1.液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什麼？

①篩板堵塞或柱失效
，解決辦法是反向衝洗柱子，替換篩板或更換柱子。

②存在幹擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子。

③可能柱超載，減少進樣量。

2.HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法是什麼

？

①樣品量不足，解決辦法為增加樣品量。

②樣品未從柱子中流出。可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子。

③樣品與檢測器不匹配。根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器。

④檢測器衰減太多。調整衰減即可。

⑤檢測器時間常數太大。解決辦法為降低時間參數。

⑥檢測器池窗汙染。解決辦法為清洗池窗。

⑦檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣。

⑧記錄儀測壓範圍不當。調整電壓範圍即可。

⑨流動相流量不合適。調整流速即可。

⑩檢測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。

3.做HPLC分析時，柱壓不穩定，原因何在？如何解決？

①泵內有空氣，解決的辦法是清除泵內空氣，對溶劑進行脫氣處理。

②比例閥失效
，更換比例閥即可。

③泵密封墊損壞，更換密封墊即可。

④溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法。

⑤係統檢漏，找出漏點
，密封即可。

⑥梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。

4.我購買的HPLC柱驗收測試時柱壓過高

，請問為什麼？

柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方麵，而且常常並不是柱子本身的問題
，您可按下麵步驟檢查問題的起因：

①拆去保護預柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查
；

②把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降
，否則是管路堵塞，需清洗
，若壓力下降，再檢查；

③將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相衝洗柱子，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動池）。這時
，如果柱壓仍不下降，再檢查；隻用於使用過的柱子
；

④更(geng)換(huan)柱(zhu)子(zi)入(ru)口(kou)篩(shai)板(ban)

，若(ruo)柱(zhu)壓(ya)下(xia)降(jiang)
，說(shuo)明(ming)您(nin)的(de)溶(rong)劑(ji)或(huo)樣(yang)品(pin)含(han)有(you)顆(ke)粒(li)雜(za)質(zhi)，正(zheng)是(shi)這(zhe)些(xie)雜(za)質(zhi)將(jiang)篩(shai)板(ban)堵(du)塞(sai)引(yin)起(qi)壓(ya)力(li)上(shang)升(sheng)。若(ruo)柱(zhu)壓(ya)還(hai)高(gao)
，請(qing)與(yu)廠(chang)商(shang)聯(lian)係(xi)。一(yi)般(ban)情(qing)況(kuang)下(xia)，在(zai)進(jin)樣(yang)器(qi)與(yu)保(bao)護(hu)柱(zhu)之(zhi)間(jian)接(jie)一(yi)個(ge)在(zai)線(xian)過(guo)濾(lv)器(qi)便(bian)可(ke)避(bi)免(mian)柱(zhu)壓(ya)過(guo)高(gao)的(de)問(wen)題(ti)。

5.色譜柱中的流動相會排幹嗎？

不少做色譜分離試驗的人遇到過這樣的情形：不慎未及時補充流動相
，泵將溶劑瓶中的流動相吸幹了，HPLC係xi統tong由you此ci而er停ting止zhi工gong作zuo了le。如ru此ci情qing況kuang是shi否fou會hui損sun壞huai色se譜pu柱zhu？泵beng是shi否fou已yi將jiang色se譜pu柱zhu中zhong所suo有you流liu動dong相xiang都dou排pai幹gan了le？色se譜pu柱zhu還hai能neng使shi用yong嗎ma

？事shi實shi上shang，如ru果guo泵beng將jiang溶rong劑ji瓶ping中zhong的de流liu動dong相xiang吸xi幹gan，並bing不bu會hui造zao成cheng色se譜pu柱zhu的de損sun壞huai。即ji使shi泵beng中zhong充chong滿man了le空kong氣qi
，泵beng也ye不bu會hui將jiang空kong氣qi排pai入ru色se譜pu柱zhu。因yin為wei泵beng隻zhi能neng輸shu送song液ye體ti，而er不bu能neng輸shu送song空kong氣qi。

相(xiang)比(bi)之(zhi)下(xia)
，另(ling)一(yi)個(ge)更(geng)可(ke)能(neng)發(fa)生(sheng)的(de)情(qing)況(kuang)是(shi)忘(wang)記(ji)蓋(gai)上(shang)色(se)譜(pu)柱(zhu)兩(liang)端(duan)的(de)密(mi)封(feng)蓋(gai)或(huo)蓋(gai)子(zi)太(tai)鬆(song)而(er)使(shi)色(se)譜(pu)柱(zhu)變(bian)幹(gan)。同(tong)樣(yang)，整(zheng)個(ge)色(se)譜(pu)柱(zhu)幹(gan)涸(he)的(de)情(qing)況(kuang)不(bu)太(tai)容(rong)易(yi)發(fa)生(sheng)，多(duo)半(ban)可(ke)能(neng)隻(zhi)是(shi)色(se)譜(pu)柱(zhu)兩(liang)端(duan)的(de)幾(ji)個(ge)毫(hao)米(mi)變(bian)幹(gan)了(le)，因(yin)揮(hui)發(fa)掉(diao)所(suo)有(you)溶(rong)劑(ji)是(shi)色(se)譜(pu)柱(zhu)變(bian)幹(gan)需(xu)要(yao)相(xiang)當(dang)長(chang)的(de)時(shi)間(jian)。即(ji)使(shi)色(se)譜(pu)柱(zhu)真(zhen)的(de)變(bian)幹(gan)了(le)，也(ye)不(bu)一(yi)定(ding)就(jiu)不(bu)可(ke)救(jiu)藥(yao)了(le)。可(ke)以(yi)嚐(chang)試(shi)用(yong)一(yi)種(zhong)完(wan)全(quan)脫(tuo)氣(qi)的(de)、表麵張力低的溶劑（如，經氦氣脫氣的甲醇）衝洗色譜柱以除去氣體。較低的表麵張力有助於浸潤填料表麵；已脫氣的溶劑應該能夠溶解並去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）衝一個小時或更多的時間被徹底浸潤，恢複到正常狀態。

6.為何出現峰展寬？

①樣品體積過大——用流動相配樣,總的樣品體積小於第一峰的15%。

②在進樣閥中造成峰擴展——進樣前後排出氣泡以降低擴散。

③數據係統采樣速率太慢——設定速率應是每峰大於10點。

④檢測器時間常數過大——設定時間常數為感興趣第一峰半寬的10%。

⑤流動相粘度過高——增加柱溫,采用低粘度流動相。

⑥檢測池體積過大——用小體積池,卸下熱交換器。

⑦保留時間過長——等度洗脫時增加強溶劑含量,也可用梯度洗脫。

⑧柱外體積過大——將連接管徑和連接管長度降至最小。

⑨樣品過載——進小濃度小體積樣品。

7.除了在線脫氣，常用的實驗室脫氣方式還有哪些
？

加熱回流脫氣，脫氣效果最佳，但無法保持；氦脫氣，此方法脫氣效果佳，能除去百分之九十以上的空氣
，但氦氣價格太貴，所以用的不多；真空脫氣
，效果僅次於氦脫氣
，但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發損失
；超聲脫氣，隻能脫去約百分之三十的空氣，但在實驗室中最常用。目前還是盡量爭取用在線脫氣，方便且效果好。

8.如何簡單判斷比例閥是否內漏？

設定泵使用一個單獨通路（A），打開Purge閥，流速5mL/min，提起其他溶劑瓶內的溶劑過濾頭直至離開液麵，觀察這些通路（B
、C
、D）內的溶劑是否隨著流動，正常時均不應流動。