1.營養成分
1)通常在培養基中加入磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀和硫酸鎂,以補充磷、鉀、硫、鎂元素,如果同時加入鈣鹽和(亞)鐵鹽,它們用量要適當加大,主要是考慮它們之間會發生反應形成不溶性的磷酸鹽或氫氧化物,影響微生物的利用。蛋白腖、酵母膏和其他生物製品中都含有磷酸鹽,若培養基中有Mg2+和Ca2+等離子,就會出現沉澱、渾濁。為避免生成沉澱,可將鹽配成溶液,分開滅菌後再加入培養基。
2)有些糖類或營養物質如葡萄糖、維生素等在高溫高壓下會被破壞,故應降低壓力、溫度或縮短滅菌時間,或用過濾或其他方法除菌。
3)除培養固氮菌外,在培養基中需加入無機氮源或有機氮源。許多細菌不能利用硝酸鹽、宜用銨鹽作為無機氮源;真菌大多可利用銨鹽,也可利用硝酸鹽。細菌雖能利用無機氮,但不如利用有機氮普遍,常用的有機氮源有蛋白腖、牛肉膏和水解酪蛋白等。
4)配(pei)製(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)時(shi),營(ying)養(yang)物(wu)質(zhi)的(de)濃(nong)度(du)應(ying)適(shi)當(dang),太(tai)低(di)不(bu)能(neng)滿(man)足(zu)生(sheng)長(chang)需(xu)求(qiu),偏(pian)高(gao)會(hui)使(shi)菌(jun)體(ti)瘋(feng)長(chang),過(guo)高(gao)還(hai)會(hui)抑(yi)製(zhi)微(wei)生(sheng)物(wu)生(sheng)長(chang)。所(suo)以(yi)配(pei)製(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)應(ying)按(an)規(gui)定(ding)的(de)濃(nong)度(du)配(pei)製(zhi)。
2.pH值
微生物要求培養基有適宜的pH值,但它們的代謝作用又會改變培養基pH。所以在配製培養基時,不僅培養基的起始pH值應符合微生物的要求,還要考慮采用何種緩衝作用保持其pH。一yi般ban在zai培pei養yang產chan酸suan的de微wei生sheng物wu時shi可ke在zai培pei養yang基ji中zhong加jia入ru適shi量liang碳tan酸suan鈣gai,以yi中zhong和he不bu斷duan產chan生sheng的de酸suan。在zai合he成cheng培pei養yang基ji中zhong,組zu成cheng成cheng分fen中zhong含han有you磷lin酸suan鹽yan者zhe一yi般ban都dou已yi設she計ji好haopH值,故不需要再專門調pH值。若pH值降到4.5以下,瓊脂固體培養基滅菌後將不再凝固,或凝固不堅,可將相關成分分別滅菌後再混合較好。
3.滅菌
一yi般ban培pei養yang基ji均jun采cai用yong濕shi熱re高gao溫wen高gao壓ya滅mie菌jun,滅mie菌jun後hou培pei養yang基ji顏yan色se若ruo變bian褐he色se或huo褐he色se加jia深shen,主zhu要yao原yuan因yin是shi還hai原yuan糖tang類lei與yu蛋dan白bai質zhi和he氨an基ji酸suan在zai高gao溫wen高gao壓ya下xia發fa生sheng了le美mei拉la德de反fan應ying。這zhe種zhong褐he色se物wu質zhi會hui抑yi製zhi微wei生sheng物wu的de生sheng長chang,應ying盡jin量liang防fang止zhi。縮suo短duan高gao溫wen滅mie菌jun時shi間jian,或huo將jiang糖tang與yu含han氮dan化hua合he物wu分fen開kai滅mie菌jun,可ke防fang止zhi這zhe種zhong反fan應ying。
4. 培養基的物理狀態
含瓊脂培養基,若滅菌前未進行加熱溶解,滅菌後需充分搖勻使用。瓊脂培養基不可反複熔化使用;待用的瓊脂培養基可置47-50℃水浴保溫或50-60℃烘箱保溫,一般不可超過4小(xiao)時(shi)。若(ruo)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)含(han)有(you)較(jiao)多(duo)不(bu)溶(rong)性(xing)物(wu)質(zhi),如(ru)黃(huang)豆(dou)餅(bing)粉(fen),要(yao)盡(jin)量(liang)分(fen)裝(zhuang)均(jun)勻(yun),在(zai)滅(mie)菌(jun)時(shi)要(yao)盡(jin)量(liang)防(fang)止(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)噴(pen)出(chu)來(lai),可(ke)在(zai)滅(mie)菌(jun)結(jie)束(shu)後(hou)等(deng)會(hui)再(zai)開(kai)壓(ya)力(li)鍋(guo)或(huo)減(jian)少(shao)每(mei)瓶(ping)裝(zhuang)量(liang)。
總之,在配製培養基時我們既要考慮培養基組成成分,也要考慮培養基物理狀態、pHzhihemiejunxiaoguodeng。lingwaishuidechunduyehenzhongyao,yibantianranshuizhonghanyoujiaoduodekuangwuyanlizi,huiyingxiangpeiyangjizhongchangliangheweiliangyuansu,jineryingxiangweishengwudeshengchangfanzhi。
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