在日常檢測中,大多數的細菌、放線菌、黴菌培養法均為需氧培養。培養基接種微生物後放於35 ℃~37 ℃或25℃恒溫培養箱(或水浴箱)中,培養18 h-24h或3d-5d,大多數菌能達到指數期,可以進行計數及鑒定。需氧培養法按培養基的狀態來分,可分為三類。
一、固體培養法
固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)法(fa)是(shi)指(zhi)將(jiang)微(wei)生(sheng)物(wu)接(jie)種(zhong)在(zai)固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)上(shang)生(sheng)長(chang)繁(fan)殖(zhi)的(de)方(fang)法(fa),固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)包(bao)括(kuo)瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)板(ban)和(he)瓊(qiong)脂(zhi)斜(xie)麵(mian)。瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)板(ban)用(yong)於(yu)菌(jun)落(luo)計(ji)數(shu)和(he)分(fen)離(li)菌(jun)落(luo),瓊(qiong)脂(zhi)斜(xie)麵(mian)用(yong)於(yu)微(wei)生(sheng)物(wu)形(xing)態(tai)觀(guan)察(cha)或(huo)保(bao)藏(zang),接(jie)種(zhong)後(hou)的(de)平(ping)板(ban)倒(dao)置(zhi)(防止冷凝水滴落到生長的菌體上),堆疊(一般不超過6個平皿)放於培養箱中,培養皿之間和培養皿距離箱壁至少要25 mm,baozhengkongqixunhuan,zheshi,duigegediandewenduyaojinxingyanzheng。weifangzhipeiyangjiguofenganzao,keyongsuliaodaisongsandebaoyixia,yekeyizaipeiyangxiangneifangyibeishuifangzhipeiyangjiganbie。xiemianshiguanfangyushiguanjiashang,ranhoufangzhiyupeiyangxiangzhongjinxingpeiyang。chuciliangzhongfangfashugutipeiyangfawai,haiyouyixiajizhong。
(一)插片培養法
(1)用高壓滅菌後冷卻到50℃左右的培養基製備平板,凝固後用接種環挑取菌懸液劃線接種。
(2)將滅過菌的蓋玻片以450斜插入固體培養基中,緊靠接種物,使菌體沿蓋玻片生長,置28 ℃~32 ℃培養箱培養3d-5 d。
(3)培養完畢後,取出蓋玻片放在載玻片上,直接用低倍鏡觀察放線菌的自然生長個體形態。也可在載玻片上滴一滴0.1%的美藍水溶液,再放上插片,用高倍鏡觀察孢子結構。
(二)載玻片培養法
(1)在培養皿底部鋪一張圓形濾紙,濾紙上放上一根“U"形載玻片擱架,其上放一塊幹淨的載玻片和兩片蓋玻片,蓋上皿蓋,外用紙包紮,高壓滅菌後,烘幹備用。
(2)將經過高壓滅菌冷卻到50 ℃左右的培養基,倒入另外的無菌培養皿中製成2mm厚的平板,凝固後用無菌刀切成1cm2的方塊,放置於載玻片上左右各一塊。
(3)瓊脂塊的四周用接種針接種上黴菌孢子,而後蓋上蓋玻片,壓緊瓊脂塊,在濾紙上加2 ml -3 ml。無菌水或20%無菌甘油,保濕培養,培養好後,可直接用低倍鏡觀察
(三)透析膜培養法
透tou析xi膜mo浸jin在zai試shi管guan中zhong高gao壓ya滅mie菌jun後hou,用yong無wu菌jun的de鑷nie子zi取qu出chu後hou平ping鋪pu在zai瓊qiong脂zhi平ping板ban上shang,在zai膜mo上shang用yong接jie種zhong工gong具ju點dian接jie上shang菌jun種zhong,蓋gai好hao皿min蓋gai後hou,進jin行xing培pei養yang。也ye可ke直zhi接jie把ba透tou析xi膜mo放fang在zai液ye體ti培pei養yang基ji裏li浸jin泡pao後hou,直zhi接jie鋪pu在zai平ping皿min中zhong,滅mie菌jun後hou進jin行xing點dian種zhong微wei生sheng物wu,再zai蓋gai上shang皿min蓋gai進jin行xing培pei養yang。
(四)其他
應用在釀造工業上的培養瓶培養,盤曲、簾子曲培養,厚層通風培養。
二、液體培養法
液體培養法是利用液體培養基對微生物進行培養的方法,可分為靜止培養法和深層培養法。
(一)靜止培養法
靜jing止zhi培pei養yang法fa是shi指zhi在zai接jie種zhong後hou培pei養yang液ye靜jing止zhi不bu動dong進jin行xing培pei養yang。一yi般ban包bao括kuo試shi管guan法fa和he三san角jiao瓶ping淺qian層ceng培pei養yang法fa,培pei養yang時shi盛sheng液ye體ti培pei養yang基ji的de螺luo口kou瓶ping或huo螺luo口kou試shi管guan的de蓋gai不bu要yao擰ning緊jin,鬆song散san蓋gai上shang即ji可ke,放fang於yu試shi管guan架jia上shang,然ran後hou放fang置zhi於yu培pei養yang箱xiang或huo水shui浴yu鍋guo中zhong進jin行xing培pei養yang。在zai靜jing置zhi狀zhuang態tai下xia,三san角jiao瓶ping內nei的de通tong氣qi狀zhuang況kuang與yu其qi中zhong的de裝zhuang液ye量liang和he瓶ping口kou棉mian塞sai的de通tong氣qi程cheng度du對dui瓶ping內nei微wei生sheng物wu的de生sheng長chang速su度du和he生sheng長chang量liang有you很hen大da的de關guan係xi。一yi般ban情qing況kuang下xia,接jie種zhong量liang越yue大da,培pei養yang時shi間jian越yue長chang,生sheng長chang量liang越yue高gao。剛gang接jie種zhong的de時shi候hou,菌jun體ti需xu適shi應ying培pei養yang基ji環huan境jing,故gu繁fan殖zhi較jiao慢man,然ran後hou進jin入ru快kuai速su生sheng長chang期qi,生sheng長chang速su度du呈cheng指zhi數shu增zeng長chang,到dao一yi定ding數shu量liang後hou,培pei養yang基ji的de營ying養yang成cheng分fen消xiao耗hao殆dai盡jin,次ci生sheng產chan物wu增zeng多duo,菌jun體ti生sheng長chang速su度du減jian緩huan。
(二)通氣深層培養法
1.振蕩(搖瓶)培養法
此法最早是荷蘭人A. J. Kluyver等在1933年使用,即將三角瓶內培養液用8層紗布包住瓶口,以取代一般的棉花塞,同時降低瓶內的裝液量,把它放置於搖床上有節奏的振蕩,以該法提高液體溶氧量的目的。
該法可以對微生物進行通氣深層培養,通過對細菌、酵母等單細胞微生物振蕩培養,可以得到均一的菌懸液,常用於菌種的選育及生化試驗和發酵試驗等。
振蕩培養的設備有恒溫搖床、搖瓶機等,培養瓶放在裏麵後,進行振蕩培養,瓶口用6層~8層的紗布包紮,瓶內液體不宜過多,防止濺到瓶塞上引起汙染。
2.發酵罐培養法
可進行較大液體量的通氣培養,有小型發酵罐和大型的發酵罐,小型的發酵罐一般為1L~100 L,大型的容量一般在1m3-500 m3,能夠提供培養微生物的營養和氧氣,並且有自動控製和記錄裝置。
三、半固體培養法
利用半固體培養基進行培養的方法,半固體培養基含有一定的瓊脂(0.02%-0.3% ),shipeiyangjiyouyidingdeniandu,danmeiyouwanquanguhua。peiyangshi,shengbangutipeiyangjideshiguanfangzhiyushiguanjiashang,ranhouzhiyupeiyangxiangzhongjinxingpeiyang。yibanyongyushenghuashiyan。
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