1 氣相色譜(GC)和高效液相色譜法(HPLC)
qixiangsepufazhuyaoshijiangdachangganjunjingguoyixilieyanshenghuadeqianchulihou,weijiexialaidefenxiyanjiutigongjinkenengduodehuaxuezufen。dachangganjundewuranchengdukeyiyongdingkongqixiangsepufalaifenxi,qiyuanlishiliyongshipinmifengxitongdingbudeweishengwudaixiechanwuCO2對微生物進行分析。這種方法對食品質量安全檢測有重大意義。與上述傳統技術相比,此種方法具有檢測速度快、靈敏度高的優點。高效液相色譜法(HPLC)主要是根據離子配對反相層析的原理來分析核酸。HPLC主要是針對DNA片段分離。長鏈DNA所攜帶的磷酸基團比較多,因此會有更多的TEAA與之相融合,其在柱內停留的時間增加。因為乙腈具有親水性,可以通過其而將DNA分離,在具備一定的變性溫度下,可以通過圖譜顯示明顯的吸收峰。該技術具有準確度高、靈敏度高、成本低等優點,可大大提高工作效率。
2 ATP生物發光技術
ATP生物發光技術是近些年來發展較快的微生物快速檢測方法。ATP是活細胞中最普遍的能量代謝產物,為細胞提供各種生理活動所需的能量,而且其在生物體內含量維持在一定的範圍內。ATP含han量liang檢jian測ce的de一yi種zhong方fang法fa是shi熒ying光guang光guang度du法fa,生sheng物wu發fa光guang是shi活huo細xi胞bao在zai熒ying光guang素su酶mei催cui化hua下xia發fa出chu的de熒ying光guang。目mu前qian使shi用yong的de熒ying光guang素su酶mei主zhu要yao來lai源yuan於yu北bei美mei的de螢ying火huo蟲chong,相xiang對dui分fen子zi質zhi量liang為wei62000dedanbaizhi,takeyicuihuayingguangsudeyanghuafanying,zhezhongfanyingdezhongchanwubuwending,henkuaifenjiechanshengyingguang。yuchuantongjiancefangfaxiangbi,butongzhichuzaiyujifenzhongneibiankehuodejiancejieguo,erqieyingguangguangdujishibianxieshide,shiyongfeichangfangbian,shiyongyuxianchangjiance,zhezhongjishukeyiyongyujianceweixiaodewuranwushuipingyijishipinjiagongshebeijiqibiaomiandeqingjiechengdudejiance。
3 PCR檢測技術
聚合酶鏈反應技術即PCR(polymerase chain reaction),該技術是在1971年首先被Kleppe等提出,1985年才作為一種檢測方法獲得認可。PCR檢測技術是一種聚合酶鏈反應,其采用變性―退火―延伸三個步驟使DNA基因能夠在體外實現解旋解鏈,類似於一種體外增加、複製形式。理論上可在2h內將一個DNA分子擴增到106~109倍,采用瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增產物的熒光條帶。
目前PCR技術廣泛用於生命科學的許多學科中。在食品微生物檢測領域,PCR可用於快速檢測食品中的微生物含量。常用的主要有免疫PCR、實時熒光定量PCR、多重PCR、反轉錄PCR和實時定量PCR等。史雲等建立了用於肉及肉製品中大腸杆菌的兩重PCR檢測方法,但該方法需要較長的時間的樣品純化處理,且對操作人員的專業知識的要求也較高。
4 生物傳感器檢測技術
生物傳感器主要是以生物化學傳感技術為基礎,用抗體、酶、細胞等作為識別元件,並與信號轉換器和電子測量儀聯合構成的一種分析工具。目前已經成熟的商品化的傳感器有免疫傳感器、酶傳感器、DNA雜交傳感器、微生物傳感器、分子印跡傳感器等。生物傳感器具有諸多優點,如高靈敏度、高選擇性、較好的穩定性、低成本、且能在複雜的體係中快速在線監測。現在用於信號傳導的方法有表麵聲波傳導、電氣化學方法和光學傳導法。用於食品微生物檢測的主要是免疫傳感器和基因傳感器,原理是利用DNA雜(za)交(jiao)和(he)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)反(fan)應(ying)進(jin)行(xing)檢(jian)測(ce),再(zai)將(jiang)其(qi)轉(zhuan)換(huan)為(wei)光(guang)信(xin)號(hao)或(huo)電(dian)信(xin)號(hao)並(bing)通(tong)過(guo)儀(yi)器(qi)放(fang)大(da)輸(shu)出(chu)。生(sheng)物(wu)傳(chuan)感(gan)器(qi)的(de)分(fen)子(zi)識(shi)別(bie)元(yuan)件(jian)的(de)載(zai)體(ti)可(ke)采(cai)用(yong)多(duo)種(zhong)材(cai)料(liao),利(li)用(yong)較(jiao)多(duo)的(de)是(shi)光(guang)纖(xian)、熒光光度計等。殷湧光等人利用抗體免疫吸附反應,采用一次抗體――kangyuanyiercikangtidejiaxinfajiangjiaotijinfuhekangtizuoweiercikangtidafuduzengjiazhiliang,bingyanchangjiaotijinfuhekangtiyuweishengwudejieheguocheng,fangdahewendingxinhao,congerxianzhutigaojiancejingdu。
5 免疫磁珠技術(IMS)
mianyicizhujishushiyizhongdachangganjundefenlijishu。qiyuanlishiyicizhuweikangtizaiti,cizhuhedachangganjunjiehe,tongguocililaishixianlixueyidongjinerjiangdachangganjunjinxingfenli。yuqitadexijunfenlifangfaxiangbi,mianyicizhujishuzaihendachengdushangtigaoleyangbenzhongbingyuanxingfurongxuexinghujundejiancexiaolv。mianyicizhujishukeyikuaisudizaibutongjunzhongdeyangbenzhongchulibutongdeweishengwu,gaifangfakeyidafududitishengjiancexiaolv。
6 自動化儀器
自動免疫測定分析儀誕生於20世紀70年(nian)代(dai)。隨(sui)著(zhe)科(ke)技(ji)的(de)發(fa)展(zhan),自(zi)動(dong)免(mian)疫(yi)測(ce)定(ding)分(fen)析(xi)儀(yi)在(zai)各(ge)領(ling)域(yu)的(de)應(ying)用(yong)也(ye)越(yue)來(lai)越(yue)多(duo),該(gai)儀(yi)器(qi)使(shi)用(yong)簡(jian)單(dan),無(wu)太(tai)多(duo)操(cao)作(zuo)幹(gan)擾(rao),既(ji)省(sheng)時(shi)省(sheng)力(li),又(you)大(da)大(da)提(ti)高(gao)了(le)檢(jian)測(ce)的(de)精(jing)確(que)度(du)和(he)靈(ling)敏(min)度(du)。這(zhe)種(zhong)自(zi)動(dong)酶(mei)標(biao)免(mian)疫(yi)測(ce)試(shi)係(xi)統(tong)目(mu)前(qian)在(zai)國(guo)內(nei)外(wai)是(shi)酶(mei)免(mian)疫(yi)自(zi)動(dong)化(hua)係(xi)統(tong)中(zhong)應(ying)用(yong)最(zui)為(wei)廣(guang)泛(fan)的(de)一(yi)種(zhong)。但(dan)是(shi)由(you)於(yu)與(yu)其(qi)配(pei)套(tao)的(de)試(shi)劑(ji)昂(ang)貴(gui),從(cong)而(er)限(xian)製(zhi)了(le)其(qi)在(zai)基(ji)層(ceng)實(shi)驗(yan)室(shi)的(de)使(shi)用(yong)。
7 基因芯片技術
基因芯片技術(gene chip)是20世紀90年代興起的生物技術,也叫DNA微陣列(DNA mi―croarray)。采用原位合成(in situ synthesis)或顯微打印方法,將數以萬計的DNA探針固化在支持物表麵,產生二維DNA探針陣列,接著與標記的樣品進行雜交,通過檢測雜交信號來實現對生物樣品快速、並行、gaoxiaodijiance,youyutachangyongguixinpianzuoweiguxiangzhichiwu,erqiezhibeizhongyunyonglejisuanjixinpiandezhibeijishu,suoyichengweijiyinxinpianjishu。jiyinxinpiankeyiduishipinzhongdezhibingjunshixinggaotonglianghepingxingjiance,yicishiyanjiukeyidechuquanbujiancejieguo。lingwaizhenggejiancezaihenduanshijianneijikedechujiancejieguo,qieminganxinggao,teyixingqiang。danshiyeyouyixiewenti:目(mu)前(qian)的(de)基(ji)因(yin)芯(xin)片(pian)一(yi)般(ban)都(dou)采(cai)用(yong)熒(ying)光(guang)標(biao)記(ji),因(yin)此(ci)需(xu)要(yao)昂(ang)貴(gui)的(de)芯(xin)片(pian)製(zhi)作(zuo)係(xi)統(tong)以(yi)及(ji)激(ji)光(guang)共(gong)聚(ju)焦(jiao)掃(sao)描(miao)儀(yi),另(ling)外(wai)操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)對(dui)工(gong)作(zuo)人(ren)員(yuan)要(yao)求(qiu)有(you)很(hen)高(gao)的(de)專(zhuan)業(ye)素(su)質(zhi)等(deng)等(deng)。所(suo)以(yi)基(ji)因(yin)芯(xin)片(pian)的(de)製(zhi)備(bei)技(ji)術(shu)限(xian)製(zhi)其(qi)應(ying)用(yong)而(er)且(qie)還(hai)需(xu)改(gai)進(jin)。
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