控製菌檢驗方法驗證
發布日期：2023-08-30
核心提示：一. 控製菌檢驗方法驗證建立藥品的微生物限度檢查時，進行控製菌檢查方法的驗證，以確認所采用的方法適合於該藥品的的控製菌檢查
一. 控製菌檢驗方法驗證
建(jian)立(li)藥(yao)品(pin)的(de)微(wei)生(sheng)物(wu)限(xian)度(du)檢(jian)查(zha)時(shi)，進(jin)行(xing)控(kong)製(zhi)菌(jun)檢(jian)查(zha)方(fang)法(fa)的(de)驗(yan)證(zheng)，以(yi)確(que)認(ren)所(suo)采(cai)用(yong)的(de)方(fang)法(fa)適(shi)合(he)於(yu)該(gai)藥(yao)品(pin)的(de)的(de)控(kong)製(zhi)菌(jun)檢(jian)查(zha)方(fang)法(fa)測(ce)定(ding)。若(ruo)藥(yao)品(pin)的(de)組(zu)分(fen)或(huo)原(yuan)檢(jian)驗(yan)條(tiao)件(jian)發(fa)生(sheng)改(gai)變(bian)可(ke)能(neng)影(ying)響(xiang)檢(jian)驗(yan)結(jie)果(guo)時(shi)，檢(jian)驗(yan)方(fang)法(fa)應(ying)進(jin)行(xing)重(zhong)新(xin)驗(yan)證(zheng)。驗(yan)證(zheng)試(shi)驗(yan)也(ye)可(ke)與(yu)供(gong)試(shi)品(pin)的(de)控(kong)製(zhi)菌(jun)檢(jian)查(zha)同(tong)時(shi)進(jin)行(xing)。大腸埃希菌（Esherichia coli）【CMCC(B) 44102】或同等有效的金黃色葡萄球菌（ Staphylococcus）【CMCC(B)26003】或同等有效的乙型付傷寒沙門菌（Salmonella paratyphi B）【CMCC(B) 50094】或同等有效的銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）【CMCC (B) 10104】或同等有效的驗證實驗所用的菌株傳代次數不得超過5代（從菌種保存中心獲得的冷凍幹燥菌種為0 代），並采用適宜的菌種保藏技術，以保證試驗菌株的生物學特性。大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型付傷寒沙門菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養物至10mL營養肉湯培養基中，35～37℃培養18～24小時；分別取培養液 1mL加0.9%無菌氯化鈉溶液，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-5~10-7，製成每1ml含菌數10～100CFU的菌懸液。設立陰性菌對照組是為了驗證該控製菌檢查方法的專屬性。方法同試驗組，驗證大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌檢查法時的陰性對照菌采用金黃色葡萄球菌；驗證銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌檢查法時的陰性對照菌采用大腸埃希菌。陰性對照菌不得檢出。
- 大腸埃希菌 取相當於1g或1mL供試品的供試液至100mL膽鹽乳糖培養基中，陽性菌對照加入大腸埃希菌10～100CFU，陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌 10～100CFU，35～37℃培養18～24小時，取此培養物按《微生物限度檢查SOP》大腸埃希菌項下規定檢查。
- 大腸菌群 取含適量（不少於10ml）的膽鹽乳糖發酵培養基管3支，分別加入含供試品1g或1mL 、0.1g或0.1mL、含供試品0.001g或0.001mL的供試液，陽性菌對照加入大腸埃希菌10～100CFU，陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌 10～100CFU，35～37℃培養18～24小時，按《微生物限度檢查SOP》大腸菌群項下規定檢查。
- 沙門菌 取供試品10g或10mL，直接或處理後接種至適量（不少於200mL）的營養肉湯培養基中，用勻漿儀或其他適宜方法混勻，陽性菌對照加入沙門菌 10～100CFU，陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌10～100CFU，35～37℃培養18～24小時。按《微生物限度檢查SOP》沙門菌項下規定檢查。
- 銅綠假單胞菌 取相當於1g或1mL供試品的供試液至100mL膽鹽乳糖培養基中，陽性菌對照加入銅綠假單胞菌10～100CFU，陰性菌對照加入大腸埃希菌10～100CFU，35～37℃培養18～24小時。按《微生物限度檢查SOP》沙門菌項下規定檢查。
- 金黃色葡萄球菌 取相當於1g或1mL供試品的供試液至100mL膽鹽乳糖培養基中，陽性菌對照加入金黃色葡萄球菌10～100CFU，陰性菌對照加入大腸埃希菌 10～100CFU，35～37℃培養18～24小時。按《微生物限度檢查SOP》金黃色葡萄球菌項下規定檢查。
供試品有抑菌作用，放大培養基量，由1：100放大到1：300、1：500或1：1000，由於容器體積限製，一般放大到500mL或1000mL，本法適用於抑菌作用不強的樣品。采(cai)用(yong)薄(bo)膜(mo)過(guo)濾(lv)法(fa)時(shi)，取(qu)規(gui)定(ding)量(liang)供(gong)試(shi)液(ye)，過(guo)濾(lv)，衝(chong)洗(xi)，試(shi)驗(yan)菌(jun)應(ying)加(jia)在(zai)最(zui)後(hou)一(yi)次(ci)衝(chong)洗(xi)液(ye)中(zhong)，過(guo)濾(lv)後(hou)，注(zhu)入(ru)培(pei)養(yang)基(ji)或(huo)取(qu)出(chu)濾(lv)膜(mo)接(jie)入(ru)增(zeng)菌(jun)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)。取規定量供試液，如供試液含許多藥渣，先以500轉/分鍾離心3~5分鍾，取全部上清液，再以3000轉/分離心20分鍾，取下麵1mL液體，並將適量的稀釋劑洗滌管底的洗滌液一並移入同瓶增菌液中，培養，本法適用於中度抑菌作用的樣品。zaigongshipinrongyezhongjiaruxiangyingdezhongheji，yijianchugongshipinzhongyijunchengfendezuoyong，zhonghejiyingduiweishengwuwuduxing，yuyijunchengfenjiehehoudechanwuyingduiweishengwuyiwuduxing，huoyouduxingdanbuyingxiangdaijianjundejianchu。至少應進行3次(ci)獨(du)立(li)平(ping)行(xing)試(shi)驗(yan)。陰(yin)性(xing)菌(jun)對(dui)照(zhao)組(zu)不(bu)得(de)檢(jian)出(chu)陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)菌(jun)。若(ruo)試(shi)驗(yan)組(zu)檢(jian)出(chu)試(shi)驗(yan)菌(jun)，照(zhao)該(gai)供(gong)試(shi)液(ye)製(zhi)備(bei)方(fang)法(fa)和(he)控(kong)製(zhi)菌(jun)檢(jian)查(zha)法(fa)進(jin)行(xing)該(gai)供(gong)試(shi)品(pin)控(kong)製(zhi)菌(jun)的(de)檢(jian)查(zha)；若試驗組未檢出試驗菌，應采用自然沉降法、培養基稀釋法、離心沉澱集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，並重新進行方法驗證。編輯：songjiajie2010
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