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一、培養基的製備
正確製備培養基時微生物檢驗的最基礎步驟之一。使用脫水培養基和其他成分，尤其是含有有毒物質(如膽鹽或其他選擇劑)的成分時,應遵守良好實驗室規範和生產廠商提供的使用說明。培養基的不正確製備會導致培養基出現質量問題。
使用商品化脫水合成培養基製備培養基時，應嚴格按照廠商提供的使用說明配置。記錄所有相關數據，如質量/體積、pH、製備日期、滅菌條件和製備人員等。
使用各別成分製備培養基時,應按照配方準確配製,記錄所有細節信息,如;培養基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質含量、製造商、批號、pH、培養基體積(分裝體積)、無菌措施(包括實施的方式、溫度及時間)、配置日期、人員等,以便潮源。
1.水
除特定要求,實驗室用水的電導率在25℃下應不高於25uS/cm(相當於電阻率≥0.4MΩcm)。
微生物汙染應不超過103CFU/mL，最好低於102CFU/mL。應根GB/T 5750.12或其他有效方法,定期檢驗微生物的汙染。
2.稱量和複水
稱量所需量的脫水培養基(注意防止吸入粉末，尤其是含有有害物質的培養基粉末),先加入少量水,充分混合(注意避免培養基結塊)後再加水至所需的量。
3.溶解和分裝
脫水培養基加水後適當加熱,並不攪拌使其快速溶解，必要時，重新溶解。含瓊脂的培養基在加熱溶解前應浸泡幾分鍾。
4.pH的測定和調整
用pH計測定pH,必要時在滅菌前調節pH，除特殊說明外,培養基滅菌後冷卻至25℃時,要求pH的變化不超過0.2pH單位.通常使用濃度約為40g/L(約1mol/L)的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L（約1mol/L)的鹽酸溶液調節pH。如果滅菌後調節pH，溶液需滅菌。
注:商品化培養基在高壓滅菌前後pH可能發生明顯變化,但使用蒸餾水或去離子水時,滅菌前無需調節pH。
5.分裝
將配置好的培養基分裝到適當的容器中，容器的體積至少為體積的1.2倍。
6.滅菌
①概述
培養基和試劑的滅菌通常采用濕熱滅菌或過濾滅菌。
有些培養基無需高壓滅菌,可煮滅菌。如，含亮綠的腸道菌培養基對光和熱特別敏感，應在煮沸後快速冷卻，避光保存。同樣，一些試劑則不需要滅菌，直接使用(參見相關標準或生產廠商的使用說明）。
②濕熱滅菌
濕熱滅菌在高壓鍋或培養基製備器中進行。高壓黴菌一般采用121℃±3℃黴菌15min。如果培養基的體積超過1000mL，要對滅菌條件進行適當的調整。所有操作均要按照標準和使用說明的規定進行。
注：大容量培養基（＞1000mL）滅菌時可能會造成過度加熱。
加熱後應采取適當的方式冷卻，防止沸溢。這對大容量培養基和敏感性培養基（如含亮綠的培養基）是非常重要的。
③過濾滅菌
過濾滅菌可以在真空負壓或正壓條件下進行。使用無菌設備和0.2um孔徑的濾膜。將過濾裝置的各個部分消毒滅菌,或使用預消毒設備。
一些濾膜上附著蛋白質或其他物質(如抗生素)。為達到有效過濾,應事先將濾膜用無菌水潤濕。
④監測
應對經濕熱或過濾滅菌的培養基進行監測,尤其要對pH、色澤、滅菌效果和均勻度等指標進行監測。
7.添加劑的製備
製備含有有毒物質(特別是抗生素）shiyingxiaoxincaozuo，bimianyinfenmodekuosanzaochengshiyanrenyuanguominhuofashengqitabuliangfanying。caiyongshidangdeyufangcuoshibingxiaoxinanzhaochanpinshiyongshuomingcaozuo。buyaoshiyongguoqideshiji；抗生素工作溶液現配現用；批量配置的抗生素溶液分裝後向冷凍保存，但解凍後的貯存溶液不可再次冷凍;廠商應提供冷凍對抗生素活性影響的相關資料，也可由使用者自行測定。
二培養基配置中常見的問題
1.培養基的pH什麼時候測？用什麼測？怎麼測？
答：對於培養基應該滅菌前測定和調整，滅菌後在測定，如果範圍超出正負0.2則培養基品質不良。
2.滅菌後的培養基是否都要測pH值？如何測定pH值？
答：每個製備批次的培養基都應測定pH，可采用pH試紙或pH計測量。
3.稀釋液滅菌後pH值是否有變化？有何影響？（如pH7.0氯化鈉-蛋白腖緩衝液，pH6.8無菌磷酸鹽緩衝液）
答：一般pH有下降現象，約0.2左右，不同培養基pH變化可能不同。
4. 孟加拉培養基是否可以取代玫瑰紅鈉瓊脂進行培養黴菌和酵母菌？
答：根據中國藥典，采用玫瑰紅鈉瓊脂。
5. 配製PH值7.0氯化鈉-蛋白腖緩衝液時有時因為高壓滅菌器滅菌過程溫度過高而導致培養基混濁了，這種情況緩衝液還能用嗎？
答：建議按正常溫度滅菌，混濁培養基建議不要使用。
6.含瓊脂培養基在冷藏中形成冰晶怎麼處理？銷毀還是加熱再用？
答：建議不要使用。
7.融化的培養基為什麼不能再冷水中冷卻？
答：防止受熱不均引起結塊。
8.滅菌後，滅菌鍋需自然冷卻降壓才可以打開，這段時間是否會造成過度滅菌。
答：自然冷卻過程已經計算在正常滅菌時間內了，不會造成過度滅菌。
9.培養基所用器具若使用濕熱滅菌，是否必須待幹燥後才可以使用？若烘幹或其它方法，中間過程怎樣防止微生物汙染？
答：如果是馬上使用且不是用於非水溶性供試液的製備及實驗，不一定要烘幹；否則，應幹燥後使用，滅菌及幹燥盡量在同一鍋裏進行，或用紗布和牛皮紙包紮緊密。
10.培養基的避光儲存，是否配置好的培養基其全部放避光儲存？
答：最好都避光保存。無條件時，光敏感的培養基一定要。
11.商品培養基幹粉說是加蒸餾水溶解，實際操作是否可以用純化水或注射用水？
答：隻要不含有任何可能抑製或影響微生物生長的物質的水均可。
12.培養基及器具滅菌可否同一設備同滅菌時間進行滅菌？
答：最好分開滅菌，條件不允許時可同爐滅菌，前提是都是潔淨無汙染的。
13.培養基的保溫能否用60℃的培養箱，它與45℃—55℃水浴鍋保溫方法有何不同？
答：可以用恒溫培養箱保溫，但保溫溫度一般是50℃左右，且時間不能過長，一般是不超過4小時。
14.培養基的貯存是否需要放置於2—10℃冰箱內？
答：需冷藏保存的培養基外包裝上會寫明。
15.培養基滅菌後成份會有所蒸發減少，如何處理這個問題？
答：正常情況下蒸發量較少，可忽略不計。
16.培養基融化後出現渾濁是有哪些方麵的原因引起的？應如何避免？
答：可能的情況有
1.培養基配置用水不符合規定；
2.滅菌過程溫度升溫慢或降溫慢；
3.培養基儲存不當；
4.融化時沸騰時間較長等。
17.準備好的培養基有效期如何驗證？
答：定期取出培養基驗證其無菌性，促生長能力等方麵。
18.培養基配製好滅菌後，在高壓容器中保溫降至50℃左右，可不可行？
答：建議最好不要，避免過度受熱。
19.脫水培養基對濕度是否有要求？多少適宜？
答：按要求室溫幹燥環境儲存即可。
20.培養基pH值測定溫度在25℃，這個溫度應怎麼控製？比如固體培養基，固體培養基使用過程中還能調節pH值嗎？
答：可水浴控製培養基溫度。
21.配製培養基過程中，按說明書稱定量，加規定的純化水，煮沸溶解，為了避免煮沸過程總減少水分，是否要在配製過程適當增加水?比如陪硫乙醇酸鹽流體培養基。
答：可適量增加，自己掌握。
22.商品培養基一定要當天配當天用嗎？可否在一周內用完？
答：不是即配即用的培養基的話，儲存得當，可以使用。
23.稱量培養基時，注意不要吸入粉末，這粉末是指何物？
答：就是你所稱量的幹粉培養基 ，因為培養基的粉末對呼吸道有刺激作用，而且培養基中的某些成分，如亞硒酸鹽、疊氮化鈉、乙(yi)酰(xian)胺(an)等(deng)，長(chang)期(qi)吸(xi)入(ru)並(bing)在(zai)體(ti)內(nei)累(lei)積(ji)到(dao)一(yi)定(ding)量(liang)會(hui)對(dui)人(ren)體(ti)健(jian)康(kang)有(you)危(wei)害(hai)。所(suo)以(yi)培(pei)養(yang)基(ji)配(pei)製(zhi)稱(cheng)量(liang)需(xu)做(zuo)好(hao)個(ge)人(ren)防(fang)護(hu)，且(qie)最(zui)好(hao)選(xuan)擇(ze)少(shao)粉(fen)塵(chen)環(huan)保(bao)型(xing)顆(ke)粒(li)培(pei)養(yang)基(ji)。
24.煮(zhu)培(pei)養(yang)基(ji)，用(yong)不(bu)鏽(xiu)鋼(gang)鍋(guo)在(zai)電(dian)磁(ci)爐(lu)上(shang)煮(zhu)可(ke)行(xing)？硫(liu)乙(yi)醇(chun)培(pei)養(yang)基(ji)是(shi)否(fou)要(yao)煮(zhu)沸(fei)？如(ru)何(he)煮(zhu)沸(fei)？用(yong)不(bu)鏽(xiu)鋼(gang)鍋(guo)在(zai)電(dian)磁(ci)爐(lu)上(shang)煮(zhu)沸(fei)可(ke)行(xing)嗎(ma)？可(ke)不(bu)可(ke)以(yi)水(shui)浴(yu)煮(zhu)沸(fei)呢(ne)？
答：硫(liu)乙(yi)醇(chun)應(ying)煮(zhu)沸(fei)，量(liang)大(da)時(shi)，我(wo)實(shi)驗(yan)室(shi)用(yong)不(bu)鏽(xiu)鋼(gang)鍋(guo)在(zai)電(dian)磁(ci)爐(lu)上(shang)煮(zhu)沸(fei)。不(bu)建(jian)議(yi)水(shui)浴(yu)煮(zhu)沸(fei)，因(yin)為(wei)水(shui)浴(yu)煮(zhu)沸(fei)瓊(qiong)脂(zhi)粉(fen)很(hen)難(nan)溶(rong)，導(dao)致(zhi)瓊(qiong)脂(zhi)分(fen)裝(zhuang)不(bu)均(jun)勻(yun)，前(qian)段(duan)分(fen)裝(zhuang)的(de)瓊(qiong)脂(zhi)含(han)量(liang)少(shao)，後(hou)段(duan)分(fen)裝(zhuang)的(de)瓊(qiong)脂(zhi)含(han)量(liang)高(gao)，導(dao)致(zhi)有(you)的(de)管(guan)或(huo)瓶(ping)中(zhong)的(de)凝(ning)固(gu)。
25.如培養基在高壓滅菌器中溫度需自然下降20度才開蓋嗎？
答：高溫滅菌器有安全閥，溫度下降到安全閥可打開時將培養基取出室溫冷卻，各型號滅菌器安全開蓋溫度不盡相同。
