液相常見問題10小問

1. 如何進行色譜柱的維護？

 

①建議檢測前樣品和流動相進行過濾。

 

②建議每天做完樣品後及時進行清洗。

 

③常規檢測：測試完後直接把色譜柱反向連接采用90%有機相衝洗45min，最後保存在純甲醇或純乙腈中。

 

④使用緩衝鹽條件：

 

a等度條件：使用緩衝鹽之前和之後都用過渡流動相以1ml/min流速衝洗45min。

 

b梯度條件：使用緩衝鹽之前與初始流動相組成相同的過渡流動相以1ml/min流速衝洗45min。

 

注意：

 

過渡流動相是指有機相和水相比例與分析流動相相同比例
，隻是不含有緩衝鹽。

 

緩衝鹽衝洗幹淨後
，采用90%有機相反向衝洗60min，最後保存在純有機溶劑中。

 

注意：

 

使用緩衝液不能存留色譜柱中過夜。

 

 

2.氨基柱在進酸性樣品時，很傷柱子，如使用一段時間後，柱效降低，峰形改變
，如何恢複？

答：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液衝洗該柱(衝洗後當然要再用不含堿的流動相洗去多餘氨)，之後再進行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1％。

 

3.液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什麼？

 

 

①篩板堵塞或柱失效

，解決辦法是反向衝洗柱子，替換篩板或更換柱子。

②存在幹擾峰
，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子。

③可能柱超載，減少進樣量。

 

4.HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法是什麼？

 

①樣品量不足，解決辦法為增加樣品量。

②樣品未從柱子中流出
，可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子。

③樣品與檢測器不匹配
，根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器。

④檢測器衰減太多，調整衰減即可。

⑤檢測器時間常數太大，解決辦法為降低時間參數。

⑥檢測器池窗汙染
，解決辦法為清洗池窗。

⑦檢測池中有氣泡
，解決辦法為排氣。

⑧記錄儀測壓範圍不當，調整電壓範圍即可。

⑨流動相流量不合適，調整流速即可。

⑩檢測器與記錄儀超出校正曲線
，解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。

 

5.做HPLC分析時
，柱壓不穩定，原因何在？如何解決？

 

①泵內有空氣，解決的辦法是清除泵內空氣，對溶劑進行脫氣處理。

②比例閥失效，更換比例閥即可。

③泵密封墊損壞
，更換密封墊即可。

④溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法。

⑤係統檢漏
，找出漏點，密封即可。

⑥梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。

 

 

6.HPLC柱驗收測試時柱壓過高
，請問為什麼？

柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方麵，而且常常並不是柱子本身的問題
，您可按下麵步驟檢查問題的起因：

①拆去保護預柱，看柱壓是否還高
，否則是保護柱的問題
，若柱壓仍高，再檢查。

②把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降
，再檢查。

③將柱子的進出口反過來接在儀器上
，用10倍柱體積的流動相衝洗柱子，（此時不要連接檢測器
，以防固體顆粒進入流動池）。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查。隻用於使用過的柱子。

④更geng換huan柱zhu子zi入ru口kou篩shai板ban
，若ruo柱zhu壓ya下xia降jiang，說shuo明ming您nin的de溶rong劑ji或huo樣yang品pin含han有you顆ke粒li雜za質zhi
，正zheng是shi這zhe些xie雜za質zhi將jiang篩shai板ban堵du塞sai引yin起qi壓ya力li上shang升sheng。若ruo柱zhu壓ya還hai高gao
，請qing與yu廠chang商shang聯lian係xi。一yi般ban情qing況kuang下xia
，在zai進jin樣yang器qi與yu保bao護hu柱zhu之zhi間jian接jie一yi個ge在zai線xian過guo濾lv器qi便bian可ke避bi免mian柱zhu壓ya過guo高gao的de問wen題ti。

 

7.為何出現峰展寬？

 

①樣品體積過大：用流動相配樣
，總的樣品體積小於第一峰的15%。

②在進樣閥中造成峰擴展:進樣前後排出氣泡以降低擴散。

③數據係統采樣速率太慢:設定速率應是每峰大於10點。

④流動相粘度過高:增加柱溫，采用低粘度流動相。

⑤檢測池體積過大:用小體積池，卸下熱交換器。

⑥保留時間過長:等度洗脫時增加強溶劑含量

，也可用梯度洗脫。

⑦柱外體積過大:將連接管徑和連接管長度降至最小。

⑧樣品過載:進小濃度小體積樣品。

 

8.流動相出現氣泡的原因有哪些？

 

①流動相溶液中往往因溶解有氧氣或空氣而形成氣泡。

②液路阻力比較大

，吸液時出現了真空氣泡。

③係統開始工作時未能將流路中的空氣排除幹淨。

④在注入樣品時混入了空氣。

 

9.常用的實驗室脫氣方式還有哪些
？

 

①加熱回流脫氣，脫氣效果最佳
，但無法保持。

 

②氦脫氣，此方法脫氣效果佳
，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價格太貴，所以用的不多。

 

③真空脫氣，效果僅次於氦脫氣
，但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發損失。

 

④超聲脫氣


，隻能脫去約百分之三十的空氣，但在實驗室中最常用。目前還是盡量爭取用在線脫氣，方便且效果好。

 

10.氨基柱在進酸性樣品時，很傷柱子，如使用一段時間後，柱效降低

，峰形改變，如何恢複？

 

答：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液衝洗該柱(衝洗後當然要再用不含堿的流動相洗去多餘氨)，之後再進行分析這類酸性分析物時建議在流動相中略微添加少許氨如0.1％。

 
文章內容來源網絡，轉載僅為分享知識，如有侵權請聯係刪除。