除少數培養基隻需加熱溶解，不需高壓滅菌外，大部分培養基均需121℃高壓滅菌15-30分鍾。尤其是對無菌試驗培養基滅菌不徹底，直接關係到試驗結果。因此必須認真對高壓滅菌器進行滅菌效果的驗證。 
  
1．試驗材料
(1)嗜熱脂肪芽胞杆菌紙片。嗜熱脂肪芽胞杆菌(Bacillus  stearothermophilus)ATCC7053是本法常用的生物指示菌
，含芽胞量5-lO5 CFU/片。
(2) 121℃壓力蒸氣滅菌化學指示卡。
(3)溴甲酚紫腖水培養基116℃高壓滅菌20分鍾後備用。
(4)O-150℃留點溫度計。

 2．方法與結果
    將嗜熱脂肪芽胞杆菌紙片（以下簡稱菌片）用無菌鑷子放人密封試管中。化學指示卡和留點溫度計放入敞口試管中。以上兩種試管各準備5-10份。分別放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如滅菌器為二層
，則需放10處。
    留點溫度計標化合格後方可用於驗證試驗。檢測前
，需將溫度計的水銀柱甩至40℃以下。每次監測後留點溫度計的溫差應存1℃之間
，則說明滅菌器內的溫度分布是均勻的。
    滅菌後的菌片應在嚴格無菌操作條件下放入滅菌後的溴甲酚紫腖水培養基內56-60℃培養24-48小(xiao)時(shi)，觀(guan)察(cha)顏(yan)色(se)變(bian)化(hua)。如(ru)培(pei)養(yang)基(ji)變(bian)為(wei)黃(huang)色(se)，說(shuo)明(ming)菌(jun)片(pian)中(zhong)的(de)嗜(shi)熱(re)脂(zhi)肪(fang)芽(ya)胞(bao)杆(gan)菌(jun)尚(shang)未(wei)完(wan)全(quan)滅(mie)活(huo)
，細(xi)菌(jun)仍(reng)可(ke)在(zai)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)生(sheng)長(chang)，分(fen)解(jie)葡(pu)萄(tao)糖(tang)產(chan)酸(suan)變(bian)為(wei)黃(huang)色(se)。如(ru)培(pei)養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)不(bu)變(bian)化(hua)仍(reng)為(wei)紫(zi)色(se)，則(ze)說(shuo)明(ming)芽(ya)胞(bao)已(yi)滅(mie)活(huo)。同(tong)時(shi)要(yao)用(yong)未(wei)經(jing)滅(mie)菌(jun)的(de)紙(zhi)片(pian)放(fang)入(ru)培(pei)養(yang)基(ji)內(nei)作(zuo)為(wei)陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)，不(bu)加(jia)紙(zhi)片(pian)的(de)空(kong)白(bai)培(pei)養(yang)基(ji)作(zuo)為(wei)陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)。
    huaxuezhishikashangdezhishisekuai，zaigaoyazhengqimiejunshi，youdanhuangsebianweiheise。suizheyansebianhuadeshenqian，bingyuduizhaosexiangbi
，kepanduanmiejunxiaoguoshifoudadaoyaoqiu。huaxuezhishikayingzaiganzaochubaocun。yuchaohuibianse
，yingxiangmiejunxiaoguodeguance。
    高gao壓ya蒸zheng氣qi滅mie菌jun必bi須xu使shi蒸zheng氣qi順shun利li進jin入ru滅mie菌jun器qi內nei

，與yu滅mie菌jun物wu品pin接jie觸chu，並bing將jiang原yuan有you的de冷leng空kong氣qi排pai出chu方fang可ke達da到dao滅mie菌jun的de效xiao果guo。要yao進jin行xing空kong載zai熱re分fen布bu和he滿man載zai熱re穿chuan透tou力li驗yan證zheng(滿載時不超過總體積的2/3)。二種驗證各重複三次，共做六次。
    5個點六次試驗表明溫度均在121℃，化學指示卡變黑；程度與對照色一致
；培養基均未改變顏色
，說明高壓蒸氣滅菌效果合格。
    高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)器(qi)屬(shu)於(yu)強(qiang)檢(jian)儀(yi)器(qi)，但(dan)強(qiang)檢(jian)隻(zhi)是(shi)對(dui)儀(yi)器(qi)物(wu)理(li)參(can)數(shu)的(de)考(kao)核(he)。所(suo)以(yi)做(zuo)過(guo)強(qiang)檢(jian)的(de)滅(mie)菌(jun)器(qi)還(hai)必(bi)須(xu)進(jin)行(xing)滅(mie)菌(jun)效(xiao)果(guo)的(de)驗(yan)證(zheng)。一(yi)些(xie)單(dan)位(wei)常(chang)常(chang)忽(hu)略(lve)了(le)這(zhe)個(ge)重(zhong)要(yao)的(de)問(wen)題(ti)。國(guo)內(nei)市(shi)售(shou)的(de)手(shou)提(ti)滅(mie)菌(jun)器(qi)
，往(wang)往(wang)儀(yi)器(qi)指(zhi)針(zhen)達(da)到(dao)所(suo)需(xu)的(de)溫(wen)度(du)，但(dan)滅(mie)菌(jun)物(wu)品(pin)的(de)實(shi)際(ji)溫(wen)度(du)卻(que)未(wei)達(da)到(dao)要(yao)求(qiu)。導(dao)致(zhi)滅(mie)菌(jun)物(wu)品(pin)不(bu)徹(che)底(di)
，影(ying)響(xiang)實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)。培(pei)養(yang)基(ji)滅(mie)菌(jun)不(bu)徹(che)底(di)，影(ying)響(xiang)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)使(shi)用(yong)及(ji)結(jie)果(guo)判(pan)斷(duan)。因(yin)此(ci)高(gao)壓(ya)蒸(zheng)氣(qi)滅(mie)菌(jun)器(qi)無(wu)菌(jun)效(xiao)果(guo)的(de)驗(yan)證(zheng)是(shi)一(yi)個(ge)必(bi)須(xu)引(yin)起(qi)重(zhong)視(shi)的(de)問(wen)題(ti)。