本文將從PCR實驗室布局、工作區域的主要功能和設備配置、實驗室的通風係統及壓力控製、裝飾裝修材料要求及其他注意事項來解說。
一
PCR實驗室布局
原則上分為四個區域:試劑準備區、樣品製備區、擴增區和擴增產物分析區。
PCR實驗室原則上為試劑準備區、樣品製備區、kuozengquhekuozengchanwufenxiqusigedandudegongzuoquyubingsheyouzhuanyongzoulang,gegongzuoquyuyingshehuanchongjian,gongzuoquyuhuanchongjianyianzhuangliansuozhuangzhi。butonggongnengdegongzuoquyingshifengedulide,gegongzuoquyoumingxiandebiaozhi,bunengzhitong,ruguojinmixianglian,xuanzhuangwupinchuandichuang。
PCR實驗室區域的設置並不是一成不變的,以下幾種情況需要說明:
1.如果樣本在擴增之前需要粉碎處理,則需要增加一個區域用於樣品的粉碎。
2.如果采用實時熒光PCR法,則擴增區和分析區可以合並為一個區。
3.如果采用全自動化PCR分析儀,則標本製備區、擴增區和分析區可以合並為一個區。
前兩區為擴增前區,後兩區為擴增後區,擴增前區與擴增後區應嚴格分開。實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,隻能從擴增前區流向擴增後區,即從試劑準備區、yangpinzhibeiqudaokuozengquhekuozengchanwufenxiqu,budenixiangliudong。shiyanshideqiliuyeyingcongkuozengqianquliuxiangkuozenghouqu,budenixiangliudong。gegongzuoqudingbuyinganzhuangziwaideng,ziwaidengdebochangwei254nm,每20㎡一支40W的紫外燈。
二
實驗室各區功能及主要設備
原則上的四大區域注意正壓負壓的控製。
1.試劑準備區:
主要進行試劑的製備、分fen裝zhuang和he主zhu反fan應ying混hun合he液ye的de製zhi備bei。試shi劑ji和he用yong於yu樣yang品pin製zhi作zuo的de材cai料liao應ying直zhi接jie運yun送song至zhi該gai區qu,不bu得de經jing過guo其qi它ta區qu域yu。試shi劑ji原yuan材cai料liao必bi須xu貯zhu存cun在zai本ben區qu內nei,並bing在zai本ben區qu內nei製zhi備bei成cheng所suo需xu的de試shi劑ji。本ben區qu主zhu要yao設she備bei有you天tian平ping、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器等。
對於氣流壓力的控製,本區並沒有嚴格的要求。
2.樣品製備區:
主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區主要設備有冰箱、生物安全櫃、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。
本區的壓力梯度要求為:相對於鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠汙染。
3.擴增區:
該區域的功能是DNA擴增和擴增片段的測定。此外,反應混合液(來自試劑貯存和製備區)製備成反應混合液和已製備的DNA模板(來自標本製備區)dejiarudengyekezaibenquneijinxing。duiyuqiliuyalidekongzhi,xiangduiyulinjinquyuweifuya,yibimianqirongjiaocongbenqulouchu。weibimianqirongjiaosuozhidewuran,yingjinliangjianshaozaibenquneibubiyaodezoudong。gebiecaozuorujiayangdengyingzaichaojingtaineijinxing。
該區域的設備主要是核酸擴增熱循環儀、加樣器、超淨台等。其中熱循環儀的電源應專用,並配備一個穩壓電源或UPS,以防止由於電壓的波動對擴增測定的影響主要進行DNA擴增。
本區的壓力梯度要求為:相對於鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。
4.擴增產物分析區:
擴增產物的測定。本區主要設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。
本區的壓力梯度的要求為:相對於鄰近區域為負壓,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。
三
PCR實驗室通風係統及壓力控製
四大區域應形成單向流線、宜采用全送全排。
各區域之間應具備單向的實驗工藝流、物流、人流與氣流,形成單向流程的保護屏障,避免實驗之間的相互幹擾,防止氣溶膠擴散對實驗過程造成汙染。
PCR實驗室並沒有嚴格的淨化要求,但是為避免各個實驗區域交叉汙染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式,嚴格控製送、排風的比例以保證各實驗區壓力要求。
另外,PCR實驗室內通常有生物安全櫃、通(tong)風(feng)櫃(gui)等(deng)生(sheng)產(chan)設(she)備(bei),這(zhe)類(lei)設(she)備(bei)排(pai)風(feng)量(liang)大(da)且(qie)使(shi)用(yong)時(shi)間(jian)有(you)間(jian)隔(ge)性(xing),並(bing)不(bu)與(yu)空(kong)調(tiao)係(xi)統(tong)運(yun)行(xing)時(shi)間(jian)一(yi)致(zhi),這(zhe)就(jiu)導(dao)致(zhi)有(you)這(zhe)些(xie)設(she)備(bei)的(de)房(fang)間(jian)在(zai)設(she)備(bei)啟(qi)停(ting)的(de)時(shi)候(hou)很(hen)容(rong)易(yi)失(shi)壓(ya),原(yuan)本(ben)正(zheng)常(chang)的(de)壓(ya)力(li)梯(ti)度(du)瞬(shun)間(jian)就(jiu)破(po)壞(huai)了(le)。這(zhe)正(zheng)是(shi)PCR實驗室空調係統設計的難點所在。
四
PCR實驗室裝飾
材料要求:
實驗室圍護結構應牢固、氣密性好。所有陰陽角宜采用圓弧過渡,牆體內壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒。地麵使用PVC卷材或環氧樹脂自流坪,材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。
五
PCR實驗室注意事項
樣品製備區空間要大些。
1.幾個區域的大小設置情況,試劑準備區、擴增區、擴增產物分析區,空間可以相對小一些,樣品製備區要放置生物安全櫃和低溫冰箱,空間應大一些。
2.試劑準備區、樣品製備區設緊急洗眼器,以保證操作人員的安全。
3.PCR實驗室沒有嚴格的淨化要求,可以根據使用情況和資金的投入選擇。
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