如ru果guo在zai樣yang品pin分fen析xi時shi發fa現xian每mei個ge色se譜pu峰feng都dou有you雙shuang峰feng出chu現xian，尤you其qi在zai采cai用yong單dan一yi純chun物wu質zhi時shi
，則ze可ke以yi確que定ding是shi色se譜pu柱zhu出chu現xian問wen題ti了le，一yi般ban是shi柱zhu頭tou受shou損sun或huo者zhe柱zhu頭tou固gu定ding相xiang汙wu染ran引yin起qi的de。

目前HPLC分析多為反相色譜，流動相多為甲醇、乙腈
、水shui，加jia各ge種zhong添tian加jia劑ji以yi改gai善shan分fen離li性xing能neng。樣yang品pin一yi般ban用yong與yu流liu動dong相xiang相xiang溶rong的de溶rong劑ji溶rong解jie，最zui佳jia的de溶rong解jie方fang法fa是shi用yong流liu動dong相xiang溶rong解jie。在zai實shi際ji分fen析xi中zhong
，有you時shi候hou為wei了le樣yang品pin的de溶rong解jie性xing或huo穩wen定ding性xing加jia入ru了le一yi點dian的de緩huan衝chong液ye
，緩huan衝chong液ye的de酸suan堿jian性xing可ke能neng會hui導dao致zhi樣yang品pin轉zhuan化hua
，從cong而er產chan生sheng雙shuang峰feng現xian象xiang。此ci時shi需xu要yao更geng換huan緩huan衝chong液ye，調tiao整zheng溶rong劑jipH值
，或者用流動相配置樣品。

當用溶劑極性強度大的試劑，如純甲醇、純乙腈
，純乙醇

，而分析體係中以水為主時，如果樣品進樣量大，如定量管為20ul
，此時單一的純物質會出現雙峰
，第二峰比第一峰小(每次都不太一樣)
，且拖尾
，保留時間會提前(相對進樣量少而言)，jiangjinyangliangjianshaoyibanyishang，fengxingjiangbianweizhengchang。zheshiyangpinderongjiyuliudongxiangjixingxiangchataida
，erliudongxianglaibujijiangqixishidadaopinghengzaochengde，ciqingkuangxiaxuyaojianshaojinyangliang。

有you些xie樣yang品pin由you於yu其qi化hua學xue結jie構gou的de特te點dian，存cun在zai互hu變bian異yi構gou現xian象xiang，而er這zhe種zhong互hu變bian異yi構gou體ti無wu法fa分fen開kai，而er是shi以yi一yi個ge動dong態tai平ping衡heng存cun在zai。在zai色se譜pu分fen析xi時shi
，在zai一yi個ge特te定ding的de條tiao件jian下xia(如pH值
、流動相極性

、溫度等)，一種物質將出現雙峰，雙峰靠的很近
，基本齊高，不拖尾，條件稍一變化，尤其pH，雙峰現象將消失
，如紅黴素等。

體係pH值對色譜雙峰的影響出現在各個環節上(前麵已經提到)，尤其在緩衝液流動相平衡過程中其影響更為明顯。當連續進樣時，受pH的連續變化影響會經常遇到這種雙峰的情況。另外，在樣品分析時，流動相的pH盡量遠離被分析物的等電點，否則也容易引起雙峰的產生。在用離子對試劑分析時，選擇不好條件也會容易引起雙峰的產生。