Uu在含95% 氮氣和5%CO2 環境中生長良好。其生長最適pH為5.5-6.5,最適溫度為36℃-37℃。Uu具有尿素酶，能分解尿素產氨，使含酚紅指示劑的Uu液體培養基pH值上升，顏色由黃色變為紅色。再將液體培養物轉種到Uu固體培養基上，能生長成具特征性油煎蛋樣集落。

（1 ）液體培養基：支原體肉湯培養基80mL，馬血清或小牛血清10mL，酵母浸液10mL, 
10 %尿素溶液0.5mL-1.5mL, 0.4%酚紅溶液0.5mL,青黴素（使其在培養基中的濃度為500U/mL-2000U/mL,）用1N HCl 調pH值至5.5-6.5, 用小試管分裝後置冰箱中備用

，每管1.5-2.0mL。

（2 ） 固體培養基：在100mL 支原體肉湯培養基中
，加入瓊脂1.2-1.4g, ,高壓滅菌後冷卻到 50 ℃左右，逐一加入上述添加劑。搖勻

，倒入無菌平皿中，待凝固後
，置冰箱中備用。

接種標本後，經孵育，若培養基發生由黃變紅的顏色變化
，透明無混濁（有別於某些細菌及 真菌生長）則可初步判斷為有支原體生長。大多數Uu在24h內可獲得陽性結果。如果培養基發生顏色變化，但液體又有混濁，則應排除雜菌汙染, 可用0.45μm濾膜過濾後
，作再接種觀察。進一步診斷需將液體培養物接種到固體培養基上培養, 經Dienes法染色後在低倍顯微鏡下觀察集落形態。陰性結果最好觀察５天。Uu 在固體培養基上集落核心呈粗顆粒狀,具極窄的邊，有時呈油煎蛋樣。如用 Dienes 法染色，集落為特異的藍色。一般細菌的菌落不著色，容易鑒別。

（二）代謝抑製試驗

根(gen)據(ju)特(te)異(yi)性(xing)抗(kang)體(ti)能(neng)阻(zu)止(zhi)支(zhi)原(yuan)體(ti)的(de)生(sheng)長(chang)和(he)代(dai)謝(xie)這(zhe)一(yi)特(te)性(xing)
，可(ke)用(yong)病(bing)人(ren)血(xue)清(qing)進(jin)行(xing)代(dai)謝(xie)抑(yi)製(zhi)試(shi)驗(yan)。在(zai)加(jia)有(you)抗(kang)血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)
，支(zhi)原(yuan)體(ti)的(de)代(dai)謝(xie)受(shou)到(dao)抑(yi)製(zhi)，從(cong)而(er)阻(zu)止(zhi)了(le)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)顏(yan)色(se)改(gai)變(bian)。

代謝抑製試驗也可用於檢測感染支原體患者血清抗體的滴度。即將血清作10倍連續稀釋後
，滴入支原體培養液，並以不加血清的支原體試驗管和不加支原體液的培養基管作對照。經37℃培養，不加抗血清的培養管支原體應生長良好
，培養基變成紅色（Uu或Mh），未加支原體液培養基管顏色不變。未發生顏色變化的最高血清稀釋度為代謝抑製試驗的抗體滴度。

（三） 間接血凝試驗

在一定條件下，抗體和相應抗原相遇，可形成抗原抗體複合物。這種複合物分子團很小,不bu能neng形xing成cheng肉rou眼yan可ke見jian的de反fan應ying。用yong經jing鞣rou酸suan處chu理li的de紅hong細xi胞bao作zuo載zai體ti，將jiang抗kang原yuan吸xi附fu在zai其qi表biao麵mian，使shi紅hong細xi胞bao致zhi敏min，待dai與yu相xiang應ying的de血xue清qing抗kang體ti相xiang遇yu時shi
，可ke出chu現xian肉rou眼yan可ke見jian的de凝ning集ji現xian象xiang。

（四）生長抑製試驗

特異性抗體能阻止支原體的生長和代謝。用直徑為6mm-8mm的圓形滅菌濾紙片，以未稀釋抗血清浸透後放入無菌平皿內，於４℃下幹燥後待用。 吸取待檢菌液0.5mL塗布於固體培養基上
，置３7℃使瓊脂表麵稍幹燥。以無菌操作鑷取抗血清紙片放於瓊脂表麵,培養4日-5日後,在低倍顯微鏡下觀察濾紙片周圍有無支原體生長。若濾紙片周圍無菌落生長，出現抑菌圈大於2mm者表示該支原體與抗血清係同種免疫原


，小於2mm判為異種。

（五）分子生物學診斷方法

目前主要應用聚合酶鏈反應（PCR）法及DNA探針技術作診斷。前者具有高度特異性和敏感性


、且快速

、簡便。但操作要求極為嚴格。

聚合酶鏈反應的原理是DNA片段擴增，其中支原體引物的選擇是PCR檢測技術中的關鍵。1９９1年Willonghby 設計的引物來自脲酶基因。Zheng等（1995）用MB抗原基因引物對所有14個血清型的Uu均顯示良好的PCR擴增效果

，其敏感性較Willonghby設計的脲酶基因引物更好。