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嚴格的消毒滅菌工作極為重要，因為這是直接影響著整個實驗能否順利進行。
那麼今天小編就跟大家盤點一下，實驗室不同種類物品及培養物的消毒滅菌方法。
主要用於培養液，是培養過程中預防微生物汙染的重要手段以及作為微生物汙染不嚴重時的“急救”措施。常用的抗生素有青黴素、鏈黴素和新黴素等。
不同種類物品及培養物
消毒滅菌方法
常用消毒劑有過氧化氫(10~12%，浸泡5~15 min)、過氧乙酸(0.05%，浸泡30 s~1 min)、酒精(70~75%，浸泡2 min)。
實驗室常用的器材一般包括玻璃器材、金屬器械、橡膠製品及塑料製品等，每類器材的處理及消毒措施都有不同。
消毒滅菌方法
目前我們常用的消毒滅菌方法多采用物理方法(如幹熱滅菌法、濕熱滅菌法、過濾除菌法、射線殺菌法等)和化學方法(消毒劑、抗生素)兩大類。
幹熱滅菌法
是利用恒溫幹燥箱內120 ºC～150 ºC的高熱，並保持90～120分鍾，殺死細菌和芽孢，達到滅菌目的的一種方法。
主要適用於不便在壓力蒸汽滅菌器中進行滅菌，且不易被高溫損壞的玻璃器皿、金屬器械以及不能和蒸汽接觸的物品的滅菌。用此方法滅菌的物品幹燥，易於貯存。
jiujingdenghuoyanshaozhuomiejunfayeshishuyuganremiejundefangfazhiyi，zaijinxingdongwuxibaotiwaipeiyanggongzuoshi，changxuliyonggongzuotaimianshangdejiujingdenghuoyanduijinshuqijujiboliqiminkouyuanjinxingbuchongmiejun。
濕熱滅菌法
壓ya力li蒸zheng汽qi濕shi熱re滅mie菌jun法fa是shi目mu前qian最zui常chang用yong的de一yi種zhong滅mie菌jun方fang法fa。它ta利li用yong高gao壓ya蒸zheng汽qi以yi及ji在zai蒸zheng汽qi環huan境jing中zhong存cun在zai的de潛qian熱re作zuo用yong和he良liang好hao的de穿chuan透tou力li，使shi菌jun體ti蛋dan白bai質zhi凝ning固gu變bian性xing而er使shi微wei生sheng物wu死si亡wang。
適合於布類工作衣、各種器皿、金屬器械、膠塞、蒸餾水、棉塞、紙和某些培養液的滅菌。高壓蒸汽滅菌器的蒸汽壓力一般調整為1.0～1.1 kg/cm2，維持20～30 min即可達到滅菌效果。
射線滅菌法
利li用yong紫zi外wai線xian燈deng進jin行xing照zhao射she滅mie菌jun的de方fang法fa。紫zi外wai線xian是shi一yi種zhong低di能neng量liang的de電dian磁ci輻fu射she，可ke以yi殺sha滅mie多duo種zhong微wei生sheng物wu。紫zi外wai線xian的de作zuo用yong機ji製zhi是shi通tong過guo對dui微wei生sheng物wu的de核he酸suan及ji蛋dan白bai質zhi等deng的de破po壞huai作zuo用yong而er使shi其qi滅mie活huo。
適合於實驗室空氣、地麵、操作台麵滅菌。滅菌時間為30min。用(yong)紫(zi)外(wai)線(xian)殺(sha)菌(jun)時(shi)應(ying)注(zhu)意(yi)，不(bu)能(neng)邊(bian)照(zhao)射(she)邊(bian)進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)操(cao)作(zuo)，因(yin)為(wei)紫(zi)外(wai)線(xian)不(bu)僅(jin)對(dui)人(ren)體(ti)皮(pi)膚(fu)有(you)傷(shang)害(hai)，而(er)且(qie)對(dui)培(pei)養(yang)物(wu)及(ji)一(yi)些(xie)試(shi)劑(ji)等(deng)也(ye)會(hui)產(chan)生(sheng)不(bu)良(liang)影(ying)響(xiang)。
過濾除菌法
shijiangyetihuoqititongguoyouweikongdelvmoguolv，shidayulvmokongjingdexijundengweishengwukelizuliu，congerdadaochujundefangfa。guolvchujunfadaduoyongyuyureyifashengfenjie、變性而失效的試劑、酶液、血清、培養液等。
目前，常用微孔濾膜金屬濾器或塑料濾器正壓過濾除菌，或用玻璃細菌濾器、濾球負壓過濾除菌。
濾膜孔徑應在0.22～0.45μm範fan圍wei內nei或huo用yong更geng小xiao的de細xi菌jun濾lv膜mo，溶rong液ye通tong過guo濾lv膜mo後hou，細xi菌jun和he孢bao子zi等deng因yin大da於yu濾lv膜mo孔kong徑jing而er被bei阻zu，並bing利li用yong濾lv膜mo的de吸xi附fu作zuo用yong，阻zu製zhi小xiao於yu濾lv膜mo孔kong徑jing的de細xi菌jun透tou過guo。
化學消毒劑消毒法
用於那些不能利用物理方法進行滅菌的物品、空氣、工作麵、操作者皮膚、某些實驗器皿等。常用的化學消毒劑包括甲醛、高錳酸鉀、70%～75%乙醇、過氧乙酸、來蘇爾水、0.1%新潔爾滅、環氧乙烷、碘伏或碘酊等。
其中利用70%～75%乙醇、0.1%～0.2%氯化汞、10%次氯酸鈉、飽和漂白粉等進行實驗材料的滅菌；利用甲醛加高錳酸鉀[(2 mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]或乙二醇(6mL/m3)等加熱熏蒸法進行無菌室和培養室的消毒。
在使用時應注意安全，特別是用在皮膚或實驗材料上的消毒劑，須選用合適的藥劑種類、濃度和處理時間，才能達到安全和滅菌的目的。
抗生素抑菌法
無菌操作室滅菌 培養材料進行培養、觀察或更換培養液時，必須從各方麵防止任何汙染物進入培養液或容器，所以無菌操作室的滅菌是至關重要的。
由於無菌操作室的汙染來源主要是空氣中的細菌和真菌孢子，因此長期停用後的無菌操作室應進行熏蒸滅菌，熏蒸是用高錳酸鉀+甲醛[(2ml甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]進行無菌室的滅菌。經常使用的無菌操作室，在每次使用前都應進行地麵衛生清潔，並用紫外線燈照射30min，進行空氣滅菌。
對超淨工作台，每次操作前用紫外燈照射30 min，然後用70%～75%酒精擦拭。
培養液滅菌
培養液在製備過程中帶有各種雜菌，分裝後應立即滅菌，或在24小時內完成滅菌工序。
muqianchangyongguolvchujunfachuqupeiyangwucaozuoyehepeiyangyezhongdexijun。huoduipeiyangyezhongnairezufenxianjinxinggaoyazhengqimiejun，ranhouzaiwujunshijiarujingguoguolvchujundebunairerongye，hunyunhoufenzhuangbeiyong。
使用高壓蒸汽滅菌器滅菌時，將分裝好的培養液放入底部有一定量(淹沒加熱管)涼水的高壓蒸汽滅菌器內，增壓至0.35~0.4 kg/cm2時排淨滅菌器內冷空氣，以便使蒸汽能到達各個消毒部位，保證消毒滅菌徹底。
然後繼續加壓加熱，當壓力表讀數達到1.0~1.1 kg/cm2為121 ºC，保持15~20 min即可。由於消毒滅菌效果取決於溫度而不是壓力，所以在一定壓力下保持較長的消毒滅菌時間是必須的。
在121 ºC的蒸汽溫度下可以很快殺死各種細菌及高度耐熱的芽孢杆菌，因此許多培養液的消毒滅菌壓力、溫度一般保持在1.0~1.1 kg/cm2、121ºC。
消毒滅菌時間與需要消毒滅菌的培養液量密切相關(表2-3)，時間不足達不到滅菌效果，時間過長培養液內的一些化學物質遭到破壞，影響培養液成分。
消(xiao)毒(du)滅(mie)菌(jun)結(jie)束(shu)後(hou)，關(guan)閉(bi)熱(re)源(yuan)，隻(zhi)有(you)當(dang)滅(mie)菌(jun)器(qi)內(nei)壓(ya)力(li)降(jiang)為(wei)零(ling)時(shi)才(cai)能(neng)打(da)開(kai)放(fang)氣(qi)閥(fa)，排(pai)除(chu)剩(sheng)餘(yu)蒸(zheng)汽(qi)，取(qu)出(chu)培(pei)養(yang)液(ye)。不(bu)可(ke)在(zai)壓(ya)力(li)較(jiao)高(gao)時(shi)打(da)開(kai)放(fang)氣(qi)閥(fa)，引(yin)起(qi)減(jian)壓(ya)沸(fei)騰(teng)，使(shi)容(rong)器(qi)中(zhong)液(ye)體(ti)溢(yi)出(chu)。
peiyangyezuchengzhongruhanyouyureyifenjiedewuzhi，zexuyongguolvfangfaxiaodumiejun。shouxianduipeiyangyezhongnairezufenjinxinggaoyazhengqimiejunhoufangzhizaiwujunchangsuo，gutipeiyangyezai40ºC左右瓊脂即將凝結前，加入經過過濾除菌的不耐熱溶液，混勻後冷卻備用。液體培養液在冷卻到室溫後再加入過濾除菌溶液。
過濾除菌時，使用孔徑為0.22～0.45μm或更小的細菌濾膜。
過濾除菌可利用抽濾裝置或注射過濾器進行，所用器皿均應進行高壓消毒滅菌，溫度不應超過121 ºC。
玻璃器皿、塑料器皿和器械滅菌
玻璃器皿可進行幹熱滅菌或高壓蒸汽滅菌，但在蒸汽滅菌後最好及時烘幹水分。對不能進行高壓蒸汽滅菌的塑料器皿可用75%酒精浸泡，使用前在無菌操作台麵上晾幹的同時，用紫外線重複殺菌。
實驗室還可以用環氧乙烷滅菌袋對塑料器皿進行消毒，消毒後的器皿要充分散氣2～4小時後才可使用。無菌操作所用的各種器械，一般采用幹熱或高壓蒸汽滅菌，或用75%酒精浸泡，然後在無菌操作台麵上晾幹的同時再用紫外線重複殺菌;在使用期間可多次對其進行酒精燈火焰灼燒滅菌。
培養材料的消毒滅菌
采自動物機體的實驗材料，攜帶著微生物及雜質，接種前須進行表麵消毒滅菌，對內部已受微生物侵染的材料應予以淘汰。
從動物機體采集的某些組織塊，須用消毒劑進行浸泡處理，進行表麵消毒。
滅菌程序驗證內容
撰寫驗證方案及製定評估標準。
確認滅菌設備技術資料齊全、安裝正確，並能處於正常運行。
確認關鍵設備控製儀表在規定的參數範圍內能正常運行。
采用被滅菌物品或模擬物品進行重複實驗確認滅菌效果符合規定。
完善文件記錄，撰寫驗證報告。 滅菌程序運行監控
關鍵參數應在驗證確定的範圍內：溫度、壓力、時間、濕度、滅菌氣體濃度、輻照劑量等
滅菌程序定期驗證，時效不超過半年。
滅菌設備或程序發生變更重新進行驗證。 滅菌保證
滅菌效果與滅菌前產品汙染程度及汙染菌特性有關，把握微生物汙染水平及汙染菌耐受性，注意各個環節降低汙染程度。
滅菌冷卻階段防止已滅菌物品再次汙染。
適用生物指示劑、化學指示劑等監控滅菌結果 生物指示劑
基本要求：
1.菌種的耐受性應大於需滅菌產品中所有可能汙染菌的耐受性；
2.菌種應無致病性；
3.菌株應穩定，存活期長，易於保存；
4.易於培養，若使用休眠孢子，孢子含量在90%以上。 常用生物指示劑
濕熱滅菌：嗜熱脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子數為5×105～5×106個/片)
幹熱滅菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子數為5×105～5×106個/片)
輻射滅菌：短小芽孢杆菌孢子（ATCC27142等，活孢子數為5×107～5×108個/片)
氣體滅菌：
環氧乙烷滅菌：
枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子數為5×105～5×106個/片)
氣態過氧化氫滅菌：嗜熱脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子數為1×106～5×106個/片)
過濾除菌法：缺陷假單胞菌（ATCC19146等） 結束語
高壓蒸汽滅菌法是最可靠、應用最普遍的物理滅菌法，用高溫加高壓滅菌,不僅可殺死一般的細菌,對細菌芽胞也有殺滅效果。
主要用於能耐高溫的物品,如金屬器械、玻璃、搪瓷、敷料、橡膠及一些藥物的滅菌。
