大(da)腸(chang)菌(jun)群(qun)也(ye)是(shi)經(jing)常(chang)用(yong)來(lai)衡(heng)量(liang)食(shi)品(pin)衛(wei)生(sheng)情(qing)況(kuang)的(de)重(zhong)要(yao)指(zhi)標(biao)

，因(yin)此(ci)大(da)腸(chang)菌(jun)群(qun)檢(jian)測(ce)是(shi)食(shi)品(pin)微(wei)生(sheng)物(wu)實(shi)驗(yan)室(shi)進(jin)行(xing)的(de)常(chang)規(gui)檢(jian)測(ce)項(xiang)目(mu)之(zhi)一(yi)，絕(jue)大(da)部(bu)分(fen)食(shi)品(pin)都(dou)會要求檢測的項目。在食品微生物實驗室裏，大腸菌群和菌落總數的檢測頻次應該是最高的，但檢測過程中總會有一些小問題困擾著大家，小編根據大家提出的一些問題，來講解一下大腸菌群平板計數法的注意事項。

方法選擇

相比於MPNjishufa，pingbanjishufagengshiyongyudachangjunqunhanliangjiaogaodeshipin。dandachangjunqunduoshaosuanshihanliangjiaogaone
？guobiaolimeiyoumingqueguiding

，dantongchangrenwei
，chanpindachangjunqunyi100CFU/g（mL）為wei界jie，超chao過guo這zhe個ge含han量liang一yi般ban認ren為wei是shi含han量liang較jiao高gao。但dan具ju體ti什shen麼me時shi候hou選xuan用yong平ping板ban計ji數shu法fa進jin行xing大da腸chang菌jun群qun的de檢jian測ce
，大da部bu分fen情qing況kuang還hai是shi要yao看kan你ni的de產chan品pin執zhi行xing的de標biao準zhun。假jia如ru產chan品pin標biao準zhun要yao求qiu大da腸chang菌jun群qun含han量liang的de單dan位wei為weiCFU/g（mL）
，那必須選用平板計數法。若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)
，就應選擇MPN計數法，MPN法具體選用哪版國標此處不再贅述。因此，根據自己產品的情況選擇適當的檢測方法。

培養基的要求

平板計數法使用的培養基為結晶紫中性膽鹽瓊脂培養基，簡稱VRBA。無論是國標，還是培養基的使用說明中都明確表示，VRBA是不需要進行滅菌的，煮沸2min即可使用。特地點出這一點是因為很多朋友都在問VRBA的滅菌條件，對不滅菌的培養基不信任，害怕出現檢測異常


，那是因為這些小夥伴們對其中的原理不清楚。大腸菌群的定義是在一定培養條件下能夠在發酵乳糖
、產酸產氣的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢杆菌，因此大腸菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培養基煮沸的過程中，即使有大腸菌群存在也會被殺滅
，所以從培養基帶入汙染的可能性是沒有的。當然盛裝培養基的容器是需要進行滅菌的，以免容器引入汙染。另外，VRBA是shi一yi種zhong選xuan擇ze性xing的de培pei養yang基ji，含han有you的de結jie晶jing紫zi對dui革ge蘭lan氏shi陽yang性xing菌jun有you比bi較jiao強qiang的de抑yi製zhi作zuo用yong而er對dui革ge蘭lan氏shi陰yin性xing菌jun幾ji乎hu沒mei有you作zuo用yong，而er且qie平ping板ban培pei養yang產chan生sheng的de菌jun落luo還hai需xu要yao進jin行xing複fu發fa酵jiao的de驗yan證zheng，因yin此ciVRBA培養基就不需要進行滅菌了。但值得注意的是，VRBA需要現配現用，配製出的培養基應當在3h之內使用完畢。

稀釋度的確定

國標中要求選擇2-3個適宜的連續稀釋度。什麼樣的稀釋度是合適的呢
？這要根據計數來決定。計數環節要求選擇菌落數在15CFU-150CFU的de平ping板ban進jin行xing計ji數shu
，因yin此ci培pei養yang後hou菌jun落luo數shu在zai這zhe個ge範fan圍wei內nei的de稀xi釋shi度du就jiu是shi適shi宜yi的de稀xi釋shi度du。實shi驗yan室shi經jing常chang檢jian測ce的de產chan品pin的de大da腸chang菌jun群qun的de水shui平ping檢jian測ce人ren員yuan可ke以yi預yu計ji的de，但dan是shi對dui盲mang樣yang

，我wo們men能neng做zuo的de隻zhi有you根gen據ju實shi際ji情qing況kuang多duo檢jian測ce幾ji個ge稀xi釋shi度du了le。這zhe裏li需xu要yao提ti一yi句ju，液ye體ti樣yang品pin的de檢jian測ce稀xi釋shi度du可ke以yi包bao括kuo原yuan液ye。

證實試驗

需要從VRBA平板上挑取10個不同類型的典型和可疑菌落，少於10個菌落的挑取全部的典型和可疑菌落進行BGLB肉湯管驗證。這裏挑取的菌落也是應當有選擇的，典型菌落和可疑菌落的比例應當與平板上培養的兩種菌落的比例相同或相近，這樣能夠降低檢測過程中的誤差。

計數的報告

baogaoguochengshihenduopengyoucunzaiyiwendedifang，yinweipingbanjishufadejieguobaogaoxuyaojiehepeiyangjijunluoshuhefufajiaoyanzhengliangfangmianjinxingjisuan。cunzaiyiwendeqingkuangzhuyaoyouyixiajizhong：

1.所有稀釋度都不在計數範圍內怎麼辦？這種情況一般都是最低稀釋度的平板都小於15CFU，這種情況就是以最低稀釋度的平板菌落數乘以驗證試驗的比例來計算。例如10倍稀釋的兩個平板上菌落數分別為10、8，菌落數為10的平皿挑取10個菌落複發酵中有8個菌落產氣
，菌落數為8的平皿挑取8個菌落複發酵中有7個菌落產氣
，則計算過程是這樣的：(10*8/10+8*7/8)/2*10=75CFU/g（mL）。

2.連續兩個稀釋度的四個平皿的菌落數都在計數範圍內怎麼辦？這個需要參考菌落總數檢測國標裏7.1.2裏的公式計算。我們需要先計算每個平皿的驗證後的菌落數，再代入公式計算即可。例如10倍稀釋度兩個平皿菌落數為120和125,100倍稀釋度兩個平皿的菌落數為17和16，經過複發酵驗證產氣的管數分別為7

、8、8
、8，則我們先計算每個平皿上的菌落數分別為120*7/10=84,125*8/10=100,17*8/10=13.6（我們計14）

，16*8/10=12.8（我們計13），然後將84、100、14、13四個數代入公式：（84+100+14+13）/（2+0.2）*10=959
，結果應報告960CFU/g（mL）。

3.隻有一個稀釋度的一個平皿的菌落數在計數範圍
，其他均不在計數範圍怎麼辦
？這樣我們隻需要複發酵驗證這一個平皿即可，根據這一個平皿的菌落數進行報告。例如10倍稀釋度兩個平皿菌落數為160和142,100倍稀釋度兩個平皿的菌落數為12和13，則我們隻需要從菌落數為142CFU的平皿裏挑取10個菌落進行複發酵驗證即可，假如共有7支發酵管陽性，則應計算142*7/10=99.4，結果報告99CFU/g（mL）。

其實隻要是平板菌落計數的相關問題
，我們都應按照GB 4789.1-2016裏要求的結果與報告要求進行計算和報告即可，無論那種情況，都是萬變不離其宗的。