要學習好微生物檢驗,必須具有食品微生物學等學科的基礎,要熟悉各種致病菌的生物學特性;掌握各種致病菌、黴菌和病毒的檢驗程序。
檢驗前準備
(1)準備好所需的各種儀器,如冰箱、恒溫水浴箱、顯微鏡等。
(2)各種玻璃儀器,如吸管、平皿、廣口瓶、試管等均需刷洗幹淨(121℃20min)或幹法(160℃一170℃,2h)滅菌,冷卻後送無菌室備用。
(3)準備好實驗所需的各種試劑、藥品,做好普通瓊脂培養基或其他選擇性培養基,根據需要分裝試管或滅菌後傾注平板或保存在46℃的水浴中或保存在4℃的冰箱中備用。
(4)無菌室滅菌;如用紫外燈法滅菌,時間不應少於45min,關燈半小時後方可進入工作;如用超淨工作台,需提前半小時開機。必要時進行無菌室的空氣檢驗,把瓊脂平板暴露在空氣中15min,培養後每個平板上不得超過15個菌落。
(5)檢驗人員的工作衣、帽、鞋、口罩等滅菌後備用。工作人員進入無菌室後實驗沒完成前不得隨便出入無菌室。
樣品的采集與處理
在(zai)食(shi)品(pin)的(de)檢(jian)驗(yan)中(zhong),樣(yang)品(pin)的(de)采(cai)集(ji)是(shi)極(ji)為(wei)重(zhong)要(yao)的(de)一(yi)個(ge)步(bu)驟(zhou)。所(suo)采(cai)集(ji)的(de)樣(yang)品(pin)必(bi)須(xu)具(ju)有(you)代(dai)表(biao)性(xing),這(zhe)就(jiu)要(yao)求(qiu)檢(jian)驗(yan)入(ru)員(yuan)不(bu)但(dan)要(yao)掌(zhang)握(wo)正(zheng)確(que)的(de)采(cai)樣(yang)方(fang)法(fa),而(er)且(qie)要(yao)了(le)解(jie)食(shi)品(pin)加(jia)工(gong)的(de)批(pi)號(hao)、原料的來源、加工方法、保藏條件、運輸、銷售中的各環節,以及銷售入員的責任心和衛生知識水平等。樣品可分為大樣、中樣、小樣三種。
大樣指一整批,中樣是從樣品各部分取的混合樣,一般為200g小樣又稱為檢樣,一般以25g為wei準zhun,用yong於yu檢jian驗yan。樣yang品pin的de種zhong類lei不bu同tong,采cai樣yang的de數shu量liang及ji采cai樣yang的de方fang法fa也ye不bu一yi樣yang。但dan是shi,一yi切qie樣yang品pin的de采cai集ji必bi須xu具ju有you代dai表biao性xing,即ji所suo取qu的de樣yang品pin能neng夠gou代dai表biao食shi物wu的de所suo有you成cheng分fen。如ru果guo采cai集ji的de樣yang品pin沒mei有you代dai表biao性xing,即ji使shi一yi係xi列lie檢jian驗yan工gong作zuo非fei常chang精jing密mi、淮確,其結果也毫無價值,甚至會出現錯誤的結論。
quyangjiyangpinchulishirenhejianyangongzuozhongzuizhongyaodezuchengbufen,yijianyanjieguodezhunquexinglaishuo,shiyanshishoudaodeyangpinshifoujudaibiaoxingjiqizhuangtairuheshiguanjianwenti。ruguoquyangmeiyoudaibiaoxinghuoduiyangpindechulibudang,dechudejianyanjieguokenenghaowuyiyi。ruguogenjuyixiaofenyangpindejianyanjieguoqushuomingyidapishipindezhilianghuoyiqishiwuzhongdudexingzhi,nameshejiyizhongkexuedequyangfanganjicaiquzhengquedeyangpinzhibeifangfashibibukeshaodetiaojian。
食品微生物檢驗的取樣方案
采用什麼樣的取樣方案主要取決於檢驗的目的.例如用一般的食品的衛生學微生物檢驗去判定一批食品合格與否;查找食物中毒病原微生物;鑒定畜禽產品中是否含有人獸共患病原體等等。目的不同,取樣方案也不同。
1.食品衛生學微生物檢驗的取樣方案
目前國內外使用的取樣方案多種多樣,如一批產品采若幹個樣後混合在一起檢驗,按百分比抽樣;按食品的危害程度不同抽樣;按an數shu理li統tong計ji的de方fang法fa決jue定ding抽chou樣yang個ge數shu等deng等deng。不bu管guan采cai取qu何he種zhong方fang案an,對dui抽chou樣yang代dai表biao性xing的de要yao求qiu是shi一yi致zhi的de。最zui好hao對dui整zheng批pi產chan品pin的de單dan位wei包bao裝zhuang進jin行xing編bian號hao,實shi行xing隨sui機ji抽chou樣yang。下xia而er列lie舉ju當dang今jin世shi界jie上shang較jiao為wei常chang見jian的de幾ji種zhong取qu樣yang方fang案an。
(1) ICMSF的取樣方案
國際食品微生物規範委員會(簡稱ICMSF)的取樣方案是依據事先給食品進行的危害程度劃分來確定的,將所有食品分成三種危害度
I類危害:老人和嬰幼兒食品及在食用前可能會增加危害的食品;
Ⅱ類危害:立即食用的食品,在食用前危害基本不變;
Ⅲ類危害:食用前經加熱處理,危害減小的食品。
另外,將檢驗指標對食品衛生的重要程度分成一般、中等和嚴重三檔,根據以上危害度的分類,又將取樣方案分成二級法和三級法。
①二級法:設定取樣數n,指標值m,超過指標值m的樣品數為c,隻要有c個樣品的結果大於或等於m,就判定整批產品不合格。
②三級法:設定取樣數n,指標值m,附加指標值M,介於m與M之間的樣品數c。隻要有一個樣品值超過M或C規定的數就判整批產品不合格。
(2)美國FDA的取樣方案
美國食品與藥品管理局(FDA)的取樣方案與ICMSF的取樣方案基本一致,所不同的是嚴重指標菌所取的15、30、60個樣可以分別混合,混合的樣品量最大不超過375g。也就是說所取的樣品每個為100g,從中取出25g,然後將15個25g混合成一個375g樣品,混勻後再取25g作為試樣檢驗,剩餘樣品妥善保存備用。
(3)世界糧農組織(FAO)規定的食品微生物質量
1979年版FAO食品與營養報告中的食品質量控製手冊的微生物學分析中列舉了各種食品的微生物限量標準,由於是按ICMSF的取樣方案判定的,所以在此引用。
2.食物中毒微生物檢驗的取樣
當懷疑發生食物中毒時,應及時收集可疑中毒源食品或餐具物、糞便或血液等。
3.人畜共用病病原微生物檢驗的取樣
當懷疑某一動物產品可能帶有人畜共患病病原體時,應結合知識,采取病原體最集中、最易檢出的組織或體液送實驗室檢驗。
食品微生物檢驗采樣方法
按照上述采樣方案,能采取最小包裝的食品就采取完整包裝按無菌操作進行。
不同類型的食品應采用不同的工具和方法:
①液體食品,充分混勻,用無菌操作打開包裝,用100ml無菌注射器抽取,注入無菌盛樣容器。
②固(gu)體(ti)樣(yang)品(pin),大(da)塊(kuai)整(zheng)體(ti)食(shi)品(pin)用(yong)無(wu)菌(jun)刀(dao)具(ju)和(he)鑷(nie)子(zi)從(cong)不(bu)同(tong)部(bu)位(wei)割(ge)取(qu),割(ge)取(qu)時(shi)應(ying)兼(jian)顧(gu)表(biao)麵(mian)與(yu)深(shen)部(bu),並(bing)注(zhu)意(yi)其(qi)代(dai)表(biao)性(xing),小(xiao)塊(kuai)大(da)包(bao)裝(zhuang)食(shi)品(pin)應(ying)從(cong)不(bu)同(tong)部(bu)位(wei)的(de)小(xiao)塊(kuai)上(shang)切(qie)取(qu)樣(yang)品(pin),放(fang)入(ru)無(wu)菌(jun)容(rong)器(qi)。
③冷leng凍dong食shi品pin,大da包bao裝zhuang小xiao塊kuai冷leng凍dong食shi品pin按an小xiao塊kuai個ge體ti采cai取qu,大da塊kuai冷leng凍dong食shi品pin可ke以yi用yong無wu菌jun刀dao從cong不bu同tong部bu位wei削xue取qu樣yang品pin或huo用yong無wu菌jun小xiao手shou鋸ju從cong凍dong塊kuai上shang鋸ju取qu樣yang品pin,也ye可ke以yi用yong無wu菌jun鑽zuan頭tou鑽zuan取qu碎sui屑xie狀zhuang樣yang品pin,放fang入ru盛sheng樣yang容rong器qi。
②③所述食品取樣還應注意檢驗目的需檢驗其品質情況,應取探部樣品。
④生產工序監測采樣:若需檢驗食品汙染情況。
a.車間用水:自來水樣從車間各水龍頭上采取冷卻水。
b.車間台麵、用具及加工人員手的衛生監測:用5cm2孔無菌采樣板及5支無菌棉簽擦拭25cm2麵積《若所采表麵幹燥,則用無菌稀釋液濕潤棉簽後擦拭,若表麵有水,則直接用棉簽擦拭》,擦拭後立即將棉簽頭用無菌剪刀剪入盛樣容器。
c.車間空氣采樣:直接沉降法。將5個直徑90mm的普通營養瓊脂乎板分別置於車間的四角和中部,打開乎皿蓋5min,然後蓋蓋送檢。
樣品處理應在無菌室內進行,若是冷凍樣品必須事先在原容器中解凍2℃一5℃不超過18h或45℃不超過15min。
一般固體食品的樣品處理方法有以下幾種:
1.搗碎均質方法
將100g或100g以上樣品剪碎混勻,從中取25g放入帶225mI稀釋液的無菌均質杯中8000~10000r/min均質1min~2min,這是對大部分食品樣品都適用的辦法。
2.剪碎振搖法
將100g或100g以上樣品剪碎混勻,從中取25g進一步剪碎,放入帶有225mL稀釋液和直徑5mm左右玻璃珠的稀釋瓶中,蓋緊瓶蓋,用力快速振搖50次,振幅不小於40cm。
3.研磨法
將100g或100g以上樣品剪碎混勻,取25g放入無菌乳缽充分研磨後再放入帶有225mI無菌稀釋液的稀釋瓶中,蓋緊蓋後充分搖勻。
4.整粒振搖法
有完整自然保護膜的穎粒狀樣品(如蒜瓣、青豆等)可以直接稱取25s整粒樣品入帶有225mL無菌稀釋液和直徑5mm左右玻璃珠的無菌稀釋瓶中,蓋緊瓶蓋,用力快速振搖50次,振幅在40cm以上。凍蒜瓣樣品若剪碎或均質,由於大蒜素的殺菌作用,所得結果大大低於實際水平。
5.胃蠕動均質法
這(zhe)是(shi)國(guo)外(wai)使(shi)用(yong)的(de)一(yi)種(zhong)新(xin)型(xing)的(de)均(jun)質(zhi)樣(yang)品(pin)的(de)方(fang)法(fa),將(jiang)一(yi)定(ding)量(liang)的(de)樣(yang)品(pin)和(he)稀(xi)釋(shi)液(ye)放(fang)入(ru)無(wu)菌(jun)均(jun)質(zhi)袋(dai)中(zhong),開(kai)機(ji)均(jun)質(zhi)。均(jun)質(zhi)器(qi)有(you)一(yi)個(ge)長(chang)方(fang)形(xing)金(jin)屬(shu)盒(he),其(qi)旁(pang)安(an)有(you)金(jin)屬(shu)葉(ye)板(ban),可(ke)打(da)擊(ji)塑(su)樹(shu)袋(dai),金(jin)屬(shu)模(mo)板(ban)由(you)恒(heng)速(su)馬(ma)達(da)帶(dai)動(dong),作(zuo)前(qian)後(hou)移(yi)動(dong)而(er)撞(zhuang)碎(sui)樣(yang)品(pin)。
樣品的送檢與檢驗
(1)采集好的樣品應及時送到食品微生物檢驗室,越快越好,一般不應超過3h,如果路途遙遠,可將不需冷凍的樣品保持在1℃一5℃的環境中,勿使凍結,以免細菌遭受破壞;如需保持冷凍狀態,則需保存在泡沫塑料隔熱箱內(箱內有幹冰可維持在0℃以下),應防止反複冰涼和溶解。
(2)樣品送檢時,必須認真填寫申請單,以供檢驗入員參考。
(3)檢驗人員接到送檢單後,應立即登記,填寫序號,並按檢驗要求放在冰箱或冰盒中,並積極準備條件進行檢驗。
(4)食品微生物檢驗室必須備有專用冰箱存放樣品,一般陽性樣品發出報告後3d(持殊情況可適當延長)方能處理樣品;進口食品的陽性樣品,需要保存六個月方能處理,每種指標都有一種或幾種檢驗方法,應根據不同的食品、不同的檢驗目的來選擇恰當的檢驗方法。
結果報告
樣品檢驗完畢後,檢驗人員應及時填寫報告單,簽名後送主管人核章,以示生效,並立即交給食品衛生監督人員處理。
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