了解黴菌形態

，掌握微生物載玻片濕室培養方法。

實驗內容

1．根黴假根的觀察。

2．黴菌載玻片濕室培養。

3．曲黴
、青黴、根黴

、毛黴形態觀察。

二、實驗材料和用具

產黃青黴(Penicfillium chrysogenum)

、黑曲黴(Aspergillus niger)
、黑根黴(Rhizopus nigrians)、總狀毛黴(Mucor racemosus)等斜麵菌種。

半固體PDA培養基

、乳酸苯酚固定液、棉藍染色液
、20%甘油;

透明膠帶、剪刀、培養皿、載玻片

、口形玻棒擱架、蓋玻片
、圓形濾紙片
、細口滴管、鑷子、顯微鏡
、接種環。

三、操作步驟

(一)黴菌的載玻片濕室培養

可4人合作
，每人製作一黴菌的載玻片。

1．準備濕室 在培養皿底鋪一張圓形濾紙片，其上放一“冂”形載玻片擱架，在擱梁上放一塊載玻片和兩塊蓋玻片，蓋上皿蓋，外用紙包紮，經12l℃濕熱滅菌30min後，置60℃烘箱中烘幹
，備用。

2．接種 用(yong)接(jie)種(zhong)環(huan)挑(tiao)取(qu)少(shao)量(liang)待(dai)觀(guan)察(cha)的(de)黴(mei)菌(jun)孢(bao)子(zi)至(zhi)濕(shi)室(shi)內(nei)的(de)載(zai)玻(bo)片(pian)上(shang)，每(mei)張(zhang)載(zai)玻(bo)片(pian)可(ke)接(jie)同(tong)一(yi)菌(jun)種(zhong)的(de)孢(bao)子(zi)兩(liang)處(chu)。接(jie)種(zhong)時(shi)隻(zhi)要(yao)將(jiang)帶(dai)菌(jun)的(de)接(jie)種(zhong)環(huan)在(zai)載(zai)玻(bo)片(pian)上(shang)輕(qing)輕(qing)碰(peng)幾(ji)下(xia)即(ji)可(ke)(務必記住接種的位置)。

3．加培養基 用無菌細口滴管吸取少量融化約60℃的培養基，滴加到載玻片的接種處

，培養基應滴得圓而薄，其直徑約為0.5cm(滴加量一般以l/2小滴為宜)。

4．加蓋玻片 在培養基未徹底凝固前．用無菌鑷子將皿內蓋玻片蓋在瓊脂塊薄層上


，用鑷子輕壓，使蓋玻片和載玻片間的距離相當接近，但不能壓扁
，否則不透氣。

5．倒保濕劑 每皿倒大約3mL 20%的無菌甘油，使皿內的濾紙完全潤濕
，以保持皿內濕度，皿蓋上注明菌名、組別和接種日期。此為製成的載玻片濕室，置28℃恒溫培養3～5d。

(二)黑根黴假根的培養

將融化的PDA培養基，冷卻至50℃倒入無菌平皿，其量約為平皿高度的1/2。冷凝後，用接種環沾取根黴孢子，在平板表麵劃線接種。然後將平皿倒置，在皿蓋內放一無菌載玻片
，於28℃培養2～3d後
，可見根黴的氣生菌絲倒掛成胡須狀，有許多菌絲與載玻片接觸，並在載玻片上分化出假根和匍匐菌絲等結構。

(三)鏡檢觀察

1．濕室培養黴菌鏡檢載玻片 從培養16～20h開始，通過連續觀察，可了解孢子的萌發、菌絲體的生長分化和子實體的形成過程。將濕室內的載玻片取出
，直接置於低倍鏡和高倍鏡下觀察曲黴、青黴
、毛黴
、根黴等黴菌的形態，重點觀察菌絲是否分隔，曲黴和青黴的分生孢子形成特點，曲黴的足細胞
，根黴和毛黴的孢子囊和孢囊孢子繪圖。

2．粘片觀察 取一滴棉藍染色液置於載玻片中央，取一段透明膠帶
，打開黴菌平板培養物
，粘取菌體


，粘麵朝下

，放在染液上。鏡檢。

3．假根觀察 jiangpeiyanggenmeijiagendepingmindakai
，quchumingaineidezaibopianbiaoben，zaifuzhejunsitideyimiangaishanggaibopian
，zhixianweijingxiaguancha。zhiyaoyongdibeijingjiunengguanchadaojiagenjiconggenjieshangfenhuachudebaozinanggeng、孢子囊、孢囊孢子和兩個假根間的匍匐菌絲，觀察時注意調節焦距以看清各種構造。

4．製成永久裝片 baguanchadaomeijunxingtaijiaoqingxi，wanzhengdepianzi，zhichengbiaobenzuojiaochangqibaocun。zhibeifangfashi，qingqingjiequgaibopian
，ruguozaibopianshangyouqiongzhi

，zaixitiaoqu
，ranhoudijiashaoliangrusuanbenfengudingye，gaishangqingjiegaibopian
，zaigaibopiansizhoudijiashujiaofenggu。

四
、注意事項

載玻片濕室培養時，蓋玻片不能緊貼載玻片，要彼此有極小縫隙，一是為了通氣；二是使各部分結構平行排列，易於觀察。