2

、染色菌的選擇 

junlingduigelanshiransejieguodeyingxiangshishifendade。womenranseguochengzhongxuanzedejunyinggaishichuyuhuoyueshengchangqi
，zheyangdexijunhuoxingqiang
，shenglitezhengmingxian，suoyiransedejieguozhunquedugao，yibanqingkuangxiabuhuichuxianwucha。peiyangshijianjiaochangdegelanshiyangxingjun，youyuxibaolaohua

，shenzhiyoubufenjunzairansezhiqianjiuyijingsiwanghuozhezixingrongjiele，zaochengxibaobitongtouxingzengjia，jiuhuichengxianchujiayinxing。yijinhuangseputaoqiujunweili，jinpushidianxingdegelanshiyangxingjun
，yourenzengjingtongjiguopeiyangzhibutongshijiandejinpudegelanshiransejieguo，jieguobiaoming
，zaijinpuhuoyueqide22h-26h之間

，染色結果的準確率基本可以達到100%，而超過26h之後
，準確率就開始下降

，培養至36h時，準確率大概會下降30%左右。所以我們在染色時，一定要選擇處於活躍期、活性較強的菌落，在檢測過程中一定要嚴格的在國標要求的時間段內進行染色試驗，不能提前或者延後。

3

、塗菌的狀態

在(zai)染(ran)色(se)最(zui)初(chu)的(de)塗(tu)布(bu)中(zhong)

，在(zai)挑(tiao)取(qu)菌(jun)體(ti)後(hou)應(ying)該(gai)在(zai)無(wu)菌(jun)水(shui)上(shang)塗(tu)成(cheng)薄(bo)薄(bo)的(de)菌(jun)膜(mo)。而(er)在(zai)塗(tu)布(bu)過(guo)程(cheng)中(zhong)，若(ruo)是(shi)菌(jun)體(ti)堆(dui)積(ji)，也(ye)會(hui)極(ji)大(da)影(ying)響(xiang)染(ran)色(se)結(jie)果(guo)的(de)準(zhun)確(que)性(xing)。菌(jun)落(luo)堆(dui)積(ji)過(guo)多(duo)

，往(wang)往(wang)菌(jun)體(ti)之(zhi)間(jian)變(bian)得(de)毫(hao)無(wu)縫(feng)隙(xi)，而(er)其(qi)細(xi)胞(bao)壁(bi)的(de)成(cheng)分(fen)影(ying)響(xiang)造(zao)成(cheng)了(le)脫(tuo)色(se)的(de)情(qing)況(kuang)不(bu)佳(jia)
，容(rong)易(yi)產(chan)生(sheng)假(jia)陽(yang)性(xing)的(de)結(jie)果(guo)。同(tong)時(shi)，在(zai)初(chu)染(ran)
、meiranjifurandeguochengzhong
，yingjiangranyefugaizhenggejunmo，bimianyibufenjunranseerlingyibufenjunmeiyouranse。yincizaitupianguochengyidingyaojiangjunmotudeshaoerjunyun，zheyangcainengdadaozuijiaxiaoguo。

4
、媒染時間

媒(mei)染(ran)時(shi)間(jian)對(dui)革(ge)蘭(lan)氏(shi)陰(yin)性(xing)菌(jun)的(de)染(ran)色(se)結(jie)果(guo)有(you)很(hen)大(da)影(ying)響(xiang)。由(you)於(yu)媒(mei)染(ran)時(shi)間(jian)過(guo)長(chang)，結(jie)晶(jing)紫(zi)在(zai)碘(dian)液(ye)長(chang)時(shi)間(jian)作(zuo)用(yong)下(xia)過(guo)分(fen)牢(lao)固(gu)結(jie)合(he)在(zai)菌(jun)體(ti)細(xi)胞(bao)壁(bi)上(shang)，影(ying)響(xiang)了(le)酒(jiu)精(jing)的(de)脫(tuo)色(se)效(xiao)果(guo)
，從(cong)而(er)會(hui)導(dao)致(zhi)這(zhe)種(zhong)假(jia)陽(yang)性(xing)的(de)效(xiao)果(guo)。以(yi)典(dian)型(xing)的(de)革(ge)蘭(lan)氏(shi)陰(yin)性(xing)菌(jun)大(da)腸(chang)埃(ai)希(xi)氏(shi)菌(jun)為(wei)例(li)
，有(you)人(ren)做(zuo)過(guo)統(tong)計(ji)
，媒(mei)染(ran)時(shi)間(jian)嚴(yan)格(ge)控(kong)製(zhi)在(zai)40s-60s之內，染色結果準確率基本可達到100%，而超過60s準確率會有一定的降低，若媒染超過100s，準確率甚至可降低接近20%左右。因此在媒染過程中一定要注意媒染時間，控製在50-60s為宜。

5、酒精脫色

酒jiu精jing脫tuo色se也ye是shi一yi個ge對dui結jie果guo影ying響xiang較jiao大da的de操cao作zuo過guo程cheng。革ge蘭lan氏shi陰yin性xing菌jun和he革ge蘭lan氏shi陽yang性xing菌jun最zui主zhu要yao的de差cha異yi是shi細xi胞bao壁bi肽tai聚ju糖tang層ceng厚hou度du和he結jie構gou，革ge蘭lan氏shi陰yin性xing菌jun細xi胞bao壁bi肽tai聚ju糖tang層ceng很hen薄bo，脂zhi多duo糖tang含han量liang高gao因yin此ci在zai酒jiu精jing脫tuo色se時shi，細xi菌jun細xi胞bao壁bi的de多duo糖tang成cheng分fen會hui被bei酒jiu精jing溶rong解jie，增zeng大da了le細xi胞bao壁bi的de通tong透tou性xing
，結jie晶jing紫zi及ji碘dian複fu合he物wu就jiu很hen快kuai被bei酒jiu精jing洗xi脫tuo，之zhi後hou就jiu會hui被bei沙sha黃huang複fu染ran呈cheng紅hong色se；而er陽yang性xing菌jun肽tai聚ju糖tang層ceng厚hou
，脂zhi多duo糖tang少shao
，酒jiu精jing隻zhi能neng起qi到dao脫tuo水shui效xiao果guo而er無wu法fa進jin入ru，這zhe樣yang結jie晶jing紫zi和he複fu合he物wu就jiu無wu法fa洗xi脫tuo出chu來lai使shi細xi胞bao呈cheng紫zi色se。因yin此ci，酒jiu精jing脫tuo色se時shi間jian短duan
，脫tuo色se效xiao果guo不bu佳jia，會hui導dao致zhi陰yin性xing菌jun菌jun體ti內nei的de結jie晶jing紫zi和he複fu合he物wu不bu能neng有you效xiao的de全quan部bu洗xi脫tuo出chu來lai，就jiu會hui出chu現xian明ming顯xian的de誤wu差cha
，使shi陰yin性xing菌jun出chu現xian假jia陽yang性xing。而er洗xi脫tuo時shi間jian過guo長chang，也ye會hui導dao致zhi陽yang性xing菌jun的de細xi胞bao壁bi被bei酒jiu精jing破po壞huai
，導dao致zhi細xi胞bao內nei的de紫zi色se被bei洗xi脫tuo，呈cheng現xian假jia陰yin性xing。因yin此ci洗xi脫tuo時shi間jian也ye是shi革ge蘭lan氏shi染ran色se的de關guan鍵jian環huan節jie。洗xi脫tuo時shi間jian應ying當dang嚴yan格ge控kong製zhi在zai20s-30s之間，同時保證洗脫效果。