微生物的分類有很多,微生物包括細菌、細(xi)胞(bao)以(yi)及(ji)病(bing)毒(du)支(zhi)原(yuan)體(ti)衣(yi)原(yuan)體(ti)螺(luo)旋(xuan)體(ti)等(deng)分(fen)類(lei),在(zai)微(wei)生(sheng)物(wu)學(xue)上(shang),不(bu)同(tong)的(de)微(wei)生(sheng)物(wu)有(you)不(bu)同(tong)的(de)染(ran)色(se)方(fang)法(fa)以(yi)便(bian)於(yu)觀(guan)察(cha),那(na)麼(me)有(you)哪(na)些(xie)基(ji)礎(chu)的(de)染(ran)色(se)呢(ne)?染(ran)色(se)方(fang)法(fa)有(you)很(hen)多(duo)比(bi)如(ru):單染色法、革蘭染色法、抗酸染色法、Fontana鍍銀染色法、蓋梅尼次染色法、乳酸酚棉藍染色法、芽孢染色法、莢膜染色、鞭毛染色法等。
下麵詳細介紹一下革蘭氏染色法、乳酸酚棉藍染色法、芽孢染色法、莢膜染色、法鞭毛染色法
一、革蘭氏染色
1 操作步驟
塗片:將培養的不同菌分別作塗片(注意塗片切不可過於濃厚),幹燥、固定。固定時通過火焰1-2 次即可,不可過熱,以載玻片不燙手為宜。
初染:加結晶紫液蓋滿標本處,染一分鍾後水洗,並將玻片上積水輕輕甩淨。
媒染:加碘液蓋滿標本處,1分鍾後水洗,甩淨玻片上積水。
脫色:加95%酒精蓋滿標本,輕輕搖動玻片,約20秒鍾後水洗、甩幹。
複染:加稀釋石炭酸複紅液或沙黃溶液1-2滴蓋滿標本,染30秒鍾後水洗,待標本自幹或用吸水紙印幹。
觀察:鏡(jing)檢(jian)幹(gan)燥(zao)後(hou)置(zhi)油(you)鏡(jing)觀(guan)察(cha),革(ge)蘭(lan)氏(shi)陰(yin)性(xing)菌(jun)呈(cheng)紅(hong)色(se),革(ge)蘭(lan)氏(shi)陽(yang)性(xing)菌(jun)呈(cheng)紫(zi)色(se)。以(yi)分(fen)散(san)開(kai)的(de)細(xi)菌(jun)的(de)革(ge)蘭(lan)氏(shi)染(ran)色(se)反(fan)應(ying)為(wei)準(zhun),過(guo)於(yu)密(mi)集(ji)的(de)細(xi)菌(jun),常(chang)常(chang)呈(cheng)假(jia)陽(yang)性(xing)。
二、乳酸酚棉藍染色法
1 操作步驟
染色:於潔淨載玻片上,滴1-2滴乳酸酚棉藍染色液,用解剖針從黴菌菌落的邊緣外取少量帶有 孢bao子zi的de菌jun絲si置zhi於yu染ran色se液ye中zhong,再zai細xi心xin地di將jiang菌jun絲si挑tiao散san開kai,然ran後hou小xiao心xin地di蓋gai上shang蓋gai玻bo片pian,注zhu意yi不bu要yao產chan生sheng氣qi泡pao。置zhi顯xian微wei鏡jing下xia先xian用yong低di倍bei鏡jing觀guan察cha,必bi要yao時shi再zai換huan高gao倍bei鏡jing。
觀察:染好後的標本片用顯微鏡觀察結果,酵母菌細胞、菌絲體和產孢結構等皆可被染成亮藍色;背景為暗淡的藍色。
三芽孢染色法
1 操作步驟
一yi般ban革ge蘭lan氏shi染ran色se隻zhi能neng把ba芽ya孢bao周zhou圍wei的de細xi胞bao質zhi染ran色se,不bu能neng直zhi接jie把ba芽ya孢bao染ran上shang,故gu芽ya孢bao會hui透tou亮liang,能neng夠gou觀guan察cha到dao芽ya孢bao。若ruo不bu清qing晰xi可ke進jin一yi步bu采cai用yong芽ya孢bao染ran色se法fa。
染色:用接種環取菌樣塗布於玻片上,待自然幹燥。而後通過火焰加熱將菌固定於玻片上。將塗片放入平皿內,片上放兩層濾紙,滴加足量的5.0%孔雀綠水溶液。將平皿蓋好,54℃-56℃水浴加熱30min。取出,去濾紙,用純化水衝洗殘留孔雀綠溶液。加0.5% 沙黃水溶液,染1min。水洗,待幹後油鏡觀察。
觀察:染好後的標本片用顯微鏡觀察結果,芽孢呈綠色,菌體呈紅色。
三、莢膜染色法
莢膜(capsule)是shi某mou些xie細xi菌jun表biao麵mian的de特te殊shu結jie構gou,是shi位wei於yu細xi胞bao壁bi表biao麵mian的de一yi層ceng鬆song散san的de粘zhan液ye物wu質zhi,莢jia膜mo的de成cheng分fen因yin不bu同tong菌jun種zhong而er異yi,主zhu要yao是shi由you葡pu萄tao糖tang與yu葡pu萄tao糖tang醛quan酸suan組zu成cheng的de聚ju合he物wu。
1 操作步驟
塗片:按常規法塗片,可多挑些菌體與水充分混合,並將粘稠菌液盡量塗開,塗布麵積不宜過大。
幹燥:在空氣中自然幹燥。
染色:用溶液A染5-7分鍾。
脫色:用溶液B洗去結晶紫,脫色要適度(衝洗2遍)。用吸水紙吸幹,並立即加1-2滴香柏油於塗片處,以防止CuSO4結晶的形成。鏡檢。
觀察:背景藍紫色,菌體紫色,莢膜無色或淺紫色。
五、鞭毛染色法
changzaimouxiexijunjuntishangxichangerwanqudejuyouyundonggongnengdedanbaizhifushusizhuangwu,chengweibianmao。xuduoxijundoushiyundongde,tongchangshiyongbianmaoyixiangyingyangwuzhi。bianmaohenbo,buyiranseheguancha。
1 操作步驟
塗片:取幼齡細菌培養物製成塗片。
幹燥:火焰幹燥及固定。
染色:鞭毛染色液2-3滴,在室溫中染色2-3分鍾。
脫色:水洗,幹燥後鏡檢(油鏡)。
觀察:菌體和鞭毛呈紫色。