一、柱子可以分為:加壓,常壓,減壓
壓(ya)力(li)可(ke)以(yi)增(zeng)加(jia)淋(lin)洗(xi)劑(ji)的(de)流(liu)動(dong)速(su)度(du),減(jian)少(shao)產(chan)品(pin)收(shou)集(ji)的(de)時(shi)間(jian),但(dan)是(shi)會(hui)減(jian)低(di)柱(zhu)子(zi)的(de)塔(ta)板(ban)數(shu)。所(suo)以(yi)其(qi)他(ta)條(tiao)件(jian)相(xiang)同(tong)的(de)時(shi)候(hou),常(chang)壓(ya)柱(zhu)是(shi)效(xiao)率(lv)最(zui)高(gao)的(de),但(dan)是(shi)時(shi)間(jian)也(ye)最(zui)長(chang),比(bi)如(ru),天(tian)然(ran)化(hua)合(he)物(wu)的(de)分(fen)離(li),一(yi)個(ge)柱(zhu)子(zi)幾(ji)個(ge)月(yue)也(ye)是(shi)有(you)的(de)。
減壓柱能夠減少矽膠的使用量, 感覺能夠節省一半甚至更多,但是,由於大量的空氣通過矽膠會使溶劑揮發(有時在柱子外麵有水汽凝結),以及有些比較易分解的東西可能得不到,而且還必須同時使用水泵抽氣(很大的噪音,而且時間長)。以前曾經大量的過減壓柱,對它有比較深厚的感情,但是自從嚐試了加壓後,就幾乎再也沒動過減壓的念頭了。
加壓柱是一種比較好的方法,與常壓柱類似,隻不過外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣,雙連球或者小氣泵(給魚缸供氣的就行)。tebieshizairongyifenjiedeyangpindefenlizhongshiyong。yalibukeguoda,buranrongjizoudetaikuaijiuhuijiandifenlixiaoguo。gerenjiaodejiayazhuzaiputongdeyoujihuahewudefenlizhongshibijiaoshiyongde。
二、關於柱子的尺寸,應該是又粗又長的最好
柱子長了,相應的塔板數就高。柱子粗了,上樣後樣品的原點就小(反映在柱子上就是樣品層比較薄),這(zhe)樣(yang)相(xiang)對(dui)的(de)減(jian)小(xiao)了(le)分(fen)離(li)的(de)難(nan)度(du)。試(shi)想(xiang)如(ru)果(guo)柱(zhu)子(zi)十(shi)厘(li)米(mi),而(er)樣(yang)品(pin)就(jiu)有(you)二(er)厘(li)米(mi),那(na)麼(me)分(fen)離(li)的(de)難(nan)度(du)可(ke)想(xiang)而(er)知(zhi),恐(kong)怕(pa)要(yao)用(yong)很(hen)低(di)極(ji)性(xing)的(de)溶(rong)劑(ji)慢(man)慢(man)衝(chong)了(le)。而(er)如(ru)果(guo)樣(yang)品(pin)層(ceng)隻(zhi)有(you) 0.5 厘(li)米(mi),那(na)麼(me)各(ge)組(zu)分(fen)就(jiu)比(bi)較(jiao)容(rong)易(yi)得(de)到(dao)完(wan)全(quan)分(fen)離(li)了(le)。當(dang)然(ran)采(cai)用(yong)粗(cu)大(da)的(de)柱(zhu)子(zi)要(yao)犧(xi)牲(sheng)比(bi)較(jiao)多(duo)的(de)矽(gui)膠(jiao)和(he)溶(rong)劑(ji)了(le),不(bu)過(guo)這(zhe)些(xie)成(cheng)本(ben)相(xiang)對(dui)於(yu)產(chan)品(pin)來(lai)說(shuo)也(ye)許(xu)就(jiu)不(bu)算(suan)什(shen)麼(me)了(le)(有些不環保的說,不過溶劑回收重蒸後也就減小了部分浪費)。
現在見到的柱子徑高比一般在 1:5~10,書中寫矽膠量是樣品量的 30~40倍,具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質分的比較開(是指在所需組分 rf 在0.2~0.4,雜質相差0.1 以上),就可以少用矽膠,用小柱子(例如,200 毫克的樣品,用50px×500px的柱子);如果,相差不到 0.1,就要加大柱子,我覺得可以增加柱子的直徑,比如,用 75px 的,也可以減小淋洗劑的極性等等關於無水無氧柱,適用於對氧,水敏感,易分解的產品。
keyishizhu,yekeyiganzhu。buguozaiyangpinzhiqianzhishaoyaoyongrongjibazhuzibaoheyici,yinwei,rongjiheguijiaobaoheshifangchudereliangyoukenengshichanpinfenjie,bijingyaofenlideshimingandedongdong,xiaoxinbuweiguo。yeshiyinweifenlidedongxibijiaomingan,suoyijieshoupingyidingyaoyongkemifengde,zunxun schlenk 操作。
三、關於濕法、幹法上樣
濕法省事,一般用淋洗劑溶解樣品,也可以用二氯甲烷、yisuanyizhideng。。。danrongjiyueshaoyuehao,buranrongjijiuchenglelinxijile。henduoyangpinzaishangzhuqianshizhanhuhude,yibanmeiguanxi。keshiyoudeshangyanghouzaiguijiaoshangyouhuixichu,zheyibandoushibijiaodaliangdeyangpincaihuichuxian,shiyinweiguijiaoduiyangpindexifubaohe,eryangpinbenshenyoushibijiaohaodeguticaihuifasheng,zhejiuyinggaixianzhongjiejing,dedaodabufendechanpinhouzaizhufen,ruguobunengzhongjiejingnajiubuguantale,zhijieguojiushile,yangpinsuizhelinxijiliudonghuirongjiede。
有些樣品溶解性差,能溶解的溶劑又不能上柱(比如,DMF,DMSO 等,會隨著溶劑一起走,顯色是一個很長的脫尾),這時就必須用幹法上柱了。樣品和矽膠的量有一種說法是 1:1,我覺得是越少越好,但是要保證在旋幹後,不能看到明顯的固體顆粒(那說明有的樣品沒有吸附在矽膠上)。
四、溶劑的選擇
當(dang)然(ran)是(shi)最(zui)便(bian)宜(yi),最(zui)安(an)全(quan),最(zui)環(huan)保(bao)的(de)了(le),所(suo)以(yi),大(da)多(duo)選(xuan)用(yong)石(shi)油(you)醚(mi),乙(yi)酸(suan)乙(yi)酯(zhi)。文(wen)獻(xian)中(zhong)有(you)寫(xie)用(yong)正(zheng)己(ji)烷(wan)的(de),太(tai)貴(gui)了(le),除(chu)非(fei)特(te)別(bie)需(xu)要(yao)不(bu)要(yao)用(yong)不(bu)然(ran)銀(yin)子(zi)嘩(hua)嘩(hua)的(de),流(liu)的(de)比(bi)淋(lin)洗(xi)劑(ji)還(hai)快(kuai),不(bu)過(guo),因(yin)為(wei)極(ji)性(xing)很(hen)小(xiao),有(you)時(shi)還(hai)是(shi)非(fei)它(ta)不(bu)可(ke)。乙(yi)醚(mi)也(ye)可(ke)以(yi)用(yong),但(dan)是(shi),就(jiu)是(shi)容(rong)易(yi)睡(shui)覺(jiao),注(zhu)意(yi)保(bao)持(chi)清(qing)醒(xing)別(bie)讓(rang)溶(rong)劑(ji)流(liu)幹(gan)了(le),那(na)樣(yang)柱(zhu)子(zi)也(ye)就(jiu)不(bu)爽(shuang)了(le)。
二(er)氯(lv)甲(jia)烷(wan)也(ye)有(you)用(yong)的(de),但(dan)是(shi),要(yao)知(zhi)道(dao),它(ta)和(he)矽(gui)膠(jiao)的(de)吸(xi)附(fu)是(shi)一(yi)個(ge)放(fang)熱(re)過(guo)程(cheng),所(suo)以(yi),夏(xia)天(tian)的(de)時(shi)候(hou)經(jing)常(chang)會(hui)在(zai)柱(zhu)子(zi)裏(li)產(chan)生(sheng)氣(qi)泡(pao),天(tian)氣(qi)冷(leng)的(de)時(shi)候(hou)會(hui)好(hao)一(yi)些(xie)。甲(jia)醇(chun),據(ju)說(shuo)能(neng)溶(rong)解(jie)部(bu)分(fen)的(de)矽(gui)膠(jiao),所(suo)以(yi),產(chan)品(pin)如(ru)果(guo)想(xiang)過(guo)元(yuan)素(su)分(fen)析(xi)的(de)話(hua)要(yao)留(liu)神(shen),應(ying)該(gai)經(jing)過(guo)後(hou)繼(ji)處(chu)理(li),比(bi)如(ru),重(zhong)結(jie)晶(jing)等(deng)。其(qi)他(ta)溶(rong)劑(ji)用(yong)的(de)相(xiang)對(dui)較(jiao)少(shao),要(yao)依(yi)個(ge)人(ren)的(de)不(bu)同(tong)需(xu)要(yao)選(xuan)擇(ze)。
由於某些原因,用到的淋洗劑多是大包裝的(便宜嘛),我們這裏是用 10 升或 25 升的塑料桶裝的, 就要注意這些工業品的純度是較低的。 經常能夠從送來的大桶底部看見有色的雜質,其他的雜質就可想而知了, 所以在比較嚴格的柱分時就要對溶劑重蒸。 當然,過原料時就可以免去這一步了,反正下麵還有提純的方法。
另ling外wai,溶rong劑ji在zai過guo柱zhu子zi後hou最zui好hao也ye回hui收shou使shi用yong,一yi方fang麵mian環huan保bao,另ling一yi方fang麵mian也ye能neng節jie省sheng部bu分fen經jing費fei,缺que點dian是shi要yao消xiao耗hao一yi定ding的de人ren工gong。這zhe裏li要yao注zhu意yi的de是shi,一yi般ban在zai過guo柱zhu同tong時shi進jin行xing的de是shi減jian壓ya旋xuan蒸zheng,石shi油you醚mi和he乙yi酸suan乙yi酯zhi的de比bi例li由you於yu揮hui發fa度du的de不bu同tong會hui導dao致zhi極ji性xing的de變bian化hua,一yi般ban會hui使shi得de極ji性xing變bian大da,在zai梯ti度du淋lin洗xi時shi比bi較jiao合he適shi,正zheng好hao極ji性xing越yue來lai越yue大da了le。在zai過guo完wan柱zhu子zi後hou,溶rong劑ji最zui後hou回hui收shou要yao采cai用yong常chang壓ya,因yin為wei在zai減jian壓ya旋xuan蒸zheng時shi會hui有you部bu分fen低di沸fei點dian的de雜za質zhi一yi起qi出chu來lai, 常壓時就會減少這種現象,如果雜質和你下麵要過的樣品有反應那就慘了。
五、關於操作問題
1.裝柱:
柱zhu子zi下xia麵mian的de活huo塞sai一yi定ding不bu要yao塗tu潤run滑hua劑ji,會hui被bei淋lin洗xi劑ji帶dai到dao產chan品pin中zhong的de,可ke以yi采cai用yong四si氟fu節jie門men的de。幹gan法fa和he濕shi法fa裝zhuang柱zhu覺jiao得de沒mei什shen麼me區qu別bie,隻zhi要yao能neng把ba柱zhu子zi裝zhuang實shi就jiu行xing。裝zhuang完wan的de柱zhu子zi應ying該gai要yao適shi度du的de緊jin密mi(太密了淋洗劑走的太慢),一定要均勻(不然樣品就會從一側斜著下來)。書(shu)中(zhong)寫(xie)的(de)都(dou)是(shi)不(bu)能(neng)見(jian)到(dao)氣(qi)泡(pao),我(wo)覺(jiao)得(de)在(zai)大(da)多(duo)數(shu)情(qing)況(kuang)下(xia)有(you)些(xie)小(xiao)氣(qi)泡(pao)沒(mei)太(tai)大(da)的(de)影(ying)響(xiang),一(yi)加(jia)壓(ya)氣(qi)泡(pao)就(jiu)全(quan)下(xia)來(lai)了(le)。當(dang)然(ran)如(ru)果(guo)你(ni)裝(zhuang)的(de)柱(zhu)子(zi)總(zong)是(shi)有(you)氣(qi)泡(pao)就(jiu)說(shuo)明(ming)需(xu)要(yao)多(duo)練(lian)習(xi)了(le)。但(dan)是(shi)柱(zhu)子(zi)更(geng)忌(ji)諱(hui)的(de)是(shi)開(kai)裂(lie),甭(beng)管(guan)豎(shu)的(de)還(hai)是(shi)橫(heng)的(de),都(dou)會(hui)影(ying)響(xiang)分(fen)離(li)效(xiao)果(guo),甚(shen)至(zhi)作(zuo)廢(fei)!
2.加樣:
用(yong)少(shao)量(liang)的(de)溶(rong)劑(ji)溶(rong)樣(yang)品(pin)加(jia)樣(yang),加(jia)完(wan)後(hou)將(jiang)下(xia)麵(mian)的(de)活(huo)塞(sai)打(da)開(kai),待(dai)溶(rong)劑(ji)層(ceng)下(xia)降(jiang)至(zhi)石(shi)英(ying)砂(sha)麵(mian)時(shi),再(zai)加(jia)少(shao)量(liang)的(de)低(di)極(ji)性(xing)溶(rong)劑(ji),然(ran)後(hou),再(zai)打(da)開(kai)活(huo)塞(sai),如(ru)此(ci),兩(liang)三(san)次(ci),一(yi)般(ban)石(shi)英(ying)砂(sha)就(jiu)基(ji)本(ben)是(shi)白(bai)色(se)的(de)了(le)。加(jia)入(ru)淋(lin)洗(xi)劑(ji),一(yi)開(kai)始(shi)不(bu)要(yao)加(jia)壓(ya),等(deng)溶(rong)樣(yang)品(pin)的(de)溶(rong)劑(ji)和(he)樣(yang)品(pin)層(ceng)有(you)一(yi)段(duan)距(ju)離(li)(2~100px 就夠了),再加壓,這樣避免了溶劑(如,二氯甲烷等)夾帶樣品快速下行。
3.淋洗劑的選擇:
感覺上要使所需點在 Rf0.2~0.3 左右的比較好。不要認為在板上爬高了分的比較開,過柱子就用那種極性,如果 Rf 在 0.6,即使相差 0.2 也不容易在柱子上分開,因為柱子是一個多次爬板的狀態。
可以通過公式的比較:
0.6/0.8一次的分離度,肯定不如(0.2/0.3)的三次方或四次方大。
4.樣品的收集:
用(yong)矽(gui)膠(jiao)作(zuo)固(gu)定(ding)相(xiang)過(guo)柱(zhu)子(zi)的(de)原(yuan)理(li)是(shi)一(yi)個(ge)吸(xi)附(fu)與(yu)解(jie)吸(xi)的(de)平(ping)衡(heng),所(suo)以(yi),如(ru)果(guo)樣(yang)品(pin)與(yu)矽(gui)膠(jiao)的(de)吸(xi)附(fu)比(bi)較(jiao)強(qiang)的(de)話(hua),就(jiu)不(bu)容(rong)易(yi)流(liu)出(chu)。這(zhe)樣(yang)就(jiu)會(hui)發(fa)生(sheng),後(hou)麵(mian)的(de)點(dian)先(xian)出(chu),而(er)前(qian)麵(mian)的(de)點(dian)後(hou)出(chu)。這(zhe)時(shi)可(ke)以(yi)采(cai)用(yong)氧(yang)化(hua)鋁(lv)作(zuo)固(gu)定(ding)相(xiang)。
另(ling)外(wai),收(shou)集(ji)的(de)試(shi)管(guan)大(da)小(xiao)要(yao)以(yi)樣(yang)品(pin)量(liang)而(er)定(ding),特(te)別(bie)是(shi)小(xiao)量(liang)樣(yang)品(pin),如(ru)果(guo)用(yong)大(da)試(shi)管(guan),可(ke)能(neng)一(yi)根(gen)就(jiu)收(shou)到(dao)了(le)三(san)個(ge)樣(yang)品(pin)。嗚(wu)嗚(wu),如(ru)果(guo)都(dou)用(yong)小(xiao)試(shi)管(guan)那(na)工(gong)作(zuo)量(liang)又(you)太(tai)大(da)。
5.最後的處理:
柱(zhu)分(fen)後(hou)的(de)產(chan)品(pin),由(you)於(yu)使(shi)用(yong)了(le)大(da)量(liang)的(de)溶(rong)劑(ji),其(qi)中(zhong)的(de)雜(za)質(zhi)也(ye)會(hui)累(lei)積(ji)到(dao)產(chan)品(pin)中(zhong),所(suo)以(yi),如(ru)果(guo)想(xiang)送(song)分(fen)析(xi),最(zui)好(hao)用(yong)少(shao)量(liang)的(de)溶(rong)劑(ji)洗(xi)滌(di)一(yi)下(xia),因(yin)為(wei),大(da)部(bu)分(fen)雜(za)質(zhi)溶(rong)在(zai)溶(rong)劑(ji)裏(li),一(yi)洗(xi)基(ji)本(ben)就(jiu)沒(mei)了(le),必(bi)要(yao)時(shi)進(jin)行(xing)重(zhong)結(jie)晶(jing)。