一、定義:
大腸埃希氏菌更習慣稱為大腸杆菌,分類於腸杆菌科,歸屬於埃希氏菌屬,並且大腸杆菌株ATCC 11775是該屬的模式菌種。大腸杆菌的不同菌株間DNA相關性為80%,而與同科的誌賀氏菌屬(除鮑氏誌賀氏菌外)的DNA相關性可達80-87%。與人類疾病有關的大腸杆菌,統稱為致瀉性大腸杆菌(此名稱不易與致病性大腸杆菌相混淆),一般包括五種:即腸毒素性大腸杆菌(ETEC)、致病性大腸杆菌(EPEC)、出血性大腸杆菌(EHEC)、侵襲性大腸杆菌(EIEC)和粘附性大腸杆菌(EAEC)。文獻報道還有幾種,象:凝集性大腸杆菌、即產VT毒素又具有侵襲性的大腸杆菌等,但目前尚未達成統一共識。
二、生物學特性:
基本形態特征:
此菌為兩端鈍圓的短小杆菌,一般大小約0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生長條件不同,個別菌體可呈近似球狀或長絲狀。此菌多單獨存在或成雙,但不呈長鏈狀排列。約有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能運動,但多數菌體隻有1-4根,一般不超過10根,故菌體動力弱;多數菌株生長有比鞭毛細、短、直且數量多的菌毛,有的菌株具有莢膜或微莢膜;不形成芽胞,對普通堿性染料著色良好,革蘭氏染色陰性。
培養特征:
由於此菌合成代謝能力強,在含無機鹽、胺鹽、葡萄糖的普通培養基上生長良好。最適生長溫度為37℃,在42-44℃條件下仍能生長,生長溫度範圍為15-46℃。在普通營養瓊脂上生長表現3種菌落形態:(1)光滑型: 菌落邊緣整齊,表麵有光澤、濕潤、光滑、呈灰色,在生理鹽水中容易分散。(2)粗糙型:菌落扁平、幹澀、邊緣不整齊,易在生理鹽水中自凝。(3)粘液型:常為含有莢膜的菌株。此菌兼性厭氧,在有氧條件下生長良好,最適生長pH為6.8-8.0,所用培養基pH為7.0-7.5,若pH值低於6.0或高於8.0則生長緩慢。
生化反應與血清學反應
大腸杆菌屬於衛生學意義的大腸菌群和糞大腸菌群的範疇,因此,必須符合大腸菌群和糞大腸菌群的有關定義,在檢測大腸菌群、糞大腸菌群的基礎上,可以應用I(吲哚)、M(甲基紅)、Vi(3羥基-2-丁酮)、C(檸檬酸)即IMViC生化試驗對大腸杆菌作進一步鑒定,其IMViC結果為++--或-+--。生化反應是鑒定大腸杆菌的主要方法之一,然而,大腸杆菌之間生化反應的差異非常常見,象:許多菌種非/遲發酵乳糖,但並不說明它們遺傳上有明顯不同,生化反應非典型的大腸杆菌菌株與典型菌株的DNA相關性在85%-100%。附表1為大腸杆菌生化反應特性表。其中H2S、脲酶、阿糖酸、吲哚、ONPG試驗常為首選生化反應,其餘為進一步的生化試驗。大腸杆菌在賴氨酸脫羧酶、粘質酸鹽、醋酸鹽生化試驗中,有一項或多項試驗陽性,且厭氧性生長弱,有動力和吲哚試驗陽性可與誌賀氏菌相鑒別。
大腸杆菌的血清學反應,往往是對經分離、鑒定、確證為大腸杆菌的 進一步分型,常不作為常規方法使用。附表2所(suo)列(lie)主(zhu)要(yao)致(zhi)瀉(xie)性(xing)大(da)腸(chang)杆(gan)菌(jun)的(de)血(xue)清(qing)型(xing)。對(dui)大(da)腸(chang)杆(gan)菌(jun)的(de)分(fen)型(xing)鑒(jian)定(ding)工(gong)作(zuo),基(ji)層(ceng)檢(jian)驗(yan)單(dan)位(wei)若(ruo)有(you)要(yao)求(qiu)時(shi),可(ke)與(yu)各(ge)地(di)所(suo)屬(shu)出(chu)入(ru)境(jing)檢(jian)驗(yan)檢(jian)疫(yi)局(ju)實(shi)驗(yan)室(shi)聯(lian)係(xi),委(wei)托(tuo)進(jin)行(xing)血(xue)清(qing)學(xue)鑒(jian)定(ding)工(gong)作(zuo)。
三、大腸杆菌的抵抗力:
此菌對理化因素的抵抗力,在無芽胞菌中是最強的一種,在室溫可存活數周,在土壤、水中存活數月,耐寒力強,但是在30分鍾內快速冷凍,將37℃降至4℃的過程,可殺死此菌。加熱60℃,30分鍾,此菌可滅活。對漂白粉,酚、甲醛等較敏感,水中1ppb氯可殺死此菌。此菌耐膽鹽,在一定程度上能抵抗煌綠等染料的抑菌作用,在選擇性培養基配製上,常利用此菌這一性質。
四、衛生學意義與流行學
由(you)於(yu)大(da)腸(chang)杆(gan)菌(jun)是(shi)人(ren)及(ji)各(ge)種(zhong)動(dong)物(wu)腸(chang)道(dao)中(zhong)的(de)正(zheng)常(chang)寄(ji)居(ju)菌(jun),常(chang)隨(sui)糞(fen)便(bian)從(cong)人(ren)及(ji)動(dong)物(wu)體(ti)排(pai)出(chu),廣(guang)泛(fan)散(san)播(bo)於(yu)自(zi)然(ran)界(jie),所(suo)以(yi)一(yi)旦(dan)檢(jian)出(chu)大(da)腸(chang)杆(gan)菌(jun),即(ji)意(yi)味(wei)著(zhe)直(zhi)接(jie)或(huo)間(jian)接(jie)地(di)被(bei)糞(fen)便(bian)汙(wu)染(ran),而(er)在(zai)衛(wei)生(sheng)學(xue)上(shang)被(bei)用(yong)於(yu)飲(yin)水(shui),牛(niu)奶(nai)或(huo)食(shi)品(pin)等(deng)的(de)糞(fen)源(yuan)性(xing)汙(wu)染(ran)衛(wei)生(sheng)細(xi)菌(jun)學(xue)指(zhi)標(biao);並且由於大腸杆菌在外界存活時間與一些主要腸道病原菌相近,它的出現也可能預示著某些腸道病原菌(例:沙門氏菌、誌賀氏菌)的存在,因此該細菌是國際上公認的衛生監測指示菌。近來,有些國家在執行HACCP管理中,將大腸杆菌檢測作為微生物汙染狀況的監測指標和HACCP實施效果的評估指標。
致瀉性大腸杆菌是引起人體以腹瀉症狀為主的全球性疾病,其中尤以EPEC、ETEC所占比例為大。附表3是shi我wo國guo部bu分fen省sheng市shi主zhu要yao腹fu瀉xie病bing原yuan體ti檢jian出chu率lv情qing況kuang,盡jin管guan目mu前qian報bao道dao各ge地di主zhu要yao腹fu瀉xie病bing是shi由you誌zhi賀he氏shi菌jun或huo輪lun狀zhuang病bing毒du引yin起qi的de,但dan是shi,多duo年nian來lai,致zhi瀉xie性xing大da腸chang杆gan菌jun引yin起qi的de腹fu瀉xie病bing例li始shi終zhong位wei於yu第di二er位wei,可ke見jian大da腸chang杆gan菌jun腸chang道dao傳chuan染ran的de廣guang泛fan性xing。還hai有you,致zhi瀉xie性xing大da腸chang杆gan菌jun亦yi可ke常chang年nian引yin發fa人ren體ti腹fu瀉xie,以yi夏xia秋qiu季ji為wei高gao峰feng,在zai患huan者zhe感gan染ran住zhu院yuan率lv中zhong,嬰ying幼you兒er占zhan60%以上。近來,EHEC O157:H7為世界衛生組織(WHO)定為新的食源性致病菌,其引發的出血性腸炎的暴發或散發病例,自1983年以來在北美州(美國、加拿大)地區逐年增多,英國、日本亦有爆發和散發病例報道,我國也發現散發病例,尚未有爆發EHEC的報道。附表4為近幾年EHEC的汙染狀況。
五、大腸杆菌檢驗程序圖解:
檢 樣
↓
LST肉湯
↓37℃,48h
↓37℃,48h |
EC肉湯 BGLB肉湯管陽性 (證實大腸菌群)
EC肉湯產氣管為陽性(糞大腸菌群)
查MPN表,報告糞大腸菌群MPN/g
陽性管再培養24h
EMB平板分離
↓ 37℃,24h
LST肉湯 IMViC生化試驗 革蘭氏染色
產酸產氣 ++--/-+-- 無芽胞G-杆菌
-----------------------
大腸杆菌
按EC肉湯產氣管數,查MPN表,報告大腸杆菌MPN/g
說明:
1、由於大部分致瀉性大腸杆菌在6℃條件中可失去活力,故大腸杆菌的定性檢測比定量檢測更適宜。如果確有大腸杆菌定量檢測要求的話,可用MPN法或終點稀釋法進行。
2、基層單位如有大腸杆菌生化鑒定要求或大腸杆菌血清學分型要求,可委托屬地出入境檢驗檢疫局進行檢驗。
3、檢測大腸杆菌的MUG法和膜過濾法,可參閱有關標準說明進行。
4、國標法與FDA方法,在所用培養基、檢驗程序上略有差異,但不影響大腸杆菌檢驗結果的準確性。本章介紹的方法,可詳見SN 0169-92標準。
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