2、染色菌的選擇 

菌(jun)齡(ling)對(dui)革(ge)蘭(lan)氏(shi)染(ran)色(se)結(jie)果(guo)的(de)影(ying)響(xiang)是(shi)十(shi)分(fen)大(da)的(de)。我(wo)們(men)染(ran)色(se)過(guo)程(cheng)中(zhong)選(xuan)擇(ze)的(de)菌(jun)應(ying)該(gai)是(shi)處(chu)於(yu)活(huo)躍(yue)生(sheng)長(chang)期(qi)，這(zhe)樣(yang)的(de)細(xi)菌(jun)活(huo)性(xing)強(qiang)，生(sheng)理(li)特(te)征(zheng)明(ming)顯(xian)，所(suo)以(yi)染(ran)色(se)的(de)結(jie)果(guo)準(zhun)確(que)度(du)高(gao)，一(yi)般(ban)情(qing)況(kuang)下(xia)不(bu)會(hui)出(chu)現(xian)誤(wu)差(cha)。培(pei)養(yang)時(shi)間(jian)較(jiao)長(chang)的(de)革(ge)蘭(lan)氏(shi)陽(yang)性(xing)菌(jun)
，由(you)於(yu)細(xi)胞(bao)老(lao)化(hua)，甚(shen)至(zhi)有(you)部(bu)分(fen)菌(jun)在(zai)染(ran)色(se)之(zhi)前(qian)就(jiu)已(yi)經(jing)死(si)亡(wang)或(huo)者(zhe)自(zi)行(xing)溶(rong)解(jie)了(le)，造(zao)成(cheng)細(xi)胞(bao)壁(bi)通(tong)透(tou)性(xing)增(zeng)加(jia)，就(jiu)會(hui)呈(cheng)現(xian)出(chu)假(jia)陰(yin)性(xing)。以(yi)金(jin)黃(huang)色(se)葡(pu)萄(tao)球(qiu)菌(jun)為(wei)例(li)
，金(jin)葡(pu)是(shi)典(dian)型(xing)的(de)革(ge)蘭(lan)氏(shi)陽(yang)性(xing)菌(jun)，有(you)人(ren)曾(zeng)經(jing)統(tong)計(ji)過(guo)培(pei)養(yang)至(zhi)不(bu)同(tong)時(shi)間(jian)的(de)金(jin)葡(pu)的(de)革(ge)蘭(lan)氏(shi)染(ran)色(se)結(jie)果(guo)，結(jie)果(guo)表(biao)明(ming)
，在(zai)金(jin)葡(pu)活(huo)躍(yue)期(qi)的(de)22h-26h之間，染色結果的準確率基本可以達到100%，而超過26h之後
，準確率就開始下降
，培養至36h時
，準確率大概會下降30%左右。所以我們在染色時，一定要選擇處於活躍期、活性較強的菌落，在檢測過程中一定要嚴格的在國標要求的時間段內進行染色試驗
，不能提前或者延後。

3、塗菌的狀態

zairansezuichudetubuzhong
，zaitiaoqujuntihouyinggaizaiwujunshuishangtuchengbobodejunmo。erzaitubuguochengzhong
，ruoshijuntiduiji，yehuijidayingxiangransejieguodezhunquexing。junluoduijiguoduo，wangwangjuntizhijianbiandehaowufengxi

，erqixibaobidechengfenyingxiangzaochengletuosedeqingkuangbujia，rongyichanshengjiayangxingdejieguo。tongshi，zaichuran、媒(mei)染(ran)及(ji)複(fu)染(ran)的(de)過(guo)程(cheng)中(zhong)，應(ying)將(jiang)染(ran)液(ye)覆(fu)蓋(gai)整(zheng)個(ge)菌(jun)膜(mo)，避(bi)免(mian)一(yi)部(bu)分(fen)菌(jun)染(ran)色(se)而(er)另(ling)一(yi)部(bu)分(fen)菌(jun)沒(mei)有(you)染(ran)色(se)。因(yin)此(ci)在(zai)塗(tu)片(pian)過(guo)程(cheng)一(yi)定(ding)要(yao)將(jiang)菌(jun)膜(mo)塗(tu)得(de)少(shao)而(er)均(jun)勻(yun)
，這(zhe)樣(yang)才(cai)能(neng)達(da)到(dao)最(zui)佳(jia)效(xiao)果(guo)。

4、媒染時間

媒(mei)染(ran)時(shi)間(jian)對(dui)革(ge)蘭(lan)氏(shi)陰(yin)性(xing)菌(jun)的(de)染(ran)色(se)結(jie)果(guo)有(you)很(hen)大(da)影(ying)響(xiang)。由(you)於(yu)媒(mei)染(ran)時(shi)間(jian)過(guo)長(chang)，結(jie)晶(jing)紫(zi)在(zai)碘(dian)液(ye)長(chang)時(shi)間(jian)作(zuo)用(yong)下(xia)過(guo)分(fen)牢(lao)固(gu)結(jie)合(he)在(zai)菌(jun)體(ti)細(xi)胞(bao)壁(bi)上(shang)，影(ying)響(xiang)了(le)酒(jiu)精(jing)的(de)脫(tuo)色(se)效(xiao)果(guo)
，從(cong)而(er)會(hui)導(dao)致(zhi)這(zhe)種(zhong)假(jia)陽(yang)性(xing)的(de)效(xiao)果(guo)。以(yi)典(dian)型(xing)的(de)革(ge)蘭(lan)氏(shi)陰(yin)性(xing)菌(jun)大(da)腸(chang)埃(ai)希(xi)氏(shi)菌(jun)為(wei)例(li)
，有(you)人(ren)做(zuo)過(guo)統(tong)計(ji)
，媒(mei)染(ran)時(shi)間(jian)嚴(yan)格(ge)控(kong)製(zhi)在(zai)40s-60s之內，染色結果準確率基本可達到100%
，而超過60s準確率會有一定的降低
，若媒染超過100s，準確率甚至可降低接近20%左右。因此在媒染過程中一定要注意媒染時間
，控製在50-60s為宜。

5、酒精脫色

酒(jiu)精(jing)脫(tuo)色(se)也(ye)是(shi)一(yi)個(ge)對(dui)結(jie)果(guo)影(ying)響(xiang)較(jiao)大(da)的(de)操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)。革(ge)蘭(lan)氏(shi)陰(yin)性(xing)菌(jun)和(he)革(ge)蘭(lan)氏(shi)陽(yang)性(xing)菌(jun)最(zui)主(zhu)要(yao)的(de)差(cha)異(yi)是(shi)細(xi)胞(bao)壁(bi)肽(tai)聚(ju)糖(tang)層(ceng)厚(hou)度(du)和(he)結(jie)構(gou)
，革(ge)蘭(lan)氏(shi)陰(yin)性(xing)菌(jun)細(xi)胞(bao)壁(bi)肽(tai)聚(ju)糖(tang)層(ceng)很(hen)薄(bo)
，脂(zhi)多(duo)糖(tang)含(han)量(liang)高(gao)因(yin)此(ci)在(zai)酒(jiu)精(jing)脫(tuo)色(se)時(shi)，細(xi)菌(jun)細(xi)胞(bao)壁(bi)的(de)多(duo)糖(tang)成(cheng)分(fen)會(hui)被(bei)酒(jiu)精(jing)溶(rong)解(jie)，增(zeng)大(da)了(le)細(xi)胞(bao)壁(bi)的(de)通(tong)透(tou)性(xing)，結(jie)晶(jing)紫(zi)及(ji)碘(dian)複(fu)合(he)物(wu)就(jiu)很(hen)快(kuai)被(bei)酒(jiu)精(jing)洗(xi)脫(tuo)，之(zhi)後(hou)就(jiu)會(hui)被(bei)沙(sha)黃(huang)複(fu)染(ran)呈(cheng)紅(hong)色(se)；eryangxingjuntaijutangcenghou，zhiduotangshao，jiujingzhinengqidaotuoshuixiaoguoerwufajinru，zheyangjiejingzihefuhewujiuwufaxituochulaishixibaochengzise。yinci，jiujingtuoseshijianduan，tuosexiaoguobujia，huidaozhiyinxingjunjuntineidejiejingzihefuhewubunengyouxiaodequanbuxituochulai，jiuhuichuxianmingxiandewucha，shiyinxingjunchuxianjiayangxing。erxituoshijianguochang，yehuidaozhiyangxingjundexibaobibeijiujingpohuai
，daozhixibaoneidezisebeixituo，chengxianjiayinxing。yincixituoshijianyeshigelanshiransedeguanjianhuanjie。xituoshijianyingdangyangekongzhizai20s-30s之間
，同時保證洗脫效果。