關於保護柱,通常大家會擔心:
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保護柱究竟該如何選擇?
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使用時需要注意哪些問題?
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它的作用真的有那麼神奇嗎?
在高效液相分析檢測樣品的過程中,色譜柱會受到來自於樣品及色譜係統的汙染,從而導致色譜柱耐用性差、壽命縮短。
來自於色譜係統的汙染主要指:
1、HPLC儀器係統中部件磨損而產生的固體顆粒。
2、以及流動相係統過濾不完全殘留的固體顆粒。
來自於樣品的汙染主要指:
1、未完全溶解的樣品或者已完全溶解的樣品進入色譜係統中。
2、由於樣品溶劑和流動相溶劑對樣品溶解存在的溶解度差異,導致沉澱析出汙染係統。
特別是對於中藥、天然產物、合成中間體及生物藥品的檢測,因基質的複雜性,色譜柱受汙染的情況會更加嚴重。
汙染會導致色譜係統壓力升高、色譜柱塌陷、填料變色等,從而帶來檢測成本高,測試結果不準確等各種影響。
保護柱是液相色譜分析中重要的色譜耗材,使用保護柱可大大降低分析柱受汙染的程度,延長分析柱使用壽命。
保護柱位於進樣器與分析柱之間, 作用主要兩方麵:
1. 截留不溶性顆粒
2. 吸附樣品基質中的雜質
1、保護柱的填料,與分析柱保持一致!填料品牌一致,才能100%確保選擇性一致。
2、保護柱的規格,要與分析柱匹配!填料粒徑一致,保護柱的內徑與分析柱的內徑相近。
3、對於精細分離,保護柱本身的裝填柱效要足夠好!
4、對於精細分離或者小內徑色譜柱分離,保護柱的連接死體積要盡可能小。
5、如果是用於UHPLC柱,還要考慮保護柱的耐壓能力。
保護柱不理想,就會導致峰擴散,分離度下降,不利於精細分離。
理想的保護柱,即使分析柱短小如4.6×100mm,安裝保護柱後也未引起分離度與峰高的降低。
1、專柱專用。避免保護柱成為不同項目的交叉汙染源。
2、及時更換保護柱。當峰的理論塔板數下降15%,或是柱壓上升15%,或是關鍵分離度下降15%時,都應該及時更換保護柱。
3、不慎發生強汙染時,可以將分析柱卸下,單獨衝洗保護柱,可以使汙染物更快的從保護柱中流出。
1、獨立式保護柱與分析柱連接時,連接管路盡可能短,且接口切麵平滑,盡量減少死體積以降低柱外展寬效應。
2、卡套式保護柱一般未標注液流方向,使用時最好自行標注,並按照標注方向來使用,以免正反向使用後,截留的雜質汙染分析柱。
3、 直接填裝的短柱型保護柱,出現柱壓升高或峰型變差時,可不接分析柱進行反向清洗,清洗溶劑可參考分析柱清洗溶劑。
4、卡套式保護柱,柱芯替換時,注意柱芯與柱套是否存在方向上的匹配,同時不易旋擰過緊,以防滑絲。
5、保護柱或柱芯一般不建議超聲清洗,因可能對填料表麵修飾有影響。
6、如同一保護柱配不同的分析柱使用,每次使用前,保護柱需先清洗並用流動相平衡保護柱一段時間後,再接分析柱使用。
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