引言

層析法又稱色層分析法或色譜法（Chromatography），它是在1903~1906年由俄國植物學家M. Tswett首先提出來的。他將葉綠素的石油醚溶液通過CaCO3管柱，並繼續以石油醚淋洗，由於CaCO3對葉綠素中各種色素的吸附能力不同，色素被逐漸分離，在管柱中出現了不同顏色的譜帶或稱色譜圖（Chromatogram）。

當時這種方法並沒引起人們的足夠注意，直到1931nianjianggaifangfayingyongdaofenlifuzadeyoujihunhewu
，renmencaifaxianletadeguangfanyongtu。suizhekexuejishudefazhanyijishengchanshijiandexuyao，cengxijishuyededaolexunsudefazhan。weicizuochuzhongyaogongxiandeshiyingguoshengwuxuejiaMartin 和Synge
，他們首先提出了色譜塔板理論。這是在色譜柱操作參數基礎上模擬蒸餾理論
，以理論塔板來表示分離效率，定量的描述
、評價層析分離過程。其次
，他們根據液－液逆流萃取的原理，發明了液－液分配色譜。特別是他們提出了遠見卓識的預言：一、流動相可用氣體代替液體，與液體相比，物質間的作用力減小了
，這對分離更有好處；二
、使用非常細的顆粒填料並在柱兩端施加較大的壓差
，應能得到最小的理論塔板高（即增加了理論塔板數），這將會大大提高分離效率。前者預見了氣相色譜的產生
，並在1952年誕生了氣相色譜儀，它給揮發性的化合物的分離測定帶來了劃時代的變革；後者預見了高效液相色譜（HPLC）的產生
，在60年代末也為人們所實現，現在HPLC 已成為生物化學與分子生物學、化學等領域不可缺少的分析分離工具之一。

因此
，Martin 和Synge 於1952nianbeishouyunuobeierhuaxuejiang。rujindesecengfenxifajingchangyongyufenliwusedewuzhi，yimeiyouyansezhegeteshudehanyi，dansepufahuosecengfenxifazhegemingzirengbaoliuxialaiyanyong。xianzaiwomenjianchengweicengxifahuocengxijishu。cengxifadezuidatedianshifenlixiaolvgao，tanengfenligezhongxingzhijixiangleisidewuzhi。erqietajikeyiyongyushaoliangwuzhidefenxijianding，youkeyongyudaliangwuzhidefenlichunhuazhibei。yinci，zuoweiyizhongzhongyaodefenxifenlishouduanyufangfa，taguangfandiyingyongyukexueyanjiuyugongyeshengchanshang。xianzai，tazaishiyou、化工、醫藥衛生
、生物科學、環境科學、農業科學等領域都發揮著十分重要的作用。

層析的基本理論

層析法是一種基於被分離物質的物理、化學及生物學特性的不同，使它們在某種基質中移動速度不同而進行分離和分析的方法。例如：我們利用物質在溶解度、吸附能力、立體化學特性及分子的大小
、帶電情況及離子交換、親和力的大小及特異的生物學反應等方麵的差異
，使其在流動相與固定相之間的分配係數（或稱分配常數）不同
，達到彼此分離的目的。

對於一個層析柱來說，可作如下基本假設：

①層析柱的內徑和柱內的填料是均勻的，而且層析柱由若幹層組成。每層高度為H，稱為一個理論塔板。塔板一部分為固定相占據，一部分為流動相占據，且各塔板的流動相體積相等，稱為板體積，以Vm 表示。

②每個塔板內溶質分子在固定相與流動相之間瞬間達到平衡，且忽略分子縱向擴散。

③溶質在各塔板上的分配係數是一常數


，與溶質在塔板的量無關。

④流動相通過層析柱可以看成是脈衝式的間歇過程（即不連續過程）。從一個塔板到另一個塔板流動相體積為Vm。當流過層析柱的流動相的體積為V 時
，則流動相在每個塔板上跳越的次數為n:n1=v:v1。

⑤溶rong質zhi開kai始shi加jia在zai層ceng析xi柱zhu的de第di零ling塔ta板ban上shang。根gen據ju以yi上shang假jia定ding

，將jiang連lian續xu的de層ceng析xi過guo程cheng分fen解jie成cheng了le間jian歇xie的de動dong作zuo，這zhe與yu多duo次ci萃cui取qu過guo程cheng相xiang似si
，一yi個ge理li論lun塔ta板ban相xiang當dang於yu一yi個ge兩liang相xiang平ping衡heng的de小xiao單dan元yuan。

層析的基本概念

（1）固定相

固定相是層析的一個基質。它可以是固體物質（如吸附劑
，凝膠，離子交換劑等）
，也可以是液體物質（如固定在矽膠或纖維素上的溶液），這些基質能與待分離的化合物進行可逆的吸附，溶解
，交換等作用。它對層析的效果起著關鍵的作用。

（2）流動相

在層析過程中，推動固定相上待分離的物質朝著一個方向移動的液體
、氣體或超臨界體等，都稱為流動相。柱層析中一般稱為洗脫劑
，薄層層析時稱為展層劑。它也是層析分離中的重要影響因素之一。

（3）分配係數及遷移率（或比移值）

分配係數是指在一定的條件下
，某種組分在固定相和流動相中含量（濃度）的比值，常用K 來表示。分配係數是層析中分離純化物質的主要依據。

K = Cs / Cm

其中Cs: 固定相中的濃度
，Cm: 流動相中的濃度。