在日常分離分析工作中,色譜柱使用是否得當,直接影響色譜柱的壽命。下麵介紹C18柱在日常使用過程中應注意的事項。
(1)柱子在裝卸、更換時,動作要輕,接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動,以免柱床產生空隙。
(2)如果儀器用來做常規分析,樣品種類有限,但分析次數多,則不妨為每一類常規分析配置1根專用柱,這樣有助於延長柱子的壽命。
(3)如使用柱溫控製裝置時,應注意在通入流動相後才能升溫。
(4)流動相使用前需進行脫氣處理,以免降低柱效和影響檢測等。樣品溶液需經適當的前處理及過濾,以減少柱汙染和堵塞。
(5)在更換流動相種類時,應注意溶劑的互溶性,防止發生鹽析現象。
(6)柱子的實際操作壓力應低於填裝時的最高壓力,最好在最高壓力一半以下。一般不超過20 593.965~29 419.95 kPa。在低壓力(≤14 709.975 kPa)的範圍使用,可使柱保持長時期的高柱效。
(7)C18色譜柱屬非極性鍵合相色譜柱,流動相的pH值應嚴格控製在2~7之間,以免損壞柱子。
(8)在完成分離分析工作之後,不應立即停機,需及時對色譜分析係統進行衝洗,一般0.5 h以上,以除去色譜柱內的雜質。
(9)如果流動相中有鹽類,首先用水充分清洗。如果是胺類(如三甲胺類或四丁基胺類)添加到流動相中,要用50%甲醇和0.05%磷酸溶液混合溶劑衝洗,不要隻用水衝洗。
(10)C18一般用100%甲醇作為保存溶劑,以防柱子幹裂而損壞。嚴禁水或緩衝溶液長時間在色譜流路中保留。
(11)選用合適的C18保護柱,以保護分析柱免受雜質顆粒及不可逆吸附的幹擾物的影響。保護柱內裝填料顆粒度應與分析柱填料的顆粒度盡量一致。
(12)柱的保存期不宜太長。短期不用的C18柱,用甲醇衝洗30~60 min,然後將柱兩端密封。較長期不用的柱子,一是采取定期衝洗,再密封的方法;二是在衝洗後,柱兩端各裝1隻有一定容量的灌滿甲醇的容器(隻裝一端也可),以補充在較長存放期間柱內溶劑的蒸發。
維修
色se譜pu柱zhu在zai日ri常chang使shi用yong過guo程cheng中zhong,盡jin管guan保bao護hu嚴yan格ge,樣yang品pin和he流liu動dong相xiang盡jin管guan經jing過guo前qian處chu理li,但dan經jing過guo長chang時shi間jian的de使shi用yong,仍reng然ran難nan以yi完wan全quan避bi免mian柱zhu子zi受shou到dao汙wu染ran,固gu定ding相xiang流liu失shi、板結、柱床塌陷以及柱效下降等。有些可以通過維修,使部分柱效恢複。
3.1 柱汙染再生技術
色譜柱汙染後,可以用合適的溶劑衝洗,使柱效再生。C18柱常規的再生洗滌方法是:分別用甲醇、三氯甲烷、甲醇/水各60 mL依次通過色譜柱,再用100%甲醇60 mL平衡色譜柱後封存,柱效將恢複正常。必要時,根據柱汙染性質(如有機汙染、鹽類汙染等),采用0.05 mol/L H2SO4、0.5 mol/L H3PO4或0.1 mol/L EDTA鈉鹽衝洗,然後再用水衝洗,最後用100%甲醇平衡色譜柱後封存。對於嚴重汙染的C18柱,可采用水、甲醇、氯仿、乙烷依次衝洗後,按順序倒過來再衝洗1次,每次所用溶劑60 mL,不接檢測器,最後用100%甲醇平衡色譜柱封存。
3.2 柱汙染的修複
在柱汙染再生無效或已知柱汙染嚴重時,可以采用柱修補的方法解決,但柱汙染深度不宜超過5 mm。方法是將特製小鏟將汙染部分挖去,再用與柱填料相同的固定相與流動相混合製成漿狀,然後將漿狀固定相仔細補入被挖去的部分(盡量使後填補的固定相接近原裝的緊密程度),修xiu平ping端duan麵mian即ji可ke。修xiu好hao的de柱zhu子zi如ru果guo柱zhu頭tou兩liang端duan的de篩shai板ban的de孔kong徑jing是shi一yi致zhi的de,可ke將jiang柱zhu子zi顛dian倒dao過guo來lai使shi用yong一yi般ban時shi間jian,目mu的de是shi借jie助zhu流liu動dong相xiang衝chong洗xi作zuo用yong,恢hui複fu柱zhu床chuang緊jin密mi程cheng度du。
3.3 柱塌陷的修複
柱塌陷的原因很多。對於塌陷不太嚴重時,如果柱頭兩端的篩板孔徑是一致的,可將柱顛倒使用一般時間,即可恢複性能。當塌陷嚴重(5 mm左右)時,可采用柱汙染的修複方法修補即可。
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