答：baocundeshidisandaifuhuochulaihou，ruguocaiyongpingbanhuoroutanghuohuaxiangdangyuzhuanjieleyidai，jiushidisidaile，ruguohaizaicizhulidehuajiuhaishiyuanlaidedaishu。ruguoshibaocunzaixiemianshang，zheyizhixiemianyizhijiushidisandai，ruguozhuanjiedaolingyizhixiemianjiushidisidaile。chuandaiyuanze，junzhuhuohuafusu不論以任何形式繁殖了一次就算是傳了一代。但如果僅是物理位置的轉移沒有繁殖就不是傳代，需要注意。

2.剛買回來的陽性菌株是第0代嗎
？

答：一般菌株你買回來的時候上麵都會寫明第幾代
，常規來說都是第0代的。像購買的ATCC或CICC的凍幹粉都是標記為0代的。

3.菌株傳代保存到瓷珠裏一定要挑單菌落嗎？

答：不(bu)一(yi)定(ding)非(fei)挑(tiao)單(dan)菌(jun)落(luo)
，但(dan)是(shi)一(yi)定(ding)要(yao)挑(tiao)相(xiang)同(tong)特(te)征(zheng)的(de)菌(jun)落(luo)
，就(jiu)是(shi)說(shuo)從(cong)同(tong)一(yi)個(ge)菌(jun)落(luo)純(chun)化(hua)出(chu)來(lai)的(de)，以(yi)保(bao)證(zheng)它(ta)們(men)的(de)特(te)性(xing)完(wan)全(quan)一(yi)致(zhi)。原(yuan)則(ze)是(shi)盡(jin)量(liang)多(duo)挑(tiao)，寧(ning)多(duo)勿(wu)少(shao)。

4.菌株保存是-70℃還是-80℃有具體標準規定麼？

答：其實是有標準的
，《SN/T 2632-2010 微生物菌株常規保藏技術規程》是關於菌株保藏的一個標準，大家可以學習一下
，各個保存方式都有介紹
，但是瓷珠是比較新興的保存方式暫時裏麵還沒有收錄。

5.怎樣延長菌株的保存時間呢？

大量的實驗證明菌株在低溫、幹燥、缺氧、缺營養的條件下保存效果是最好的
，越接近這種保存條件
，菌株的保存時間越長。

6.怎樣純化菌株？

純化就是從TSA上或別的非選擇性平板上轉接一次，這就相當於純化了。

7. 我們保存的一代菌株是不是要重新傳代保存呢
，認證老師會不會認為這是個錯誤？

答：應該不會，認證老師不會提出這種問題的

，不過最好是一代菌株保存一些、二代菌株保存一些，使用時工作菌株最好使用第三代菌株，一代菌株可作為長期保存用。

8. 為何要將第三代作為工作菌株？

答：多duo傳chuan代dai幾ji次ci後hou菌jun株zhu的de活huo力li會hui明ming顯xian提ti高gao
，但dan最zui多duo傳chuan代dai到dao第di五wu代dai後hou就jiu不bu能neng用yong了le，因yin為wei第di五wu代dai後hou菌jun株zhu雖sui然ran不bu會hui完wan全quan變bian異yi，但dan變bian異yi率lv會hui明ming顯xian增zeng加jia，因yin此ci選xuan用yong第di三san代dai作zuo為wei工gong作zuo菌jun株zhu是shi比bi較jiao合he適shi的de，若ruo使shi用yong第di一yi
、第二代菌株活力沒有那麼強。

9.用瓷珠管反複上下搖勻
，有泡沫不容易吸出來，怎麼辦？

答：不必特別劇烈大尺度的搖動瓷珠管，稍微上下晃動就可以
；如果確實有泡沫的話可以靜置一會，讓菌株多吸附一下瓷珠也是可以的。

10. 老師
，黴菌需要長出孢子保存，可有黴菌孢子的圖片
，長到什麼程度就可以保存了呢
？

保存這種黑色孢子就可以，這是黑曲黴的圖片。

11. 瓷珠管液體混勻可以吹吸麼
？

答：不建議吹吸
，因為空氣裏可能也帶有部分的細菌，萬一使用的槍頭等有菌混進去就不太好了
，直接擰緊保存管蓋子後上下搖晃即可。

12. TSA斜麵一般多少度保存，可以放在冷藏裏嗎？

答：2-8℃保存，放在冷藏是可以的；注意弧菌和綠膿杆菌要放到室溫20-25℃保存

，否則會很快死亡。

13.如果TSA斜麵放在冷凍裏麵
，會有什麼影響？

答：瓊脂冷凍後性狀會發生改變
，會變得很軟，結構發生改變，所以不建議冷凍；如果要冷凍的話就采用甘油保存法或瓷珠保存法。

14.用瓷珠管保存產氣莢膜梭菌老是保存不好！做好瓷珠管之後瓷珠管要放到厭氧袋裏麵再放到-20℃麼
？

答：如果冷凍保存最好放在厭氧袋裏再-20°保存，保存效果還可以
；或者可以采用庖肉培養基保存，它是一種液體培養基，將產氣莢膜梭菌接進去然後2-8 ℃保存，可以保存一年沒有問題，在厭氧環境下保存效果最好。