答：化學法是每次都要做的，生物法可以定期做，根據滅菌鍋的使用頻率，每周
、每半月或每月做一次即可。

 答：SDA不是選擇性培養基，而是一種廣譜的增菌培養基，pH範圍5.4-5.8，某些細菌是可以在SDA上生長的
，黴菌和酵母菌總數計數時SDA上生長的菌均應計入黴菌和酵母菌總數；或者可以經過評估選擇含有抗生素（如氯黴素）的SDA或者玫瑰紅鈉瓊脂培養基進行黴菌和酵母菌總數計數。

 答：在進行微生物培養時，若正置培養
，瓊脂培養基中的水分易蒸發使平板幹裂
，不利於微生物的生長
；同(tong)時(shi)水(shui)蒸(zheng)汽(qi)會(hui)在(zai)平(ping)皿(min)蓋(gai)上(shang)形(xing)成(cheng)冷(leng)凝(ning)水(shui)，若(ruo)回(hui)落(luo)在(zai)培(pei)養(yang)基(ji)表(biao)麵(mian)
，會(hui)使(shi)菌(jun)落(luo)蔓(man)延(yan)生(sheng)長(chang)，無(wu)法(fa)計(ji)數(shu)
，若(ruo)冷(leng)凝(ning)水(shui)太(tai)多(duo)會(hui)使(shi)培(pei)養(yang)基(ji)與(yu)平(ping)皿(min)分(fen)離(li)，容(rong)易(yi)滑(hua)動(dong)倒(dao)置(zhi)培(pei)養(yang)可(ke)減(jian)少(shao)培(pei)養(yang)基(ji)表(biao)麵(mian)的(de)空(kong)氣(qi)流(liu)動(dong)，減(jian)慢(man)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)水(shui)分(fen)蒸(zheng)發(fa)的(de)速(su)度(du)，充(chong)分(fen)維(wei)持(chi)彈(dan)性(xing)
，有(you)利(li)於(yu)菌(jun)株(zhu)的(de)生(sheng)長(chang)和(he)繁(fan)殖(zhi)
，防(fang)止(zhi)空(kong)氣(qi)中(zhong)雜(za)菌(jun)對(dui)培(pei)養(yang)基(ji)及(ji)培(pei)養(yang)物(wu)造(zao)成(cheng)汙(wu)染(ran)；也會由於重力作用在一定程度上使營養物質沉積到培養基表麵，有利於微生物利用營養物質；倒置的平板方便拿取
，避免環境中雜菌的汙染。

需要注意的是
，《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗黴菌和酵母計數》（GB4789.15-2016）是要求正置培養
，而非倒置，以防黴菌孢子形成次生菌落
，影響計數結果。

問：食品企業的環境檢測應該依據那個標準？

答：GB/T16294-2010《醫藥工業潔淨室(區)懸浮粒子、浮遊菌和沉降菌的測試方法》都有規定，可以做為參考。

問：請問高壓滅菌鍋需要操作人員有壓力容器操作證嗎?有些人說屬於《特種設備安全監察條例》需要操作證

？

答：CNAS-CL 01-A001: 2018的 6.2.2.2條款裏有說講到
，如實驗室使用的高壓蒸汽滅菌器不屬於簡單壓力容器(定義參見TSG R0003 -2007《簡單壓力容器安全技術監察規程》)時
，操作人員需持有特種作業人員證。

問：

答：開瓶後的培養基，如果長時間不使用，還在效期內
，建議開瓶後間隔1年進行複驗。如果出現結塊，則不能使用。同理，如果同一批次一次購買量較多，一年內未使用完
，也建議進行複檢。

問：什麼是不可接受微生物
？

答：不bu可ke接jie受shou微wei生sheng物wu通tong常chang是shi指zhi那na些xie已yi知zhi有you明ming顯xian致zhi病bing性xing的de，存cun在zai足zu夠gou的de數shu量liang，通tong過guo產chan品pin的de給gei藥yao途tu徑jing可ke能neng導dao致zhi患huan者zhe不bu可ke接jie受shou風feng險xian的de微wei生sheng物wu。如ru何he確que定ding一yi種zhong微wei生sheng物wu是shi不bu可ke接jie受shou的de，需xu要yao進jin行xing風feng險xian分fen析xi
，包bao括kuo微wei生sheng物wu負fu載zai量liang、微生物特性
、產品特性

、給藥途徑
、對患者潛在影響等。

問： 培養基滅菌沒有按照廠家提供的滅菌參數進行，是否可行
？

答：可(ke)以(yi)。廠(chang)家(jia)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)提(ti)供(gong)的(de)滅(mie)菌(jun)參(can)數(shu)可(ke)作(zuo)為(wei)參(can)考(kao)使(shi)用(yong)
，使(shi)用(yong)單(dan)位(wei)也(ye)可(ke)以(yi)根(gen)據(ju)自(zi)己(ji)實(shi)驗(yan)室(shi)的(de)實(shi)際(ji)情(qing)況(kuang)，在(zai)相(xiang)關(guan)法(fa)規(gui)要(yao)求(qiu)內(nei)，使(shi)用(yong)自(zi)己(ji)驗(yan)證(zheng)過(guo)的(de)滅(mie)菌(jun)參(can)數(shu)來(lai)執(zhi)行(xing)。

【法規來源：中國藥典2020版9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則   ……培養基滅菌應按照生產商提供或使用者驗證的參數進行……】

問：革蘭氏染色有哪些注意事項？

答：（1）最好挑選18-24h的菌落進行革蘭氏染色,培養時間過久的的革蘭氏陽性細菌可能會被染成紅色而造成假陰性。

（2）挑取適量的菌

，不宜過多,均勻塗開。

（3乙醇脫色是革蘭氏染色是否成功的關鍵,15-30s為宜，脫色不夠可能會造成假陽性,脫色過度可能會造成假陰性。

問：如何根據實驗需要製備斜麵？

答：根據實驗需求

，擺放斜麵一般有三種形式：

（1）長斜麵：斜麵底部剛覆蓋試管底部
，上部距管口2.5-3cm左右；例如TSA傳代斜麵。

（2）高層斜麵：斜麵與底層高度約為2:3

，即底部高約3cm
，斜麵長度約2cm；如三糖鐵高層斜麵。

（3）普通斜麵：斜麵底部距試管底部約1cm
，上部距管口約2.5-3cm。

問：三糖鐵培養基顏色變化原理是什麼
？ 

答：該培養基含有乳糖
、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1，隻(zhi)能(neng)利(li)用(yong)葡(pu)萄(tao)糖(tang)的(de)細(xi)菌(jun)，分(fen)解(jie)葡(pu)萄(tao)糖(tang)產(chan)酸(suan)可(ke)使(shi)斜(xie)麵(mian)先(xian)變(bian)黃(huang)
，但(dan)因(yin)量(liang)少(shao)
，生(sheng)成(cheng)的(de)少(shao)量(liang)酸(suan)接(jie)觸(chu)空(kong)氣(qi)而(er)氧(yang)化(hua)
，加(jia)之(zhi)細(xi)菌(jun)利(li)用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)含(han)氮(dan)物(wu)質(zhi)
，生(sheng)成(cheng)堿(jian)性(xing)產(chan)物(wu)，故(gu)使(shi)斜(xie)麵(mian)後(hou)來(lai)又(you)變(bian)紅(hong)
，底(di)部(bu)由(you)於(yu)是(shi)在(zai)厭(yan)氧(yang)狀(zhuang)態(tai)下(xia)，酸(suan)類(lei)不(bu)被(bei)氧(yang)化(hua)，所(suo)以(yi)仍(reng)保(bao)持(chi)黃(huang)色(se)。而(er)發(fa)酵(jiao)乳(ru)糖(tang)的(de)細(xi)菌(jun)則(ze)產(chan)生(sheng)大(da)量(liang)的(de)酸(suan)，使(shi)整(zheng)個(ge)培(pei)養(yang)基(ji)呈(cheng)現(xian)黃(huang)色(se)。如(ru)菌(jun)種(zhong)接(jie)至(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)培(pei)養(yang)後(hou)產(chan)生(sheng)黑(hei)色(se)沉(chen)澱(dian)，是(shi)因(yin)為(wei)某(mou)些(xie)細(xi)菌(jun)能(neng)分(fen)解(jie)含(han)硫(liu)氨(an)基(ji)酸(suan)
，生(sheng)成(cheng)硫(liu)化(hua)氫(qing)，硫(liu)化(hua)氫(qing)和(he)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)的(de)鐵(tie)鹽(yan)反(fan)應(ying)，生(sheng)成(cheng)黑(hei)色(se)的(de)硫(liu)化(hua)亞(ya)鐵(tie)沉(chen)澱(dian)。