一. 分離原理

    尺寸排阻色譜法：是按分子尺寸的差異進行分離的一種液相色譜方法，也稱凝膠色譜法。

    排阻色譜的固定相多為凝膠。凝膠是一種由有機分子製成的分子篩 , 其表麵惰性 , 含有許多不同大小孔穴或立體網狀結構。凝膠的孔穴大小與被分離組分大小相當 , 對不同大小的組分分子則可分別滲到凝膠孔內的不同深度。尺寸大的組分分子可以滲入到凝膠的大孔內 , 但進不了小孔 , 甚至於完全被排斥，先流出色譜柱。尺寸小的組分分子, 大孔小孔都可以滲進去, 最後流出。因此 , 大的組分分子在色譜柱中停留時間較短, 很快被洗出。小的組分分子在色譜柱中停留時間較長。經過一定時間後, 各組分按分子大小得到分離。

    當組分X進入柱子後,它就要從高濃度的流動相向固定相孔隙內的流動相擴散。當組分X進入色譜固定相達到擴散平衡時：

X_m ⇌ X_n

組分的分配係數為：       

尺寸排阻色譜中任何組分的分配係數應符合：0 ≤ K ≤ 1

二. 固定相

    尺寸排阻色譜常用固定相有無機和有機兩大類。

無機凝膠：又稱硬質凝膠。是具有一定孔徑範圍的多孔性凝膠

，如多孔矽膠
、多孔玻璃珠等，此類凝膠化學惰性、穩定性及機械強度均好，耐高溫，使用壽命長，但裝柱時易碎，不易裝緊，柱效較低。

有機凝膠：又(you)稱(cheng)半(ban)硬(ying)質(zhi)凝(ning)膠(jiao)。如(ru)苯(ben)乙(yi)烯(xi)二(er)乙(yi)烯(xi)苯(ben)交(jiao)聯(lian)共(gong)聚(ju)物(wu)凝(ning)膠(jiao)，能(neng)耐(nai)較(jiao)高(gao)壓(ya)力(li)，適(shi)用(yong)於(yu)有(you)機(ji)溶(rong)劑(ji)作(zuo)流(liu)動(dong)相(xiang)
，有(you)一(yi)定(ding)可(ke)壓(ya)縮(suo)性(xing)
，可(ke)填(tian)得(de)緊(jin)密(mi)，柱(zhu)效(xiao)較(jiao)高(gao)。但(dan)在(zai)有(you)機(ji)溶(rong)劑(ji)中(zhong)有(you)輕(qing)度(du)膨(peng)脹(zhang)。新(xin)型(xing)凝(ning)膠(jiao)色(se)譜(pu)填(tian)料(liao)，克(ke)服(fu)了(le)傳(chuan)統(tong)軟(ruan)填(tian)料(liao)的(de)一(yi)些(xie)弱(ruo)點(dian)，粒(li)度(du)細(xi)
，機(ji)械(xie)強(qiang)度(du)高(gao)
，分(fen)離(li)速(su)度(du)快(kuai)，效(xiao)果(guo)好(hao)
，特(te)別(bie)是(shi)無(wu)機(ji)填(tian)料(liao)表(biao)麵(mian)鍵(jian)合(he)親(qin)水(shui)性(xing)單(dan)分(fen)子(zi)層(ceng)或(huo)多(duo)層(ceng)覆(fu)蓋(gai)的(de)單(dan)糖(tang)或(huo)多(duo)糖(tang)型(xing)等(deng)填(tian)料(liao)廣(guang)泛(fan)用(yong)於(yu)生(sheng)物(wu)大(da)分(fen)子(zi)的(de)分(fen)離(li)。

三. 流動相

    尺寸排阻色譜流動相：從樣品的溶解性考慮，流動相應與凝膠本身有相似性，黏度低，與樣品的折光率相差大；能潤濕凝膠，防止吸附作用。

    常用的流動相有四氫呋喃、甲苯、N，N’-二甲基甲酸胺

、三氯甲烷（凝膠滲透色譜）；水（凝膠過濾色譜）等。

（可用於分離相對分子質量大的分子，如蛋白質、核酸等）