不行的話就換新的了，這本身是個消耗品

②把泵頭下單向閥卸下來
，兩個都有可能堵，剛卸下來時豎著在耳邊搖一搖是聽不到聲音的。簡單的拿洗耳球把單向閥吹吹就行了（注意方向），吹了沒反應可以拿溶劑超聲
，但不可水煮，一般超至在耳邊搖能聽見聲音就不影響實驗

③先用溶劑把檢測池衝衝，用啥試具體樣品而定
；若衝了還不行，把檢測池卸下
，看燈能量，若能量還可以（有個幾千），kenengdeqingxiguanglule。diyiciqingxidehuajianyihaishijiaogongchengshilai，yinweidaiqinglidebujianzaijianceqidezuixiafang
，youyigeheisepianpian，zhongjianyouyitiaofeng
，erqienayikuaideluosidoushibajiaode，xieqilaihenmafan。

④把5個樣品盤都拿出來，可以看見裏麵有一個黑色突起（看不清用手電筒），平時進樣針就是從那個地方吸樣的。手伸進去就可以卸下來
，裏麵有一個小白圈圈（用多了自然就黑了）
，換一個新的就行了，買儀器時一般配有10個。


液相色譜在使用過程中主要有四大關鍵因素需要注意：


液相色譜儀本身


對(dui)於(yu)儀(yi)器(qi)本(ben)身(shen)一(yi)般(ban)不(bu)會(hui)有(you)問(wen)題(ti)，特(te)別(bie)是(shi)剛(gang)買(mai)回(hui)來(lai)的(de)新(xin)儀(yi)器(qi)。對(dui)於(yu)儀(yi)器(qi)本(ben)身(shen)最(zui)重(zhong)要(yao)的(de)就(jiu)是(shi)儀(yi)器(qi)的(de)校(xiao)驗(yan)，剛(gang)買(mai)回(hui)來(lai)的(de)儀(yi)器(qi)一(yi)般(ban)都(dou)是(shi)由(you)賣(mai)家(jia)先(xian)對(dui)儀(yi)器(qi)做(zuo)係(xi)統(tong)的(de)確(que)認(ren)工(gong)作(zuo)（包括IQ、PQ、OQ），querenshunlitongguohou，zaiqingguojiahuoshengjiyiqijiandingjudelaixiaoyan
，jiandinghegehoujiukeyifangxinshiyongle，chucizhiwai，yixiezuodehaodegongsimeibannianhuiduiyiqijinxingyicideneibuxiaoyan
，mudejiushiweilebaozhengyiqidezhengchangkeyunxingzhuangtai。


色譜條件

色譜條件一般包括流動相、色譜柱、檢測波長
、流速及進樣量。流動相就涉及到配製流動相所用到的水和試劑試液
，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大於18.2兆歐級別，試劑試液要求用色譜級別的，原因為防止水和試劑試液中的雜質對色譜結果的幹擾。

色se譜pu柱zhu會hui因yin不bu同tong的de品pin種zhong而er有you不bu同tong的de要yao求qiu，但dan每mei根gen色se譜pu柱zhu都dou有you它ta的de清qing洗xi要yao求qiu
，這zhe個ge在zai色se譜pu柱zhu說shuo明ming書shu上shang都dou可ke以yi找zhao到dao
，一yi定ding要yao根gen據ju上shang麵mian的de要yao求qiu進jin行xing，否fou則ze會hui造zao成cheng色se譜pu柱zhu效xiao下xia降jiang和he色se譜pu柱zhu的de使shi用yong壽shou命ming縮suo短duan，檢jian測ce波bo長chang也ye會hui因yin品pin種zhong的de不bu同tong有you不bu同tong的de要yao求qiu。這zhe裏li需xu要yao指zhi出chu的de是shi要yao注zhu意yi觀guan察cha檢jian測ce器qi氘dao燈deng能neng量liang的de變bian化hua，比bi如ru基ji線xian波bo動dong大da，活huo性xing成cheng分fen的de響xiang應ying值zhi突tu然ran變bian小xiao等deng，都dou有you可ke能neng是shi氘dao燈deng的de能neng量liang不bu足zu所suo引yin起qi的de
，氘dao燈deng一yi般ban建jian議yi使shi用yong800小時，但實際上使用時間不止，可根據實際情況更換。

流速也因品種的不同而不同，一般為1.0ml/min
，流速是不可隨意改動的，特別是作為QC人ren員yuan
，但dan是shi作zuo為wei研yan發fa人ren員yuan，有you時shi為wei了le摸mo索suo條tiao件jian或huo進jin行xing方fang法fa耐nai用yong性xing驗yan證zheng，會hui對dui流liu速su進jin行xing改gai變bian以yi評ping價jia方fang法fa的de適shi用yong性xing。對dui於yu進jin樣yang量liang因yin不bu同tong的de品pin種zhong也ye有you不bu同tong規gui定ding
，進jin樣yang量liang這zhe塊kuai現xian在zai都dou使shi用yong自zi動dong進jin樣yang
，所suo以yi進jin樣yang精jing密mi度du都dou很hen好hao，不bu需xu強qiang調tiao什shen麼me。

操作人員

首shou先xian
，作zuo為wei液ye相xiang操cao作zuo人ren員yuan，一yi定ding要yao認ren真zhen學xue習xi液ye相xiang的de說shuo明ming書shu，掌zhang握wo液ye相xiang硬ying件jian和he軟ruan件jian的de操cao作zuo，掌zhang握wo日ri常chang的de維wei護hu保bao養yang
，掌zhang握wo最zui基ji礎chu故gu障zhang的de排pai除chu和he維wei修xiu。

yibanyexiangdecaozuoguichengyeshiyoucaozuorenyuanqicaode，suoyizhiyaoyangeanzhaocaozuoyaoqiujinxingcaozuo，yibanbuhuichuxianwenti。dangran啫lixuyaotebiezhichudeshiduiyuyexiangderichangweihubaoyanghenzhongyao，biruliudongxiangdeguolv、脫氣、泵密封墊的清洗
、係統管路的清洗
、溶劑過濾頭的清洗等，倘若不堅持，很容易導致色譜柱堵塞、係統壓力過大、色譜峰異常等不必要的故障
，浪費時間。

其次
，操作人員在配製液相分析用樣品溶液時，最好由同一個人單獨完成，以免不必要的偶然誤差。

液相安裝環境


液相色譜儀應盡量安裝於水平、遠離振動、dianciganraodewuneidetaimianshang，youtiaojiandehuajinliangjiangyexiangshujuchulixitongfengekai，yigeshifangzhisepujixianzaoyinpianda，jixianbuwendeng，yigeshiweijianshaoduirentideweihai。


文章（文字）、封麵圖片來源：化學掌中寶。