【原理】
病(bing)原(yuan)性(xing)葡(pu)萄(tao)球(qiu)菌(jun)能(neng)產(chan)生(sheng)血(xue)漿(jiang)凝(ning)固(gu)酶(mei)，使(shi)血(xue)漿(jiang)中(zhong)纖(xian)維(wei)蛋(dan)白(bai)原(yuan)變(bian)為(wei)不(bu)溶(rong)性(xing)纖(xian)維(wei)蛋(dan)白(bai)
，附(fu)於(yu)細(xi)菌(jun)表(biao)麵(mian)
，生(sheng)成(cheng)凝(ning)塊(kuai)


，因(yin)而(er)具(ju)有(you)抗(kang)吞(tun)噬(shi)的(de)作(zuo)用(yong)。凝(ning)固(gu)酶(mei)試(shi)驗(yan)對(dui)於(yu)判(pan)定(ding)該(gai)菌(jun)株(zhu)是(shi)否(fou)具(ju)有(you)致(zhi)病(bing)力(li)
，很(hen)有(you)幫(bang)助(zhu)。葡(pu)萄(tao)球(qiu)菌(jun)凝(ning)固(gu)酶(mei)試(shi)驗(yan)被(bei)廣(guang)泛(fan)地(di)用(yong)於(yu)常(chang)規(gui)鑒(jian)定(ding)金(jin)黃(huang)色(se)葡(pu)萄(tao)球(qiu)菌(jun)與(yu)其(qi)他(ta)葡(pu)萄(tao)球(qiu)菌(jun)。

葡萄球菌所產生的凝固酶有兩種：結合凝固酶和遊離凝固酶。

結合凝固酶（即凝聚因子）：是(shi)一(yi)種(zhong)結(jie)合(he)於(yu)菌(jun)體(ti)細(xi)胞(bao)壁(bi)的(de)酶(mei)

，它(ta)直(zhi)接(jie)作(zuo)用(yong)於(yu)血(xue)漿(jiang)中(zhong)纖(xian)維(wei)蛋(dan)白(bai)原(yuan)，使(shi)之(zhi)變(bian)成(cheng)纖(xian)維(wei)蛋(dan)白(bai)，而(er)使(shi)葡(pu)萄(tao)球(qiu)菌(jun)凝(ning)集(ji)成(cheng)塊(kuai)，玻(bo)片(pian)法(fa)陽(yang)性(xing)結(jie)果(guo)是(shi)由(you)此(ci)酶(mei)（凝聚因子）所致。

遊離凝固酶：是凝血酶原樣物質
，不直接作用於血漿纖維蛋白原上
，而被血漿中的致活劑（即凝固酶致活因子）jihuohou，bianchengnairedeningxuemeiyangwuzhi，ciwuzhikeshixuejiangzhongdeyetaixianweidanbaiyuanbianweigutaixianweidanbai，congershixuejiangninggu。shiguanfadeyangxingjieguoweicimeisuozhi。

【方法】
（1）玻片法：在1張潔淨玻片中央加1滴9g／L氯化鈉(生理鹽水)溶液，用接種環取待檢培養物與其混合（設陽性和陰性對照） 製成菌懸液，若經10～20s 內無自凝現象發生
，則加入兔新鮮血漿1環，與菌懸液混合，觀察結果。
（2）試管法：用生理鹽水將新鮮兔血漿4倍稀釋，取0．5 ml於試管再加0.5ml待測菌濃菌懸液（需做陽性對照及陰性對照。），混勻後置37℃水浴中

，每30min觀察1次結果。若3小時內試驗管和陽性對照管出現凝固，陰性對照管（即濃菌液管）不凝固，為陽性；若陰性，繼續觀察到24小時
，不凝固者為陰性。

【結果判斷】
（1）玻片法：5～10s內出現凝集者為陽性。
（2）試管法：如有凝塊或整管凝集出現為陽性。4h後無上述現象出現

，則放置過夜後再觀察。

【應用】
本試驗僅用於致病性葡萄球菌的鑒定。

【注意事項】
（1）玻片法：10 秒內觀察結果，如超過10 秒可出現假陽性
，因此必須用試管法驗證凝聚因子試驗。

（2）可選擇的玻片凝集試驗法還包括檢測凝集因子和蛋白A的膠乳凝集試驗。但膠乳凝集試驗和玻片凝固酶試驗的結果並不完全一致。盡管膠乳凝集試驗鑒定路鄧葡萄球菌(Staphylococcus  lugdunensis）的de可ke靠kao性xing較jiao差cha，但dan鑒jian定ding金jin黃huang色se葡pu萄tao球qiu菌jun的de特te異yi性xing和he靈ling敏min性xing均jun高gao於yu傳chuan統tong的de玻bo片pian凝ning固gu酶mei試shi驗yan。有you些xie腐fu生sheng葡pu萄tao球qiu菌jun和he鬆song鼠shu葡pu萄tao球qiu菌jun及ji某mou些xie微wei球qiu菌jun屬shu的de菌jun種zhong可ke能neng膠jiao乳ru凝ning集ji試shi驗yan陽yang性xing
，但dan玻bo片pian凝ning固gu酶mei試shi驗yan通tong常chang陰yin性xing。

（3）試管法：須製備濃厚的均勻菌懸液，以便觀察結果。
a.試shi管guan法fa葡pu萄tao球qiu菌jun凝ning固gu酶mei試shi驗yan陽yang性xing者zhe，應ying見jian到dao明ming顯xian的de纖xian維wei蛋dan白bai凝ning膠jiao塊kuai，出chu現xian羊yang毛mao狀zhuang或huo纖xian維wei狀zhuang沉chen澱dian物wu並bing非fei真zhen正zheng凝ning固gu
，應ying判pan為wei陰yin性xing。中zhong間jian型xing葡pu萄tao球qiu菌jun
、豬葡萄球菌需要較長時間（4H以上）孵育，才可出現陽性。
b.如果培養時間超過4H
，應考慮以下幾點：
Ⅰ.延長培養時間後
，有些菌株產生的葡萄球菌激酶（溶纖維蛋白酶），可以裂解凝塊
，產生假陰性結果
；
Ⅱ.如果使用的血漿不是無菌的（或部分不是無菌的）
，假陽性和假陰性結果均有可能發生；
Ⅲ.所用待測菌不純，延長培養時間後，汙染菌可能導致假陽性結果。在這點上
，含EDTA的血漿優於檸檬酸鹽血漿
，因為利用檸檬酸鹽的細菌（如一些鏈球菌）可能通過消耗檸檬酸鹽促進凝集發生。
Ⅳ.所用血漿缺乏纖維蛋白原（脫纖維血漿）。

（4）最好用EDTA 抗凝的兔血漿，不主張用人的抗凝血，除非經過試驗證實其中不含感染因子、沒有凝血能力和沒有抑製因子。不同種動物血漿因子不同，凝固狀態也不同，兔血漿凝塊結實，凝固速度快，優於人血漿。

（5）試驗不可在高鹽培養基上的取菌落
，因為可能出現自凝或假陽性。

（6）若被檢菌為陳舊的肉湯培養物（超過18～24H）
，或生長不良，凝固酶活性低的菌株可能檢測不出來。

(7)為防止玻片法檢測的假陽性反應，必須嚴格按《全國臨床檢驗操作規程》進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)。當(dang)懷(huai)疑(yi)待(dai)測(ce)菌(jun)是(shi)金(jin)黃(huang)色(se)葡(pu)萄(tao)球(qiu)菌(jun)時(shi)，對(dui)玻(bo)片(pian)凝(ning)固(gu)酶(mei)陰(yin)性(xing)的(de)結(jie)果(guo)應(ying)做(zuo)試(shi)管(guan)法(fa)凝(ning)固(gu)酶(mei)試(shi)驗(yan)確(que)證(zheng)。玻(bo)片(pian)法(fa)和(he)試(shi)管(guan)法(fa)凝(ning)固(gu)酶(mei)試(shi)驗(yan)的(de)血(xue)漿(jiang)標(biao)準(zhun)是(shi):必須含有足夠濃度的凝固酶反應因子和纖維蛋白原，必須無溶纖維蛋白活性和無抑製劑。

附：
1.玻片法檢測血漿凝固酶陽性的菌有：金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）
、裏昂葡萄球菌（即：路鄧葡萄球菌Staphylococcus  lugdunensis）
、施氏葡萄球菌凝聚亞種（Staphylococcus schleiferi ssp. coagulans）及部份中間型葡萄球菌（staphylococcus intermedius）。

2.試管法檢測血漿凝固酶陽性的菌有：金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）
、施氏葡萄球菌凝聚亞種（Staphylococcus schleiferi ssp. coagulans）
、中間型葡萄球菌（staphylococcus intermedius）、海豚葡萄球菌(Staphylococus delphini)及部份豬葡萄球菌（staphylococcus hyicus)。

3.我做的試管法試驗圖：
左：測定管(陰性)
， 右：標準金葡菌株(陽性)

4.關於路鄧葡萄球菌Staphylococcus  lugdunensis）：菌落直徑常為4～7MM


，平滑


，有光澤，可能無色素沉著或呈現奶油色至橘黃色。邊緣完整，相當扁平，中心呈輕微圓錐狀凸起。玻片凝固酶試驗（+）。可分解海藻糖、甘露糖、麥芽糖、蔗糖且產酸，不分解甘露醇且不產酸。PYR（pyrrolidonase：吡咯烷酮基芳胺酶）(+)、ODC（+）（培養8H觀察
，此時表皮葡萄球菌為陰性。）。

5.關於施氏葡萄球菌（Staphylococcus schleiferi ssp.）：菌落直徑常為3～5MM且無色素沉著，光滑有光澤，輕微凸起，邊緣完整。玻片凝固酶試驗（+）。PYR（pyrrolidonase：吡咯烷酮基芳胺酶）(+)。可分解甘露糖
，有時也分解海藻糖而產酸
，但不分解甘露醇、麥芽糖或蔗糖。