答:新(xin)柱(zhu)活(huo)化(hua),實(shi)際(ji)上(shang)是(shi)一(yi)個(ge)平(ping)衡(heng)的(de)過(guo)程(cheng),除(chu)了(le)用(yong)流(liu)動(dong)相(xiang)平(ping)衡(heng)外(wai),有(you)時(shi)候(hou)還(hai)必(bi)須(xu)用(yong)所(suo)測(ce)樣(yang)品(pin)對(dui)新(xin)柱(zhu)進(jin)行(xing)平(ping)衡(heng),特(te)別(bie)是(shi)測(ce)定(ding)分(fen)子(zi)量(liang)比(bi)較(jiao)高(gao)的(de)多(duo)肽(tai),尤(you)其(qi)重(zhong)要(yao)。因(yin)為(wei)分(fen)子(zi)量(liang)高(gao)的(de)物(wu)質(zhi)分(fen)子(zi),擴(kuo)散(san)速(su)度(du)慢(man),平(ping)衡(heng)所(suo)需(xu)時(shi)間(jian)也(ye)相(xiang)應(ying)較(jiao)長(chang)。具(ju)體(ti)平(ping)衡(heng)方(fang)式(shi)也(ye)很(hen)簡(jian)單(dan),多(duo)進(jin)幾(ji)次(ci)樣(yang)品(pin),直(zhi)到(dao)峰(feng)麵(mian)積(ji)和(he)保(bao)留(liu)時(shi)間(jian)穩(wen)定(ding),再(zai)進(jin)行(xing)正(zheng)式(shi)進(jin)樣(yang)測(ce)定(ding)。
如(ru)果(guo)要(yao)加(jia)快(kuai)平(ping)衡(heng)時(shi)間(jian),把(ba)前(qian)麵(mian)用(yong)來(lai)平(ping)衡(heng)的(de)進(jin)樣(yang)樣(yang)品(pin)濃(nong)度(du)加(jia)大(da),或(huo)者(zhe)不(bu)等(deng)洗(xi)脫(tuo)完(wan)成(cheng),連(lian)續(xu)進(jin)樣(yang)多(duo)針(zhen)。用(yong)待(dai)測(ce)物(wu)對(dui)新(xin)柱(zhu)平(ping)衡(heng),目(mu)的(de)是(shi)將(jiang)矽(gui)膠(jiao)基(ji)質(zhi)填(tian)料(liao)表(biao)麵(mian)具(ju)有(you)非(fei)特(te)異(yi)性(xing)吸(xi)附(fu)的(de)位(wei)點(dian)的(de)吸(xi)附(fu)能(neng)力(li)飽(bao)和(he)掉(diao)。
測定多肽,一般采用什麼柱子?流動相是乙腈和水,還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽,應該怎麼選擇柱子?
答:分子量不高的多肽一般選用常規C18柱就能測定,也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。
氨基柱在進酸性樣品時,很傷柱子,如使用一段時間後,柱效降低,峰形改變,如何恢複?
答:氨基柱測酸性樣品,應該是用氨基柱的HILIC模(mo)式(shi)。酸(suan)的(de)存(cun)在(zai)可(ke)能(neng)會(hui)使(shi)略(lve)帶(dai)負(fu)電(dian)荷(he)的(de)氨(an)基(ji)官(guan)能(neng)團(tuan)質(zhi)子(zi)化(hua),導(dao)致(zhi)使(shi)用(yong)一(yi)段(duan)時(shi)間(jian)後(hou)對(dui)於(yu)某(mou)些(xie)類(lei)的(de)分(fen)析(xi)物(wu)保(bao)留(liu)性(xing)質(zhi)有(you)所(suo)改(gai)變(bian)或(huo)表(biao)現(xian)在(zai)柱(zhu)效(xiao)下(xia)降(jiang)。建(jian)議(yi):用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液衝洗該柱(衝洗後當然要再用不含堿的流動相洗去多餘氨),之後再進行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1%。
色譜柱的技術都有哪些?比如封尾等,這些技術在應用時都體現在哪裏?
答:色se譜pu柱zhu技ji術shu包bao括kuo填tian料liao技ji術shu和he裝zhuang柱zhu技ji術shu,填tian料liao技ji術shu自zi不bu待dai言yan,填tian料liao的de好hao壞huai對dui色se譜pu柱zhu分fen離li性xing能neng和he選xuan擇ze性xing有you決jue定ding性xing影ying響xiang。裝zhuang柱zhu技ji術shu也ye沒mei有you想xiang象xiang中zhong的de這zhe麼me簡jian單dan,不bu同tong固gu定ding相xiang、不同粒徑、不同柱管內徑和長度,裝柱工藝都有所不同,要裝出緊密、穩定、均一的柱床,更多是一門藝術,需要經驗積累。
國內和國外想比,我認為色譜柱的差距在於:國guo內nei公gong司si以yi前qian都dou不bu會hui自zi己ji開kai發fa填tian料liao,一yi般ban買mai國guo外wai現xian成cheng填tian料liao裝zhuang柱zhu,買mai到dao的de填tian料liao質zhi量liang控kong製zhi權quan不bu在zai自zi己ji手shou裏li。另ling外wai因yin為wei裝zhuang柱zhu曆li史shi短duan,經jing驗yan積ji累lei少shao,裝zhuang柱zhu工gong藝yi也ye沒mei有you完wan全quan達da到dao國guo外wai水shui平ping。另ling外wai,對dui色se譜pu柱zhu性xing能neng很hen關guan鍵jian的de基ji礎chu材cai料liao-----裸矽膠,國產的還不過關,在純度、粒徑和孔徑的均一性方麵和國外產品相比,差距很大。
色譜柱技術的差距在哪裏?
答:液ye相xiang色se譜pu柱zhu裝zhuang填tian實shi際ji上shang是shi有you一yi定ding技ji巧qiao和he程cheng序xu,可ke能neng還hai有you一yi些xie運yun氣qi。一yi般ban使shi用yong高gao壓ya勻yun漿jiang方fang法fa裝zhuang填tian。也ye就jiu是shi能neng讓rang填tian料liao在zai溶rong劑ji內nei均jun勻yun地di懸xuan浮fu。然ran後hou用yong瞬shun間jian高gao壓ya壓ya實shi,這zhe實shi際ji上shang用yong到dao了le不bu同tong比bi例li的de勻yun漿jiang液ye體ti,和he合he適shi的de壓ya力li。壓ya力li太tai大da,顆ke粒li破po碎sui,壓ya力li太tai小xiao,塔ta板ban數shu少shao。同tong時shi壓ya力li需xu要yao穩wen定ding,不bu然ran分fen布bu不bu均jun,拖tuo尾wei嚴yan重zhong。同tong時shi還hai有you頭tou上shang平ping整zheng程cheng度du。套tao上shang套tao,就jiu可ke以yi用yong了le。
zhuzizaishenmeqingkuangxiakeyiqingxiyixiashaibanne?yuanlaiyetaolunguozhegewenti,woyechaixialaiqingxiguo,danwokandaozhuqianduandewurangengshen,yushijiuyongdaopiangualegua,ranhoubaqingxihaodeshaibananzhuangshangqu。wentijiejuele,danshiyongshouminghuibuhuijianshaone?
答:柱(zhu)頭(tou)汙(wu)染(ran)了(le),就(jiu)取(qu)出(chu)汙(wu)染(ran)的(de),再(zai)裝(zhuang)一(yi)些(xie)填(tian)料(liao)。因(yin)為(wei)加(jia)入(ru)你(ni)刮(gua)了(le)些(xie)填(tian)料(liao),那(na)麼(me)微(wei)觀(guan)的(de)塔(ta)板(ban)數(shu)就(jiu)少(shao)了(le)。假(jia)入(ru)你(ni)刮(gua)得(de)不(bu)多(duo),僅(jin)表(biao)麵(mian),可(ke)能(neng)就(jiu)是(shi)一(yi)些(xie)髒(zang)物(wu),所(suo)以(yi),問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。但(dan)是(shi)今(jin)後(hou)還(hai)會(hui)有(you)同(tong)樣(yang)問(wen)題(ti),再(zai)掛(gua),那(na)麼(me)不(bu)小(xiao)心(xin)刮(gua),影(ying)響(xiang)柱(zhu)效(xiao)。建(jian)議(yi)還(hai)是(shi)裝(zhuang)一(yi)個(ge)預(yu)柱(zhu)。
如果柱子取下來放置一段時間,需要做什麼保護嗎?
答:對一般的反相柱,也就是洗幹淨後放到純甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中,然後用堵頭塞緊柱兩頭,以免保存溶劑揮發,應該不需要做特殊的保護。
流動相中加入適量的四氫呋喃可以改善峰形的機理是什麼?
答:《高效液相色譜方法及應用》於世林編著的上麵說:甲醇為質子給予體、乙腈為質子接受體、四氫呋喃是偶極溶劑,應該除了極性影響,還有另外的影響因素,至於分離機理,還是比較複雜的,不能看成是個萬能方法。
關於色譜柱的填裝問題
我個人認為現在色譜柱的填裝一般有3種情況:
(1)國外生產填料並填裝完成成品賣到國內;
(2)國外生產填料,國內填裝銷售;
(3)國內生產填料,國內填裝銷售。
一般情況下,第1種情況賣的最貴,也質量最好!可是如果是填料的生產很複雜的話,那麼填裝上國內也跟不上去嗎?為什麼換在國內填裝就會出現或多或少的一些小問題呢?
答:國(guo)內(nei)填(tian)裝(zhuang)會(hui)出(chu)現(xian)質(zhi)量(liang)小(xiao)問(wen)題(ti),和(he)國(guo)內(nei)目(mu)前(qian)普(pu)遍(bian)做(zuo)事(shi)沒(mei)有(you)國(guo)外(wai)嚴(yan)謹(jin)有(you)關(guan)吧(ba)。如(ru)果(guo)工(gong)藝(yi)技(ji)術(shu)上(shang)沒(mei)有(you)問(wen)題(ti),又(you)能(neng)製(zhi)訂(ding)並(bing)切(qie)實(shi)執(zhi)行(xing)一(yi)整(zheng)套(tao)嚴(yan)格(ge)的(de)生(sheng)產(chan)質(zhi)量(liang)管(guan)理(li)措(cuo)施(shi),國(guo)內(nei)填(tian)裝(zhuang)和(he)國(guo)外(wai)填(tian)裝(zhuang)並(bing)無(wu)區(qu)別(bie)。
國產色譜柱在市場上占有比例如何啊?
國內色譜柱市場還沒有人進行過科學統計,連一年色譜柱銷售總量也眾說紛雲,更別說國內生產色譜柱所占份額了。我估計是占30%左右吧。
預柱或保護柱用還是不用的問題!原yuan來lai分fen析xi中zhong藥yao品pin種zhong時shi,我wo一yi直zhi都dou是shi用yong保bao護hu柱zhu。但dan來lai到dao新xin公gong司si後hou,發fa現xian大da家jia都dou沒mei有you使shi用yong,幾ji個ge實shi驗yan室shi連lian保bao護hu柱zhu都dou沒mei找zhao到dao一yi個ge,也ye就jiu是shi說shuo大da家jia從cong來lai都dou沒mei有you用yong過guo。後hou來lai問wen一yi個ge老lao員yuan工gong,說shuo是shi有you可ke能neng影ying響xiang藥yao品pin分fen析xi。想xiang問wen:安裝保護柱後會影響樣品分析嗎?我們做的大多是頭孢類的抗生素。
答:應ying該gai這zhe樣yang說shuo,加jia上shang保bao護hu柱zhu,肯ken定ding有you利li於yu保bao護hu色se譜pu柱zhu不bu受shou一yi些xie顆ke粒li物wu質zhi的de堵du塞sai,肯ken定ding有you害hai於yu分fen離li度du和he柱zhu效xiao,因yin為wei保bao護hu柱zhu中zhong間jian有you著zhe死si體ti積ji的de存cun在zai。但dan是shi如ru果guo保bao護hu柱zhu接jie得de好hao,並bing且qie盡jin量liang控kong製zhi其qi匹pi配pei性xing和he經jing常chang更geng換huan,分fen離li度du和he柱zhu效xiao應ying該gai影ying響xiang並bing不bu大da。頭tou孢bao類lei的de抗kang生sheng素su也ye要yao看kan到dao底di是shi原yuan料liao藥yao還hai是shi製zhi劑ji嘍lou,有you些xie原yuan料liao藥yao,可ke以yi根gen據ju色se譜pu柱zhu的de損sun耗hao選xuan擇ze添tian加jia預yu柱zhu(中間是個篩板),製劑的話,如果有輔料嚴重幹擾或者流動相鹽分比較大,那還是最好配個保護柱。
用的是四元梯度泵A50%甲醇B50%水經常出現停或進氣泡這是什麼原因?
答:水/甲醇比例在55:45時,黏度和柱壓有個極大值。50:50接jie近jin了le這zhe個ge極ji值zhi,柱zhu壓ya是shi比bi較jiao高gao的de,但dan影ying響xiang柱zhu壓ya最zui大da的de還hai是shi填tian料liao粒li徑jing和he色se譜pu柱zhu內nei徑jing,你ni這zhe個ge實shi例li中zhong不bu知zhi用yong的de什shen麼me規gui格ge的de色se譜pu柱zhu?係xi統tong壓ya力li高gao,可ke能neng會hui因yin溶rong劑ji泵beng中zhong的de過guo濾lv頭tou供gong液ye速su度du跟gen不bu上shang而er導dao致zhi氣qi泡pao進jin入ru係xi統tong,停ting機ji也ye應ying該gai是shi因yin為wei氣qi泡pao進jin入ru壓ya力li下xia降jiang的de原yuan因yin,可ke考kao慮lv更geng換huan液ye體ti通tong量liang更geng大da的de過guo濾lv頭tou。 想請您具體說明一下反衝色譜柱的方法,是不連檢測器嗎? 答:反衝就是將柱子反向連到係統中。因為有汙染物反衝出來,當然不連檢測器,出液端直接接到廢液瓶就可以。
wangshangduizhuzishifoukeyifanchongyizhiyouzhenglun,nashenmeyangdezhuzikeyifanchong,shenmebukeyi。fanchonghoushizhengzheyong,haishifanzheyong。jutidaogexinghaozhuzibujinshiODS柱,其他如正向柱、氨基柱、離子交換柱等最好都有解釋。
答:一yi般ban的de正zheng相xiang反fan相xiang柱zhu應ying該gai都dou能neng反fan衝chong,隻zhi有you兩liang端duan篩shai板ban孔kong徑jing不bu對dui稱cheng的de柱zhu子zi不bu能neng反fan衝chong,不bu過guo目mu前qian這zhe樣yang的de柱zhu子zi已yi經jing比bi較jiao少shao見jian了le。反fan衝chong是shi為wei了le把ba柱zhu頭tou的de汙wu染ran物wu衝chong洗xi掉diao,反fan衝chong後hou還hai是shi正zheng著zhe用yong比bi較jiao好hao,以yi免mian柱zhu子zi的de兩liang頭tou都dou被bei汙wu染ran。我wo們men一yi直zhi提ti倡chang的de是shi:正向使用,反向衝洗。
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