革蘭氏染色的原理：

細菌細胞通過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物，革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、taijutangwangcengcijiaoduoqiejiaolianzhimi
，guyuyichunhuobingtongtuosechulishi，yinshishuifanershiwangkongsuoxiao，zaijiashangtabuhanleizhi
，guyichunchulibuhuichuxianfengxi
，yincinengbajiejingziyudianfuhewulaolaoliuzaibinei，shiqirengchengzise
；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽tai聚ju糖tang層ceng薄bo且qie交jiao聯lian度du差cha，在zai遇yu脫tuo色se劑ji後hou
，以yi類lei脂zhi為wei主zhu的de外wai膜mo迅xun速su溶rong解jie
，薄bo而er鬆song散san的de肽tai聚ju糖tang網wang不bu能neng阻zu擋dang結jie晶jing紫zi與yu碘dian複fu合he物wu的de溶rong出chu，因yin此ci通tong過guo乙yi醇chun脫tuo色se後hou仍reng呈cheng無wu色se，再zai經jing沙sha黃huang等deng紅hong色se染ran料liao複fu染ran，就jiu使shi革ge蘭lan氏shi陰yin性xing菌jun呈cheng紅hong色se。

革蘭氏染色的步驟：

塗片
、晾幹、固定、染色
、水洗
、媒染
、脫色、複染。此處不加贅述。

影響革蘭氏染色結果準確性的關鍵因素：

1.試劑影響。這是我們首先應該確保的
，我們使用的試劑必須是有效的。實驗室應當建立有效的試劑管理程序，從試劑的驗收到存放、使用、過期後的廢棄處理都應有嚴格規定，確保我們使用的試劑是有效的。工欲善其事必先利其器，這也是我們試驗成功最基礎的一環。

2.染色菌的選擇。菌齡對革蘭氏染色結果的影響是十分大的。womenranseguochengzhongxuanzedejunyinggaishichuyuhuoyueshengchangqi，zheyangdexijunhuoxingqiang
，shenglitezhengmingxian，suoyiransedejieguozhunquedugao，yibanqingkuangxiabuhuichuxianwucha。peiyangshijianjiaochangdegelanshiyangxingjun，youyuxibaolaohua，shenzhiyoubufenjunzairansezhiqianjiuyijingsiwanghuozhezixingrongjiele，zaochengxibaobitongtouxingzengjia，jiuhuichengxianchujiayinxing。yijinhuangseputaoqiujunweili，jinpushidianxingdegelanshiyangxingjun，yourenzengjingtongjiguopeiyangzhibutongshijiandejinpudegelanshiransejieguo，jieguobiaoming，zaijinpuhuoyueqide22h-26h之間

，染色結果的準確率基本可以達到100%，而超過26h之後
，準確率就開始下降，培養至36h時
，準確率大概會下降30%左右。所以我們在染色時
，一定要選擇處於活躍期、活性較強的菌落，在檢測過程中一定要嚴格的在國標要求的時間段內進行染色試驗，不能提前或者延後。

3.塗菌的狀態。zairansezuichudetubuzhong，zaitiaoqujuntihouyinggaizaiwujunshuishangtuchengbobodejunmo。erzaitubuguochengzhong，ruoshijuntiduiji，yehuijidayingxiangransejieguodezhunquexing。菌落堆積過多
，往往菌體之間變得毫無縫隙
，而其細胞壁的成分影響造成了脫色的情況不佳，容易產生假陽性的結果。同時，在初染、meiranjifurandeguochengzhong，yingjiangranyefugaizhenggejunmo
，bimianyibufenjunranseerlingyibufenjunmeiyouranse。yincizaitupianguochengyidingyaojiangjunmotudeshaoerjunyun，zheyangcainengdadaozuijiaxiaoguo。

4.媒染時間。媒染時間對革蘭氏陰性菌的染色結果有很大影響。由(you)於(yu)媒(mei)染(ran)時(shi)間(jian)過(guo)長(chang)，結(jie)晶(jing)紫(zi)在(zai)碘(dian)液(ye)長(chang)時(shi)間(jian)作(zuo)用(yong)下(xia)過(guo)分(fen)牢(lao)固(gu)結(jie)合(he)在(zai)菌(jun)體(ti)細(xi)胞(bao)壁(bi)上(shang)，影(ying)響(xiang)了(le)酒(jiu)精(jing)的(de)脫(tuo)色(se)效(xiao)果(guo)，從(cong)而(er)會(hui)導(dao)致(zhi)這(zhe)種(zhong)假(jia)陽(yang)性(xing)的(de)效(xiao)果(guo)。以典型的革蘭氏陰性菌大腸埃希氏菌為例，有人做過統計，媒染時間嚴格控製在40s-60s之內
，染色結果準確率基本可達到100%
，而超過60s準確率會有一定的降低，若媒染超過100s，準確率甚至可降低接近20%左右。因此在媒染過程中一定要注意媒染時間
，控製在50-60s為宜。

5.酒精脫色。jiujingtuoseyeshiyigeduijieguoyingxiangjiaodadecaozuoguocheng。gelanshiyinxingjunhegelanshiyangxingjunzuizhuyaodechayishixibaobitaijutangcenghouduhejiegou，gelanshiyinxingjunxibaobitaijutangcenghenbo
，zhiduotanghanlianggaoyincizaijiujingtuoseshi，xijunxibaobideduotangchengfenhuibeijiujingrongjie
，zengdalexibaobidetongtouxing，jiejingzijidianfuhewujiuhenkuaibeijiujingxituo，zhihoujiuhuibeishahuangfuranchenghongse
；而陽性菌肽聚糖層厚

，脂多糖少

，酒精隻能起到脫水效果而無法進入
，這樣結晶紫和複合物就無法洗脫出來使細胞呈紫色。因yin此ci，酒jiu精jing脫tuo色se時shi間jian短duan
，脫tuo色se效xiao果guo不bu佳jia，會hui導dao致zhi陰yin性xing菌jun菌jun體ti內nei的de結jie晶jing紫zi和he複fu合he物wu不bu能neng有you效xiao的de全quan部bu洗xi脫tuo出chu來lai，就jiu會hui出chu現xian明ming顯xian的de誤wu差cha
，使shi陰yin性xing菌jun出chu現xian假jia陽yang性xing。而er洗xi脫tuo時shi間jian過guo長chang，也ye會hui導dao致zhi陽yang性xing菌jun的de細xi胞bao壁bi被bei酒jiu精jing破po壞huai
，導dao致zhi細xi胞bao內nei的de紫zi色se被bei洗xi脫tuo，呈cheng現xian假jia陰yin性xing。因yin此ci洗xi脫tuo時shi間jian也ye是shi革ge蘭lan氏shi染ran色se的de關guan鍵jian環huan節jie。洗xi脫tuo時shi間jian應ying當dang嚴yan格ge控kong製zhi在zai20s-30s之間
，同時保證洗脫效果。

總結一下，在整個革蘭氏染色過程中，在保證試劑有效的前提下，需要嚴格控製的幾個方麵：染色菌必須是在其活躍期內，塗布狀態不可太厚
，媒染時間嚴格控製在50s-60s之間
，脫色時間嚴格控製在20s-30s。把握以上的關鍵控製點，革蘭氏染色基本就不會出現問題啦！