高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證一般有化學指示劑法、留點溫度計法、自製測溫管法和生物指示劑法,每mei種zhong方fang法fa的de原yuan理li都dou是shi相xiang似si的de,主zhu要yao是shi通tong過guo驗yan證zheng滅mie菌jun時shi滅mie菌jun器qi裏li的de溫wen度du能neng否fou達da到dao要yao求qiu。我wo們men可ke以yi根gen據ju自zi己ji實shi驗yan室shi的de具ju體ti情qing況kuang選xuan擇ze其qi中zhong一yi種zhong或huo多duo種zhong方fang法fa進jin行xing驗yan證zheng。
一、化學指示劑法
原理:化學指示劑在一定溫度與作用時間下,會受熱變色或變形,根據這一特點來判斷是否達到需要的滅菌參數。
一般實驗室常用的是3M壓(ya)力(li)滅(mie)菌(jun)指(zhi)示(shi)膠(jiao)帶(dai),這(zhe)種(zhong)指(zhi)示(shi)膠(jiao)帶(dai)是(shi)利(li)用(yong)滅(mie)菌(jun)前(qian)後(hou)膠(jiao)帶(dai)顏(yan)色(se)變(bian)化(hua)來(lai)判(pan)斷(duan)滅(mie)菌(jun)效(xiao)果(guo)。它(ta)是(shi)由(you)熱(re)敏(min)化(hua)學(xue)物(wu)質(zhi)與(yu)顯(xian)色(se)劑(ji)及(ji)漆(qi)輔(fu)料(liao)製(zhi)成(cheng)油(you)墨(mo),並(bing)將(jiang)油(you)墨(mo)以(yi)條(tiao)紋(wen)狀(zhuang)印(yin)製(zhi)在(zai)特(te)製(zhi)的(de)一(yi)麵(mian)膠(jiao)紙(zhi)帶(dai)製(zhi)成(cheng)。指(zhi)示(shi)膠(jiao)帶(dai)可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)粘(zhan)貼(tie)於(yu)包(bao)裹(guo)外(wai),長(chang)度(du)不(bu)低(di)於(yu)5cm,並輕壓膠帶以增加粘性和封包效果;在121℃持續20min或130℃持續4min後,膠帶上印有的斜行的白色指示線條會完全變黑,成為黑色線條;如變色不均勻或不徹底,可認為該包裹不符合滅菌條件。
二、留點溫度計法
原理:留點溫度計法是利用水銀溫度計不回流的特性,其原理跟傳統體溫計相似,可以指示滅菌器在滅菌過程中達到的最高溫度。
驗(yan)證(zheng)時(shi)把(ba)水(shui)銀(yin)溫(wen)度(du)計(ji)放(fang)在(zai)盛(sheng)水(shui)的(de)大(da)三(san)角(jiao)瓶(ping)裏(li),滅(mie)菌(jun)時(shi)把(ba)三(san)角(jiao)瓶(ping)放(fang)在(zai)滅(mie)菌(jun)器(qi)的(de)上(shang)部(bu)和(he)下(xia)部(bu),滅(mie)菌(jun)結(jie)束(shu)後(hou)看(kan)水(shui)銀(yin)溫(wen)度(du)計(ji)的(de)溫(wen)度(du)和(he)要(yao)求(qiu)溫(wen)度(du)是(shi)否(fou)一(yi)致(zhi)。此法隻能驗證溫度,不能指示滅菌時間是否達到要求,因此是滅菌器驗證的最低標準。
三、自製測溫管法
原理:liyongyixiehuaxueyaopinshoureronghuahouzailengque,jingtidewaixingbutongdetexing,bahuaxueyaopinmifengzaixiaoboliguannei,miejunshifangzaimiejunqili,miejunwanhouguanchajingtidexingzhuang,jiukeyipanduanwendushifoudabiao。
常用的試劑是苯甲酸,苯甲酸的熔點為121-123℃,跟gen我wo們men要yao求qiu的de滅mie菌jun器qi的de滅mie菌jun溫wen度du基ji本ben吻wen合he,因yin此ci滅mie菌jun時shi把ba固gu體ti苯ben甲jia酸suan密mi封feng在zai小xiao玻bo璃li管guan內nei放fang進jin滅mie菌jun器qi,滅mie菌jun結jie束shu就jiu可ke以yi觀guan察cha苯ben甲jia酸suan的de狀zhuang態tai來lai驗yan證zheng滅mie菌jun器qi是shi否fou達da到dao了le要yao求qiu溫wen度du。這zhe種zhong方fang法fa的de局ju限xian跟gen留liu點dian溫wen度du計ji法fa相xiang同tong,也ye隻能指示滅菌時的溫度,對滅菌時間是否達到要求無法判斷。
四、生物指示劑法
原理:liyongfeizhibingxingdeshirezhifangganjundeyabaozuoweizhishijun,laicedingrelimiejundexiaoguo。shirezhifangganjundeyabaoduiredekangxingjiaoqiang,qinairenengliyubingyuanweishengwuroudusuojunyabaoxiangsi,yiciweizhishijun,yanzhengmiejunqinengfoudadaomiejunyaoqiu。
生物指示劑分為三種:芽孢懸液、芽胞菌片、菌片和培養基混合指示管。一般放在滅菌容器的5個點:下層的前、中、後和上層、中層的中央點。滅菌後取指示劑接種到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白腖水中,55-60℃培養2-7天,若培養基澄清、顏色沒有變化即說明芽孢被殺死,滅菌器滅菌效果良好;如果培養基黃色渾濁,說明芽孢未被殺滅,滅菌器滅菌效果不合格。芽孢懸液和芽孢菌片的驗證方法均是如此。
目(mu)前(qian)實(shi)驗(yan)室(shi)還(hai)常(chang)用(yong)商(shang)品(pin)化(hua)的(de)生(sheng)物(wu)指(zhi)示(shi)管(guan),其(qi)原(yuan)理(li)與(yu)芽(ya)孢(bao)懸(xuan)液(ye)和(he)芽(ya)胞(bao)菌(jun)片(pian)相(xiang)同(tong),指(zhi)示(shi)管(guan)中(zhong)有(you)嗜(shi)熱(re)脂(zhi)肪(fang)芽(ya)孢(bao)杆(gan)菌(jun)芽(ya)孢(bao)和(he)培(pei)養(yang)液(ye)玻(bo)璃(li)小(xiao)管(guan),將(jiang)指(zhi)示(shi)管(guan)放(fang)在(zai)滅(mie)菌(jun)容(rong)器(qi)內(nei)的(de)各(ge)個(ge)點(dian)上(shang),高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)後(hou),將(jiang)管(guan)中(zhong)盛(sheng)培(pei)養(yang)液(ye)的(de)玻(bo)璃(li)管(guan)擠(ji)碎(sui),培(pei)養(yang)液(ye)從(cong)內(nei)部(bu)的(de)小(xiao)管(guan)中(zhong)被(bei)放(fang)出(chu),放(fang)入(ru)56℃培養箱中培養,同時做陽性對照。若是滅菌器滅菌效果不合格,指示管內的芽孢複活後生長會改變肉湯的顏色是肉湯變為黃色;若是滅菌器滅菌效果良好則管內芽孢被滅活不再生長,肉湯仍舊是原來的紫色。
duiyumiejunqidexiaoguoyanzheng,muqianbingmeiyouxiangguanbiaozhunyangedeyaoqiuyanzhengdepinci,danshishiyanshiyingdangzixingzhidingyanzhengpinciguiding,bingyangeanzhaoyaoqiujinxing。congcaozuoxingheyanzhengjielunlianggefangmianchufa,xiaobiantuijianshiyongzhishijiaodaiheshengwuzhishiguan,yinweizheliangzhongfangfacaozuojiandan,keyiduimiejunxiaoguojinxingquanmiandeyanzheng。
附:滅菌時的注意事項(一些進口的全自動滅菌鍋可不用考慮排氣)
使用高壓蒸氣滅菌器時,首先應注意在開放蒸氣的同時,排除滅菌器內的冷空氣。必須將器內冷空氣全部排除後,才cai可ke關guan閉bi排pai氣qi孔kong。假jia如ru滅mie菌jun器qi內nei仍reng存cun留liu有you部bu分fen空kong氣qi時shi,則ze壓ya力li表biao上shang雖sui已yi達da到dao了le某mou一yi壓ya力li值zhi,但dan器qi內nei之zhi溫wen度du仍reng未wei達da到dao相xiang應ying之zhi度du數shu。存cun留liu的de空kong氣qi越yue多duo,則ze二er者zhe相xiang差cha也ye越yue大da,器qi內nei溫wen度du不bu足zu,滅mie菌jun則ze不bu徹che底di。(很多人在做發酵法培養基滅菌時會出現小導管中有氣泡,不妨也可以嚐試多排出滅菌器內的冷空氣,有奇效哦)。
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