一、使用試管的問題

1、試管的潔淨問題。高gao效xiao液ye相xiang色se譜pu分fen析xi法fa是shi一yi個ge很hen靈ling敏min的de分fen析xi方fang法fa
，如ru果guo因yin使shi用yong不bu潔jie淨jing的de試shi管guan
，便bian會hui影ying響xiang試shi驗yan結jie果guo的de準zhun確que性xing。例li如ru，在zai用yong甲jia醇chun作zuo溶rong劑ji來lai溶rong解jie樣yang品pin時shi，所suo用yong的de小xiao試shi管guan是shi用yong橡xiang膠jiao塞sai來lai做zuo蓋gai子zi的de
，因yin此ci，在zai每mei次ci進jin樣yang時shi
，都dou有you一yi個ge保bao留liu時shi間jian固gu定ding的de幹gan擾rao峰feng存cun在zai，後hou經jing證zheng實shi

，此ci幹gan擾rao峰feng是shi由you甲jia醇chun浸jin泡pao橡xiang膠jiao塞sai而er溶rong下xia的de組zu分fen所suo產chan生sheng
，換huan用yong玻bo璃li試shi管guan後hou，幹gan擾rao峰feng消xiao除chu。

2、塑料試管的溶解問題。jinnianlai
，yicixingsuliaoshiguangeishiyanrenyuandailailejidadefangbian，danshi，zaishiyongguochengzhongyidingyaozhuyiyoujirongjiduishiguanderongjiexianxiang

，zailiyongcizhongshiguantiquyangpinshi，youxieyoujirongji(如氯仿等)對dui管guan壁bi有you溶rong解jie現xian象xiang，這zhe些xie被bei溶rong解jie下xia來lai的de物wu質zhi有you時shi也ye能neng在zai檢jian測ce器qi上shang產chan生sheng信xin號hao，從cong而er幹gan擾rao樣yang品pin的de測ce定ding。這zhe時shi，可ke用yong相xiang同tong的de實shi驗yan條tiao件jian先xian行xing試shi驗yan一yi下xia，看kan看kan不bu含han被bei抽chou提ti物wu時shi，提ti取qu液ye在zai檢jian測ce器qi上shang能neng否fou產chan生sheng幹gan擾rao信xin號hao，如ru確que有you幹gan擾rao信xin號hao存cun在zai
，就jiu隻zhi能neng換huan用yong耐nai有you機ji溶rong劑ji的de玻bo璃li試shi管guan了le。

3
、被測樣品在試管壁上的吸附問題。這個問題也應引起注意
，否則也會影響測試結果的準確性，在治療藥物監測(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)zhong
，youxiebeiceyaowuruemitilin，bingmiqindengyixifuzaibolishiguandeguanbishang，yinci，caozuozhongyicaiyongjubingxiguan，weifangzhitiquzhongxifuxianxiangdefasheng，kecaiyong0.5%的已二胺已烷液做為提取劑，可有效地防止吸附。

二、操作進樣閥的問題

目前
，在分析型高效液相色譜儀中常用的進樣閥是7725型(xing)進(jin)樣(yang)閥(fa)
，其(qi)內(nei)部(bu)的(de)六(liu)通(tong)閥(fa)結(jie)構(gou)使(shi)進(jin)樣(yang)操(cao)作(zuo)非(fei)常(chang)方(fang)便(bian)，但(dan)是(shi)

，如(ru)果(guo)使(shi)用(yong)不(bu)當(dang)
，也(ye)會(hui)帶(dai)來(lai)問(wen)題(ti)。例(li)如(ru)
，在(zai)高(gao)效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)法(fa)的(de)試(shi)驗(yan)過(guo)程(cheng)中(zhong)，有(you)時(shi)會(hui)有(you)異(yi)常(chang)色(se)譜(pu)峰(feng)的(de)出(chu)現(xian)以(yi)及(ji)重(zhong)現(xian)性(xing)不(bu)好(hao)的(de)問(wen)題(ti)
，這(zhe)主(zhu)要(yao)是(shi)由(you)於(yu)操(cao)作(zuo)方(fang)法(fa)不(bu)當(dang)所(suo)引(yin)起(qi)
，要(yao)想(xiang)解(jie)決(jue)此(ci)類(lei)問(wen)題(ti)，需(xu)從(cong)以(yi)下(xia)幾(ji)個(ge)方(fang)麵(mian)入(ru)手(shou)。

1、進樣量的控製。用進樣閥來進樣時，閥內的樣品環是定量的，(一般分析型進樣閥的樣品環體積為20ul)，由於進樣時，注射到進樣閥內的樣品溶液在樣品環的管路中有徑向的速度梯度(即管軸處比管壁處的液流速度快)。因此，要想使樣品環中充滿樣品溶液，從而使用進樣閥來準確地定量
，則必須使進樣量大於樣品環體積的2倍。如果用注射器來控製進樣量，則最大隻能注射樣品環體積1/2的量，這樣才能防止部分樣品由溢流管溢出從而導致定量分析的誤差。

2
、進樣閥的清潔問題。如果樣品環中有上次進樣時樣品的殘留
，必然會汙染下次注射進的樣品
，為防止這種現象的發生，應按下列步驟操作：a.進樣閥有2個位置，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置時，以注射器將流動相注入進樣閥內清洗幾次，每次用量大約40ul
；b.然後將進樣閥板手扳至INJECT位置時，再以流動相清洗幾次，每次用量還是40ul；c.最後，再將樣品注射到進樣閥裏。

按照上述的步驟操作，可以避免由進樣閥引起的汙染，從而使幹擾峰消除並提高分析結果的準確性。

3
、進樣閥溢流管的堵塞。有you時shi
，進jin樣yang閥fa的de溢yi流liu管guan會hui發fa生sheng堵du塞sai現xian象xiang，向xiang進jin樣yang閥fa內nei注zhu射she樣yang品pin時shi
，注zhu射she針zhen推tui不bu動dong。此ci故gu障zhang是shi由you於yu溢yi流liu管guan的de堵du塞sai所suo致zhi。堵du塞sai的de原yuan因yin多duo半ban是shi由you於yu溶rong解jie樣yang品pin的de流liu動dong相xiang用yong的de是shi鹽yan溶rong液ye，而er其qi中zhong的de鹽yan在zai溢yi流liu管guan的de排pai空kong端duan口kou處chu結jie晶jing所suo致zhi。此ci時shi，可ke用yong小xiao燒shao杯bei盛sheng少shao量liang蒸zheng餾liu水shui對dui溢yi流liu管guan口kou稍shao加jia浸jin泡pao，端duan口kou處chu鹽yan的de結jie晶jing就jiu能neng被bei溶rong解jie掉diao，故gu障zhang排pai除chu。如ru能neng在zai每mei次ci進jin樣yang完wan成cheng之zhi後hou
，用yong蒸zheng餾liu水shui反fan複fu衝chong洗xi至zhi溢yi流liu管guan中zhong的de鹽yan分fen全quan部bu衝chong出chu，則ze可ke避bi免mian此ci故gu障zhang的de發fa生sheng。

三、流動相(MOBLLE PHASE)的問題

甲(jia)醇(chun)和(he)乙(yi)腈(jing)在(zai)高(gao)效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)分(fen)析(xi)法(fa)中(zhong)常(chang)常(chang)被(bei)用(yong)來(lai)配(pei)製(zhi)流(liu)動(dong)相(xiang)。高(gao)效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)法(fa)中(zhong)常(chang)用(yong)的(de)試(shi)劑(ji)最(zui)好(hao)是(shi)高(gao)等(deng)級(ji)的(de)專(zhuan)用(yong)試(shi)劑(ji)，如(ru)色(se)譜(pu)純(chun)試(shi)劑(ji)。在(zai)要(yao)求(qiu)不(bu)太(tai)嚴(yan)格(ge)時(shi)，優(you)級(ji)純(chun)甚(shen)至(zhi)分(fen)析(xi)純(chun)的(de)試(shi)劑(ji)也(ye)能(neng)用(yong)。高(gao)效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)分(fen)析(xi)法(fa)中(zhong)常(chang)用(yong)的(de)是(shi)紫(zi)外(wai)檢(jian)測(ce)器(qi)，因(yin)此(ci)，從(cong)降(jiang)低(di)基(ji)線(xian)噪(zao)音(yin)和(he)提(ti)高(gao)分(fen)析(xi)靈(ling)敏(min)度(du)上(shang)來(lai)考(kao)慮(lv)
，應(ying)該(gai)使(shi)用(yong)紫(zi)外(wai)吸(xi)收(shou)小(xiao)且(qie)雜(za)質(zhi)含(han)量(liang)少(shao)的(de)色(se)譜(pu)純(chun)試(shi)劑(ji)。

1
、流動相的過濾。配製好的流動相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。這是因為溶液中含有很多肉眼難以發現的微小顆粒
，如果不把它們濾除掉
，就會堵塞泵口
、柱zhu頭tou上shang的de過guo濾lv器qi，這zhe樣yang就jiu堵du塞sai了le流liu動dong相xiang的de正zheng常chang通tong道dao
，使shi色se譜pu柱zhu的de阻zu力li增zeng加jia，柱zhu壓ya升sheng高gao
，柱zhu效xiao下xia降jiang。碰peng到dao這zhe種zhong情qing況kuang時shi，要yao換huan用yong經jing過guo濾lv的de流liu動dong相xiang，並bing將jiang堵du塞sai的de濾lv器qi拆chai下xia來lai浸jin泡pao在zai20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機清洗20分鍾
，以除去濾片上的堵塞物。

2、流動相的脫氣。流(liu)動(dong)相(xiang)在(zai)使(shi)用(yong)前(qian)必(bi)須(xu)脫(tuo)氣(qi)，以(yi)盡(jin)可(ke)能(neng)的(de)除(chu)去(qu)溶(rong)解(jie)在(zai)流(liu)動(dong)相(xiang)中(zhong)的(de)氣(qi)體(ti)，否(fou)則(ze)，這(zhe)些(xie)氣(qi)體(ti)會(hui)使(shi)柱(zhu)填(tian)料(liao)的(de)性(xing)能(neng)降(jiang)低(di)，還(hai)能(neng)夠(gou)對(dui)檢(jian)測(ce)器(qi)的(de)信(xin)號(hao)產(chan)生(sheng)很(hen)大(da)的(de)幹(gan)擾(rao)。脫(tuo)氣(qi)有(you)多(duo)種(zhong)方(fang)法(fa)，如(ru)超(chao)聲(sheng)脫(tuo)氣(qi)
、真空脫氣、氮dan氣qi脫tuo氣qi等deng。真zhen空kong脫tuo氣qi法fa和he氮dan氣qi流liu脫tuo氣qi法fa是shi目mu前qian最zui常chang用yong的de脫tuo氣qi法fa。水shui和he甲jia醇chun混hun合he後hou會hui產chan生sheng大da量liang的de氣qi泡pao
，如ru果guo不bu脫tuo氣qi就jiu使shi用yong，氣qi泡pao就jiu會hui進jin入ru色se譜pu柱zhu和he檢jian測ce器qi，並bing將jiang影ying響xiang分fen析xi工gong作zuo的de正zheng常chang進jin行xing。 

四、色譜柱的使用和保養

色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件，被bei測ce物wu質zhi能neng否fou被bei很hen好hao的de分fen離li和he測ce定ding，色se譜pu柱zhu的de性xing能neng起qi著zhe決jue定ding性xing的de作zuo用yong。因yin此ci，在zai日ri常chang工gong作zuo中zhong，應ying特te別bie注zhu意yi色se譜pu柱zhu的de正zheng確que使shi用yong和he維wei修xiu保bao養yang，以yi延yan長chang色se譜pu柱zhu的de使shi用yong壽shou命ming。

1、使用預柱和保護柱。預柱(pre-column)安裝於泵和進樣器之間，它給色譜柱中的流動相提供了完全的平衡，並防止了對柱填料有破壞作用的組分或汙染物進入色譜柱。保護柱(guard column)可ke以yi阻zu擋dang能neng夠gou牢lao固gu地di吸xi附fu於yu色se譜pu柱zhu上shang的de組zu分fen進jin入ru色se譜pu柱zhu，保bao護hu柱zhu應ying與yu色se譜pu柱zhu的de填tian料liao相xiang同tong。預yu柱zhu和he保bao護hu柱zhu可ke以yi經jing常chang更geng換huan，而er不bu需xu要yao經jing常chang更geng換huan色se譜pu柱zhu，這zhe就jiu延yan長chang了le色se譜pu柱zhu的de使shi用yong壽shou命ming。

2
、防止氣體進入色譜柱。有些色譜柱(如凝膠柱)是(shi)不(bu)允(yun)許(xu)氣(qi)泡(pao)進(jin)入(ru)的(de)，否(fou)則(ze)將(jiang)會(hui)使(shi)柱(zhu)效(xiao)降(jiang)低(di)甚(shen)至(zhi)形(xing)成(cheng)微(wei)小(xiao)的(de)難(nan)以(yi)驅(qu)除(chu)的(de)氣(qi)室(shi)。因(yin)此(ci)，為(wei)了(le)防(fang)止(zhi)氣(qi)泡(pao)進(jin)入(ru)色(se)譜(pu)柱(zhu)，一(yi)定(ding)要(yao)使(shi)用(yong)經(jing)過(guo)脫(tuo)氣(qi)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)
，並(bing)且(qie)要(yao)嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)下(xia)列(lie)步(bu)驟(zhou)來(lai)安(an)裝(zhuang)色(se)譜(pu)柱(zhu)。a.拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲
，觀察是否有溶劑滲出；b.如有溶劑滲出
，即可將色譜柱接到管路上，以避免氣泡的進入；c.ruwurongjishenchushi，biaomingsepuzhudeciduanyijingjinqukongqile，cishi，kejiangsepuzhudechukouduanjiedaojinyangfashang，yiliudongxianglaifanfangxiangchongxisepuzhu，yibianjiangzhuneidekongqipaichu。zuihaoyi0.2ml/min的小流量來衝色譜柱，如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會導致柱性能的降低；d.如果流出的溶劑裏不含有氣泡，說明柱內的氣體已經被排出了，再將色譜柱以正確的方向接好，這樣氣泡就進不到色譜柱裏麵了。

3、色譜柱的清洗。為wei了le不bu使shi被bei測ce物wu質zhi和he雜za質zhi停ting留liu在zai色se譜pu柱zhu中zhong
，在zai每mei次ci的de樣yang品pin分fen析xi工gong作zuo完wan成cheng之zhi後hou，都dou應ying及ji時shi地di清qing洗xi色se譜pu柱zhu。首shou先xian要yao用yong對dui被bei測ce樣yang品pin洗xi脫tuo能neng力li強qiang的de溶rong劑ji來lai洗xi脫tuo色se譜pu柱zhu，以yi分fen析xi工gong作zuo中zhong常chang用yong的de反fan相xiang色se譜pu分fen析xi法fa為wei例li，因yin其qi先xian流liu出chu的de物wu質zhi是shi極ji性xing大da的de物wu質zhi，此ci時shi應ying用yong100%的甲醇或使用異丙純
、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內的極性小的物質洗脫下來，洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動相是緩衝溶液
，則應先用蒸餾水來衝洗色譜柱，以衝掉柱內的鹽
，然後再用合適的溶劑來衝洗。

凝膠濾過色譜法(Gel Filtration Chromatography)zhongsuoshiyongdeningjiaozhuchangyonghuanchongrongyezuoliudongxiang

，yongwanzhihoudangranyaoyongzhengliushuilaichongxi。ruguoshilianxucaozuo，keyijianghuanchongrongyezhiyuzhuneiguoye，danzuihaoshiweichixiaoliusu(＜0.5ml/min)以防止緩衝鹽的析出，如果流動相中含有鹵化物，即使是停一夜，也必須要用蒸餾水將色譜柱衝洗幹淨，以防止它們對柱體的腐蝕。

4、色譜柱的存放。如果色譜柱暫時不用，存放時要注意以下幾點：

a.幾天之內的短期放置，應先用溶劑衝洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來衝洗)，再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。

b.如ru果guo色se譜pu柱zhu長chang期qi不bu用yong，僅jin用yong上shang述shu方fang法fa來lai處chu理li就jiu不bu行xing了le，這zhe時shi應ying使shi用yong色se譜pu柱zhu使shi用yong說shuo明ming書shu中zhong所suo指zhi明ming的de溶rong劑ji來lai充chong滿man色se譜pu柱zhu，反fan相xiang柱zhu一yi般ban使shi用yong甲jia醇chun
，正zheng相xiang柱zhu則ze可ke用yong正zheng已yi烷wan或huo庚geng烷wan
，而er凝ning膠jiao柱zhu則ze不bu能neng用yong水shui了le，因yin柱zhu內nei如ru果guo有you微wei生sheng物wu的de生sheng長chang則ze會hui使shi柱zhu效xiao降jiang低di，此ci時shi應ying用yong0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)laichongxisepuzhu
，zaijiangsepuzhufengyan。sepuzhuchangqifangzhishi，yidingyaojiangsepuzhudeliangduanfengyan，yifangzhiyouyurongjihuifaerzaochengdezhutianliaogansuoxianxiang
，yinzhekedaozhizhuxiaodeyanzhongjiangdi。

c.色譜柱應貯存在室溫下
，如果放置於0℃以下的環境裏，柱內就會結冰，這也將導致柱效的降低。

五
、色譜峰的雙峰問題

長期使用後的色譜柱，如果有雜質進入
，就會使色譜柱入口處的固定相“板結”並(bing)在(zai)流(liu)動(dong)相(xiang)所(suo)產(chan)生(sheng)的(de)高(gao)壓(ya)作(zuo)用(yong)下(xia)，形(xing)成(cheng)柱(zhu)頭(tou)的(de)塌(ta)陷(xian)，被(bei)分(fen)析(xi)的(de)樣(yang)品(pin)組(zu)分(fen)的(de)正(zheng)常(chang)色(se)譜(pu)峰(feng)就(jiu)變(bian)成(cheng)了(le)雙(shuang)峰(feng)，這(zhe)時(shi)可(ke)按(an)下(xia)述(shu)方(fang)法(fa)來(lai)修(xiu)複(fu)色(se)譜(pu)柱(zhu)。首(shou)先(xian)將(jiang)柱(zhu)頭(tou)的(de)緊(jin)固(gu)螺(luo)母(mu)旋(xuan)下(xia)，這(zhe)時(shi)就(jiu)會(hui)發(fa)現(xian)柱(zhu)頭(tou)內(nei)的(de)固(gu)定(ding)相(xiang)已(yi)被(bei)壓(ya)縮(suo)進(jin)去(qu)了(le)，嚴(yan)重(zhong)時(shi)可(ke)縮(suo)進(jin)10mm以上。在這種情況下，我們可用針尖將流動相表層板結變黃的部分摳掉
，並以相同的固定相將此塌陷區填平、壓實，再將色譜柱的緊固螺絲上緊，修複工作即告結束。用經過修複後的色譜柱再做樣品時，色譜峰就恢複正常了。

以(yi)上(shang)從(cong)幾(ji)個(ge)方(fang)麵(mian)簡(jian)介(jie)了(le)色(se)譜(pu)儀(yi)的(de)正(zheng)確(que)使(shi)用(yong)及(ji)故(gu)障(zhang)排(pai)除(chu)方(fang)法(fa)。在(zai)日(ri)常(chang)工(gong)作(zuo)中(zhong)，如(ru)果(guo)能(neng)對(dui)這(zhe)些(xie)事(shi)項(xiang)認(ren)真(zhen)對(dui)待(dai)，做(zuo)到(dao)有(you)問(wen)題(ti)及(ji)時(shi)解(jie)決(jue)，則(ze)會(hui)大(da)大(da)延(yan)長(chang)儀(yi)器(qi)的(de)正(zheng)常(chang)使(shi)用(yong)期(qi)限(xian)，並(bing)使(shi)儀(yi)器(qi)的(de)性(xing)能(neng)得(de)到(dao)最(zui)大(da)限(xian)度(du)的(de)發(fa)揮(hui)。