產氣莢膜梭菌為厭氧芽胞菌，是引起食源性胃腸炎最常見的病原之一。可引起典型的食物中毒、爆發。由產氣莢膜梭菌引起的疾病為魏氏梭菌中毒。患者臨床特征是劇烈腹絞痛和腹瀉。攝食被本菌汙染的食品後8�22小時開始發病。在食品中該菌數量必須達到很高時（1.0×10⁷或更多），才能在腸道中生產毒素

，病程通常在24小時內，但某些個體的不顯著症狀可能會持續1�2周

，已報導有少數病人因脫水和其它混合感染而導致死亡。

　　據美國人類衛生教育福利部報導魏氏梭菌引起的食物中毒
，在美國占細菌性食物中毒的30%左右，另據美國疾病控製中心，估計每年因產氣莢膜梭菌引起的食物中毒約近1萬人，其中大約隻報導1200例，暴發約20起
，大量的暴發和少量的發病都與公共飲食有關。例如：學校的自助食堂和護理病房，產氣莢膜梭菌中毒最常發生於兒童和老人。

　　產氣莢膜梭菌廣泛分布於環境中，經常在人和許多家養及野生動物的腸道中發現該細菌的芽胞長期存在於土壤和沉澱物中，從牛肉、豬肉
、羔羊
、雞
、火雞、燜肉、紅hong燒shao蔬shu菜cai，燉dun肉rou和he肉rou汁zhi中zhong分fen離li的de產chan氣qi莢jia膜mo梭suo菌jun
，引yin起qi食shi物wu中zhong毒du的de食shi品pin大da多duo是shi畜chu禽qin肉rou類lei和he魚yu類lei食shi物wu，牛niu奶nai也ye可ke因yin汙wu染ran而er引yin起qi中zhong毒du，原yuan因yin是shi因yin為wei食shi品pin加jia熱re不bu徹che底di
，使shi芽ya胞bao在zai食shi品pin中zhong大da量liang繁fan殖zhi所suo致zhi
，此ci外wai不bu少shao熟shu食shi品pin，由you於yu加jia溫wen不bu夠gou或huo後hou汙wu染ran而er在zai緩huan慢man的de冷leng卻que過guo程cheng中zhong，細xi菌jun繁fan殖zhi體ti大da量liang繁fan殖zhi並bing形xing成cheng芽ya胞bao產chan生sheng腸chang毒du素su，其qi食shi品pin並bing不bu一yi定ding在zai色se味wei上shang發fa現xian明ming顯xian的de變bian化hua

，人ren們men在zai誤wu食shi了le這zhe樣yang的de熟shu肉rou或huo湯tang菜cai，就jiu有you可ke能neng發fa病bing。

　　產氣莢膜梭菌易於形成芽胞
，芽胞的熱抵抗力很強，由患者糞便中分離的芽胞能耐受100℃,1�5小時的加熱。除了具有形成芽胞及耐熱等特點之外，生化性狀

，毒素及酶的特異性等，同其它魏氏梭菌是一致的。

　　當(dang)產(chan)品(pin)達(da)到(dao)合(he)適(shi)溫(wen)度(du)時(shi)
，那(na)些(xie)未(wei)被(bei)殺(sha)死(si)的(de)芽(ya)胞(bao)，由(you)於(yu)蒸(zheng)煮(zhu)而(er)使(shi)其(qi)可(ke)能(neng)發(fa)芽(ya)。蒸(zheng)煮(zhu)後(hou)需(xu)要(yao)經(jing)過(guo)快(kuai)速(su)一(yi)致(zhi)的(de)冷(leng)卻(que)。事(shi)實(shi)上(shang)在(zai)所(suo)有(you)暴(bao)發(fa)的(de)病(bing)例(li)中(zhong)，產(chan)氣(qi)莢(jia)膜(mo)梭(suo)菌(jun)中(zhong)毒(du)的(de)主(zhu)要(yao)原(yuan)因(yin)是(shi)沒(mei)有(you)經(jing)過(guo)恰(qia)當(dang)冷(leng)卻(que)事(shi)先(xian)煮(zhu)好(hao)的(de)食(shi)品(pin)，特(te)別(bie)當(dang)做(zuo)好(hao)的(de)食(shi)品(pin)量(liang)又(you)是(shi)很(hen)大(da)時(shi)，適(shi)當(dang)的(de)熱(re)處(chu)理(li)（60℃以上）充分的再加熱，冷卻食品（最低中心溫度為24℃）也是必要的控製措施，培訓食品加工人員
，仍是控製措施的一個關鍵方麵。

1、形態：

　　本菌菌體兩端鈍圓
，直杆狀1-2×2-10μm，gelanshiyangxing
，luanyuanxingyabaoweiyujuntizhongyanghuojinduan，bubijuntimingxianpengda，danyouxiejunzhuzaiyibandepeiyangtiaojianxiahennanxingchengyabao，wubianmao，zairenhedongwuhuotizuzhineihuozaihanxueqingdepeiyangjineishengchangshiyoukenengxingchengjiamo。

2、培養：

　　本菌雖屬厭氧性細菌，但對厭氧程度的要求並不太嚴，甚至在EH=200-250mv的環境內也能生長。

　　在普通培養基上能生長，若加葡萄糖，血液，則生長更好。生長適宜溫度為37-47℃，多認為43-47℃為最宜本菌生長和繁殖速度極快
，在適宜條件下增代時間僅8min
，可利用高溫快速培養法，對本菌進行選擇分離，如在45℃下，每培養3-4小時傳種1ci

，jikejiaoyihuodechunpeiyang，zaishencengputaotangqiongzhizhongdaliangchanqi，zhishiqiongzhiposui，zainiunaipeiyangjizhong，kejiandaobaoliefajiao，zaipaoroupeiyangjizhongpeiyangshuxiaoshijikejiandaoshengchang
，chanshengdaliangqiti

，rouzhahuoroukuaibianweilvedaifense，danbubeixiaohua。

　　在普通瓊脂平板上培養15小時左右可見到菌落
，培養24小時菌落直徑2�4mm，呈cheng凸tu麵mian狀zhuang
，表biao麵mian光guang滑hua半ban透tou明ming，正zheng圓yuan形xing
，在zai營ying養yang成cheng分fen不bu足zu或huo瓊qiong脂zhi濃nong度du高gao的de平ping板ban上shang
，有you時shi尤you其qi經jing過guo傳chuan種zhong的de菌jun株zhu，可ke能neng形xing成cheng鋸ju齒chi狀zhuang邊bian緣yuan或huo帶dai放fang射she狀zhuang條tiao紋wen的deR型菌落。

　　在含人血、兔血或綿羊血的瓊脂平板上培養的菌落周圍有雙層溶血環，內層溶血完全
，外層溶血不完全，好似靶狀。

　　在乳糖、牛奶、卵黃瓊脂平板上培養的菌落周圍出現乳光渾濁帶。此反應能被本菌α抗毒素抑製。由於發酵乳糖菌落周圍的培養基顏色發生變化（中性紅指示劑呈粉紅色）不消化牛奶
，不分解遊離脂肪
，菌落周圍不出現透明環及虹彩層。

3、生化特性：

　　所有菌株均發酵葡萄糖
、麥芽糖
、rutangjizhetang，chansuanchanqi，yehuamingjiao，buchanshengdianjizhi
，haiyuanxiaosuanyanweiyaxiaosuanyan，danyeyouliwai。nengjiangyaliusuanyanhaiyuanweiliuhuawu。zaihanyaliusuanyanjitieyandeqiongzhizhongxingchengheisejunluo。fajiaoniunaizhongderutang
、牛奶酸凝固，同時由於大量產氣凝塊碎裂，所謂暴力發酵，這是本菌的主要生化特征之一
，也是主要鑒別的指標。G+C克分子百分比為24-27%。

　　產生卵磷脂酶（磷酸酶C）分解卵磷脂為磷酰膽堿與非水溶性甘油二酸酯，上述卵黃瓊脂平板菌落周圍出現的乳光渾濁帶即屬本反應。

4、毒素:

　　(1)、外毒素:各型產氣莢膜梭菌產生的外毒素(或可溶血抗原)共有12種,其中主要有4型,即A、B

、C、D.而已知〝A型〞毒素與人類食物中毒有關。

　　(2)
、腸毒素:A型產氣莢膜梭菌的耐熱株能引起人的食物中毒,關於產氣莢膜梭菌食物中毒的發病機製,基本認為是,被耐熱性A型產氣莢膜梭菌芽胞汙染的肉、禽等生食品,雖經烹製加熱,但芽胞不僅不死滅,反而由於受到〝熱刺激〞,在較高溫度長時間儲存(即緩時冷卻)的過程中芽胞發芽,生長,繁殖,而且隨食物進入人腸道的這些繁殖體容易再形成芽胞,同時產生腸毒素,聚集於芽胞內,當菌體細胞自溶和芽胞遊離時
，腸毒素將被釋放出來,人、猴、狗等口服人工提取的該腸毒素能引起腹瀉。

　　人和動物對產氣莢膜梭菌的毒素的免疫主要表現為抗腸毒素的產生,健康者血清常含有抗腸毒素,似乎表明產氣莢膜梭菌作為正常菌群,在腸道內可能在不斷地產生著腸毒素。

1
、樣品的儲存和運送:

　　如樣品不能立即進行檢驗時,應在樣品中加等量緩衝甘油--氯化鈉溶液(液體食品應加雙料的),將樣品做低溫保存,直到檢驗,運送樣品時,應使樣品保持冷凍狀態,並要避免容器消損。

2、將解凍樣品取25g移入滅菌的均質杯,並加入0.1%蛋白腖水225mL,低速攪拌1-2分鍾,使之均質化,作為1:10稀釋液,以上1:10稀釋的均質液,按1mL加入0.1%蛋白腖水9mL,作做成10^-2--10^-6的係列稀釋液,(如為液體樣品則可吸取25mL加入盛有225mL稀釋劑的500mL稀釋並搖勻,再作10倍遞增稀釋即可)。

　　傾注不含卵黃的TSC瓊脂倒10個滅菌平皿中,每皿約5mL,並迅速旋轉平皿,使瓊脂凝固後,將每個平皿編號標記,以無菌操作,吸取稀釋樣品1mL分別加到每個瓊脂平板表麵中心,再向平皿傾注不含卵黃的TSC瓊脂15mL,緩慢地旋轉平皿,使其與接種物混合均勻.也可用滅菌L棒,將0.1mL樣品稀釋液均勻地塗布於不含卵黃乳液的TSC瓊脂上,將平板水平靜置5-10分鍾,使接種物被吸收,然後用不含卵黃的TSC瓊脂10mL覆蓋平板表層,瓊脂凝固後,將平板置於厭氧罐內於36+1℃,培養20小時,取出平板,用肉眼觀察生長情況和有無黑色菌落,挑選有20-200個黑色菌落的平板進行記數，產氣莢膜梭菌的菌落一般呈黑色。

3
、證實:

　　從可記數的平板(具20-200個菌落)中挑選10個典型菌落,分別接種到液體硫乙醇酸鈉培養基試管中,於36±1℃,培養18-24小時,取培養物塗片,作革蘭氏染色鏡檢,檢查培養物的純度和細菌形態,產氣莢膜梭菌為革蘭氏陽性,粗短的梭狀芽胞杆菌.對於被汙染的培養物可劃線接種在含有卵黃的TSC瓊脂平板上,於厭氧條件下以36±1℃,24小時培養,以獲得純培養物。

　　上述培養物,以接種針穿刺接種動力,硝酸鹽培養基36±1℃厭氧培養24小時觀察有無動力,滴加甲萘胺液和對氨基苯磺酸液各0.5mL,觀察硝酸鹽是否被還原,取生長旺盛的硫乙醇酸鈉培養液1mL接種含鐵牛奶培養基,厭氧培養過夜或46℃2-5小時觀察有無暴烈發酵現象,但培養基不變黑,將培養液點種卵黃瓊脂平板(每個平板至少可點種10點),倒置厭氧培養裝置內36±1℃培養24小時,觀察接種點,產氣莢膜梭菌產生卵磷脂酶,分解卵黃中的卵磷脂,使接種點的底部及周圍形成乳白色的渾濁帶.此外還可作明膠液化及含1%水楊甙和含1%棉子糖的發酵試驗等,對上述四項主要生化試驗,全部符合者即可確定為產氣莢膜梭菌。

4、結果解釋及報告:

　　樣品中產氣莢膜梭菌的計算,基於被證實為產氣莢膜梭菌菌落的百分數(例如10‐4稀釋的平板中,平均有85個菌落,10個菌落中,有8個被證實為產氣莢膜梭菌,那麼每1g食品中產氣莢膜梭菌數即為85×(8/10)×10000=680000),報告產氣莢膜梭狀芽胞杆菌數/g(mL) 。

產氣莢膜梭菌檢驗檢測程序

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檢樣25g(mL)或稀釋液225mL

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TSC瓊脂混合傾注

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黑色菌落記數

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任挑黑色菌落10個,分別接種FT培養基

↓

確證試驗

↓

↓

菌落計數

　　假如對分離的菌株,直接測試芽胞和腸毒素,應在硫乙醇酸鹽肉湯中繼續培養,如上述,將儲存培養物移至其它實驗室作測試時,必須先將其移種至Difco公司生產的熟肉培養基中,並於35℃培養24小時,然後再置於室溫中24小時,並將此熟肉培養物放置在4℃保存。

　　用旋轉混合熟肉培養物,並分別各移種0.5mL至2支含10mL新鮮經殺菌的液體硫乙醇酸鹽培養基中,將其中1管置於有水的燒杯中,或在水浴中加熱75℃10分鍾,於35℃培養18小時,另外1管在35℃培養4小時,並將此培養物接種改良AE芽胞形成培養基中,最好用0.75mL經4小時培養的硫乙醇酸鹽的培養基,接種到芽胞肉湯中,於35℃厭氧罐中,培養18-24小時。

　　核對培養結果,用相差顯微鏡觀察芽胞或作塗片染色鏡檢,顯微鏡視野中少於5個芽胞的認為芽胞形成不良。

　　將芽胞形成培養物用10000×g轉速15分鍾離心,並將無細胞的芽胞培養物,以反向乳凝試劑盒,檢測腸毒素。

　　適宜的冷卻處理和再加熱
，食品加工人員的教育。 當dang產chan品pin達da到dao合he適shi溫wen度du時shi
，那na些xie未wei被bei殺sha死si的de芽ya胞bao可ke能neng發fa芽ya。蒸zheng煮zhu後hou需xu要yao經jing過guo快kuai速su統tong一yi的de冷leng卻que
，事shi實shi上shang在zai所suo有you的de爆bao發fa病bing例li中zhong
，產chan氣qi莢jia膜mo梭suo菌jun中zhong毒du的de主zhu要yao原yuan因yin是shi沒mei有you經jing過guo恰qia當dang冷leng卻que事shi先xian煮zhu好hao的de食shi品pin
，特te別bie當dang食shi品pin量liang又you是shi很hen大da時shi。適shi當dang的de熱re處chu理li，充chong分fen的de再zai加jia熱re，冷leng卻que食shi品pin，也ye是shi必bi要yao的de控kong製zhi措cuo施shi。食shi品pin加jia工gong人ren員yuan的de教jiao育yu仍reng是shi控kong製zhi的de一yi個ge關guan鍵jian方fang麵mian。