不少做色譜分離試驗的人遇到過這樣的情形:不慎未及時補充流動相,泵將溶劑瓶中的流動相吸幹了,HPLC係(xi)統(tong)由(you)此(ci)而(er)停(ting)止(zhi)工(gong)作(zuo)了(le)。如(ru)此(ci)情(qing)況(kuang)是(shi)否(fou)會(hui)損(sun)壞(huai)色(se)譜(pu)柱(zhu)?泵(beng)是(shi)否(fou)已(yi)將(jiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)中(zhong)所(suo)有(you)流(liu)動(dong)相(xiang)都(dou)排(pai)幹(gan)了(le)?色(se)譜(pu)柱(zhu)還(hai)能(neng)使(shi)用(yong)嗎(ma)?事(shi)實(shi)上(shang),如(ru)果(guo)泵(beng)將(jiang)溶(rong)劑(ji)瓶(ping)中(zhong)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)吸(xi)幹(gan),並(bing)不(bu)會(hui)造(zao)成(cheng)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)損(sun)壞(huai)。即(ji)使(shi)泵(beng)中(zhong)充(chong)滿(man)了(le)空(kong)氣(qi),泵(beng)也(ye)不(bu)會(hui)將(jiang)空(kong)氣(qi)排(pai)入(ru)色(se)譜(pu)柱(zhu)。因(yin)為(wei)泵(beng)隻(zhi)能(neng)輸(shu)送(song)液(ye)體(ti),而(er)不(bu)能(neng)輸(shu)送(song)空(kong)氣(qi)。相(xiang)比(bi)之(zhi)下(xia),另(ling)一(yi)個(ge)更(geng)可(ke)能(neng)發(fa)生(sheng)的(de)情(qing)況(kuang)是(shi)忘(wang)記(ji)蓋(gai)上(shang)色(se)譜(pu)柱(zhu)兩(liang)端(duan)的(de)密(mi)封(feng)蓋(gai)或(huo)蓋(gai)子(zi)太(tai)鬆(song)而(er)使(shi)色(se)譜(pu)柱(zhu)變(bian)幹(gan)。同(tong)樣(yang),整(zheng)個(ge)色(se)譜(pu)柱(zhu)幹(gan)涸(he)的(de)情(qing)況(kuang)不(bu)太(tai)容(rong)易(yi)發(fa)生(sheng),多(duo)半(ban)可(ke)能(neng)隻(zhi)是(shi)色(se)譜(pu)柱(zhu)兩(liang)端(duan)的(de)幾(ji)個(ge)毫(hao)米(mi)變(bian)幹(gan)了(le),因(yin)揮(hui)發(fa)掉(diao)所(suo)有(you)溶(rong)劑(ji)是(shi)色(se)譜(pu)柱(zhu)變(bian)幹(gan)需(xu)要(yao)相(xiang)當(dang)長(chang)的(de)時(shi)間(jian)。即(ji)使(shi)色(se)譜(pu)柱(zhu)真(zhen)的(de)變(bian)幹(gan)了(le),也(ye)不(bu)一(yi)定(ding)就(jiu)不(bu)可(ke)救(jiu)藥(yao)了(le)。可(ke)以(yi)嚐(chang)試(shi)用(yong)一(yi)種(zhong)完(wan)全(quan)脫(tuo)氣(qi)的(de)、表麵張力低的溶劑(如經氦氣脫氣的甲醇)衝洗色譜柱以除去氣體。較低的表麵張力有助於浸潤填料表麵;已脫氣的溶劑應該能夠溶解並去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要(以1mL/min的流速)衝一個小時或更多的時間被徹底浸潤,恢複到正常狀態。
2. 使用PEEK(polyetheretherketone)管路和接頭需要注意什麼問題?
如果經常需要改變流路或更換不同品牌的色譜柱,使用PEEK材料製成的管路和接頭會非常方便。PEEK管路容易連接;PEEK接頭不僅無需工具,手擰即可固定,而且容易調節錐箍之外的管路長度,方便與不同品牌或規格的色譜柱相連接。
使用此類材料的管路需要注意的是:PEEK對鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。雖然未觀察到上述溶劑溶解PEEK材料的明顯跡象,但PEEK遇到上述溶劑會變脆。另一個西藥考慮的因素是壓力限。不鏽鋼管可耐受6000psi的壓力,但PEEK管隻能耐受近4000psi(但多數HPLC應用係統壓力不會超過3000psi)。
使用PEEK接頭時則無需擔心接頭耐溶劑性能,因為接頭幾乎或很少與溶劑直接接觸。但手擰固定的PEEK接頭壓力限低於不鏽鋼管,因而壓力太高時,可能會使接頭在管路上滑動而產生死體積或漏液。
3. 如何預防液相泵的故障:
要保持泵的良好操作性能,必須維護係統的清潔,保證溶劑和試劑的質量,對流動相進行過濾和脫氣.下麵列出預防泵故障的幾項措施:
1).用高質量試劑和HPLC級溶劑;
2)、過濾流動相和溶劑;
3)、脫氣;
4)、每天開始使用時放空排氣,工作結束後從泵中洗去緩衝液;
5)、不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中;
6)、定期更換墊圈;
7)、需要時加潤滑油;
8)、查閱有關泵操作手冊中的其它建議。
處於良好操作狀態的泵,應該能使色譜圖上的基線平穩;保留時間的重複性好。在等度洗脫時壓力波動小於2%。梯度洗脫時壓力變化應是緩慢和平穩的。
為了使故障發生後盡快排除,平時應常備密封、單向閥(入口與出口)、泵頭裝置、各式接頭、保險絲等部件,以及更換工具。
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