一、矽膠基質填料
1、正相色譜 正相色譜用的固定相通常為矽膠(Silica)以及其他具有極性官能團胺基團,如(NH2,APS)和氰基團(CN,CPS)的鍵合相填料。
由於矽膠表麵的矽羥基(SiOH)或(huo)其(qi)他(ta)極(ji)性(xing)基(ji)團(tuan)極(ji)性(xing)較(jiao)強(qiang),因(yin)此(ci),分(fen)離(li)的(de)次(ci)序(xu)是(shi)依(yi)據(ju)樣(yang)品(pin)中(zhong)各(ge)組(zu)分(fen)的(de)極(ji)性(xing)大(da)小(xiao),即(ji)極(ji)性(xing)較(jiao)弱(ruo)的(de)組(zu)份(fen)最(zui)先(xian)被(bei)衝(chong)洗(xi)出(chu)色(se)譜(pu)柱(zhu)。正(zheng)相(xiang)色(se)譜(pu)使(shi)用(yong)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)極(ji)性(xing)相(xiang)對(dui)比(bi)固(gu)定(ding)相(xiang)低(di),如(ru)正(zheng)已(yi)烷(wan)(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
2、反向色譜 反向色譜用的填料常是以矽膠為基質,表麵鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強,通常為水、緩衝液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分最先被衝洗出,而極性弱的組分會在色譜柱上有更強的保留。
常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
二、聚合物填料 聚合物填料多為聚苯乙烯―二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等,其重要優點是在PH值為1―14均可使用。相對於矽膠基質的C18填料,這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物對蛋白質等樣品的分離非常有效。現有的聚合物填料的缺點是相對矽膠基質填料,色譜柱柱效較低。
三、其它無機填料 其它HPLCdewujitianliaosepuzhuyeyijingshangpinhuayouyuqiteshudexingzhi,yibanjinxianyuteshudeyongtu。ru,shimohuatanheizhengzhujianchengweifanxiangsepuzhutianliao。zhezhongtianliaodefenlibutongyuguijiaojizhiwanjijianhexiang,shimohuatandebiaomianjishibaoliudejichu,buzaixuqitadebiaomiangaixing。gaizhutianliaoyibanbiwanjijianhexiangguijiaohuoduokongjuhewutianliaodebaoliunengligengqiang。shimohuatankeyongyufenlimouxiejiheyigouti,youyuzaiHPLC流動相中不會被溶解,這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可以用於HPLC。氧化鋁微粒剛性強,可製成穩定的色譜柱柱床,其優點是可以在PH高達12的de流liu動dong相xiang中zhong使shi用yong。但dan由you於yu氧yang化hua鋁lv與yu堿jian性xing化hua合he物wu的de作zuo用yong也ye很hen強qiang,應ying用yong範fan圍wei受shou到dao一yi定ding限xian製zhi,所suo以yi未wei能neng廣guang泛fan應ying用yong。新xin型xing色se譜pu氧yang化hua鋯gao基ji質zhi填tian料liao也ye可ke用yong於yuHPLC。商品化的隻有聚合物塗層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應用PH1-14,溫度可達100℃。由於氧化鋯填料是最近幾年才開始研究,加之麵臨的實驗難度,其重要用途與優勢尚在進行之中。
怎樣選擇填料粒度 目前,商品化的色譜填料粒度從1um到超過30um均有銷售,而目前分析分離主要用3和5um填料進行。填料的粒度主要影響填充柱的兩個參數,即柱效和背壓。粒度越小,柱壓越大,柱壓的增加限製了粒度小於3um的de填tian料liao應ying用yong。在zai相xiang同tong選xuan擇ze性xing條tiao件jian下xia,提ti高gao柱zhu效xiao可ke提ti高gao分fen離li度du,但dan不bu是shi唯wei一yi的de因yin素su。如ru果guo固gu定ding相xiang選xuan擇ze是shi正zheng確que,但dan是shi分fen離li度du不bu夠gou,那na麼me選xuan用yong更geng小xiao的de粒li度du的de填tian料liao是shi很hen有you用yong的de。3um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,3um的色譜柱的背壓卻是5um的2bei。yucitongshi,zhuxiaotigaoyiweizhezaixiangtongtiaojianxiakeyixuanyonggengduandesepuzhu,jixiangtongdetabanshuhuofenlinengli,danshizhuchanggengduan,yisuoduanfenxishijian。lingwai,keyicaiyongdizhanduderongjizuoliudongxianghuozengjiasepuzhudeshiyongwendu,biruyongyijingdaitijiachun,yijiangdisepuzhudeyali。
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