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01.保留時間發生漂移或快速變化原因？
關於漂移問題：
①溫度控製不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定；
②流動相發生變化，解決辦法是防止流動相發生蒸發、反應等；
③柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡。
關於快速變化問題：
①流速發生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩定；
②泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出；
③流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控製室內進行適當混合。
02.出現拖尾或雙峰的原因？
①篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向衝洗柱子，替換篩板或更換柱子；
②存在幹擾峰，解決辦法為使用較長的柱子；改換流動相或更換選擇性好的柱子；
③可能柱超載，減少進樣量。
03.HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
①樣品量不足，解決辦法為增加樣品量；
②樣品未從柱子中流出。可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子；
③樣品與檢測器不匹配。根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器 ；
④檢測器衰減太多。調整衰減即可；
⑤檢測器時間常數太大。解決辦法為降低時間參數；
⑥檢測器池窗汙染。解決辦法為清洗池窗；
⑦檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣；
⑧記錄儀測壓範圍不當。調整電壓範圍即可；
⑨流動相流量不合適。調整流速即可；
⑩檢測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。
04.做HPLC分析時，柱壓不穩定，原因是什麼？
①泵內有空氣，解決的辦法是清除泵內空氣，對溶劑進行脫氣處理；
②比例閥失效，更換比例閥即可；
③泵密封墊損壞，更換密封墊即可；
④溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法；
⑤係統檢漏，找出漏點，密封即可；
⑥梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。
05.更換了另一種牌號ODS柱，但保留時間不能重現，為什麼？
這是因為被分析物可能具有形成氫鍵的能力。盡管過去幾年來，填料的製造技術有了極大的提高，但不同的廠商的ODS填料表麵矽醇基的濃度不同。正是這些矽醇基可能與樣品發生相互作用。因此，同一被分析物中的各組分在不同牌號的ODS柱上的相對保留時間就可能不同。在流動相中加入少量競爭物， 如三乙基胺（TEA），jianghuishiguichunjidechengjiannenglibaohe，congernengbaozhengbutongpaihaozhuzishangdexiangduibaoliushijianjuyoujiaohaodezhongxianxing。rufenliqingkuangkeyi，xitongwending，dadaoxitongshiyongxingyaoqiu，jiububibaoliushijiandezhongxian。
06.HPLC柱驗收測試時柱壓過高為什麼？
柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方麵，而且常常並不是柱子本身的問題，您可按下麵步驟檢查問題的起因。
①拆去保護預柱，看柱壓是否還高，否則是保 護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；
②把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降， 否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；
③將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相衝洗柱子，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動池）。這時，如果柱壓仍不下 降，再檢查；隻用於使用過的柱子。
④更geng換huan柱zhu子zi入ru口kou篩shai板ban，若ruo柱zhu壓ya下xia降jiang，說shuo明ming您nin的de溶rong劑ji或huo樣yang品pin含han有you顆ke粒li雜za質zhi，正zheng是shi這zhe些xie雜za質zhi將jiang篩shai板ban堵du塞sai引yin起qi壓ya力li上shang升sheng。若ruo柱zhu壓ya還hai高gao，請qing與yu廠chang商shang聯lian係xi。一yi般ban情qing況kuang下xia，在zai進jin樣yang器qi與yu保bao護hu柱zhu之zhi間jian接jie一yi個ge在zai線xian過guo濾lv器qi便bian可ke避bi免mian柱zhu壓ya過guo高gao的de問wen題ti，SGE提供的Rheodyne 7315型，過濾器就是解決這一問題的最佳選擇。
07.色譜柱中的流動相會排幹嗎？
不少做色譜分離試驗的人遇到過這樣的情形：不慎未及時補充流動相，泵將溶劑瓶中的流動相吸幹了，HPLC係統由此而停止工作了。如此情況是否會損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動相都排 幹gan了le？色se譜pu柱zhu還hai能neng使shi用yong嗎ma？事shi實shi上shang，如ru果guo泵beng將jiang溶rong劑ji瓶ping中zhong的de流liu動dong相xiang吸xi幹gan，並bing不bu會hui造zao成cheng色se譜pu柱zhu的de損sun壞huai。即ji使shi泵beng中zhong充chong滿man了le空kong氣qi，泵beng也ye不bu會hui將jiang空kong氣qi排pai入ru色se譜pu柱zhu。因yin為wei泵beng隻zhi能neng輸shu送song液ye體ti，而er不bu能neng輸shu送song空kong氣qi。
相xiang比bi之zhi下xia，另ling一yi個ge更geng可ke能neng發fa生sheng的de情qing況kuang是shi忘wang記ji蓋gai上shang色se譜pu柱zhu兩liang端duan的de密mi封feng蓋gai或huo蓋gai子zi太tai鬆song而er使shi色se譜pu柱zhu變bian幹gan。同tong樣yang，整zheng個ge色se譜pu柱zhu幹gan涸he的de情qing況kuang不bu太tai容rong易yi發fa生sheng，多duo半ban可ke能neng隻zhi是shi色se譜pu柱zhu兩liang端duan的de幾ji個ge毫hao米mi變bian幹gan了le，因yin揮hui發fa掉diao所suo有you溶rong劑ji是shi色se譜pu柱zhu變bian幹gan需xu要yao相xiang當dang長chang的de時shi間jian。即ji使shi色se譜pu柱zhu真zhen的de變bian幹gan了le，也ye不bu一yi定ding就jiu不bu可ke救jiu藥yao了le。可ke以yi嚐chang試shi用yong一yi種zhong完wan全quan脫tuo氣qi的de、表麵張力低的溶劑（如經氦氣脫氣的甲醇）衝洗色譜柱以除去氣體。較低的表麵張力有助於浸潤填料表麵；已脫氣的溶劑應該能夠溶解並去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）衝一個小時或更多的時間被徹底浸潤，恢複到正常狀態。
08.基線漂移原因及解決方法
1.原因分析
①柱溫波動。（即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。）
②流動相不均勻。（流動相條件變化引起的基線漂移大於溫度導致的漂移。）
③流通池被汙染或有氣體
④檢測器出口阻塞。（高壓造成流通池窗口破裂，產生噪音基線）
⑤流動相配比不當或流速變化
⑥柱平衡慢，特別是流動相發生變化時
⑦流動相汙染、變質或由低品質溶劑配成
⑧樣品中有強保留的物質（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現出一個逐步升高的基線。
⑨使用循環溶劑，不提倡。未調整檢測器。
⑩檢測器沒有設定在最大吸收波長處。
2.解決方法
①控製好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器
②使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進行脫氣，使用中使用在線脫氣或氦氣脫氣。
③用甲醇或其他強極性溶劑衝洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸）
④取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。
⑤更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。
⑥用中等強度的溶劑進行衝洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進行衝洗。使用離子對試劑、緩衝鹽更應注意平衡柱。
⑦檢查流動相的組成。使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑
⑧改變分析條件。使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑衝洗柱子。
⑨重新設定基線。使用新的流動相。
⑩將波長調整至最大吸收波長處。重選檢測波長。
09.規則的基線噪音產生的原因？
1、產生原因
①在流動相、檢測器或泵中有空氣（尖銳峰）
②漏液
③流動相混合不完全
④溫度影響（柱溫過高，檢測器未加熱）
⑤在同一條線上有其他電子設備（偶然噪聲）
⑥泵振動
2、解決方法
①流動相脫氣。衝洗係統以除去檢測器或泵中的空氣。
②檢查管路接頭是否鬆動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。
③用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑
④減少差異或加上熱交換器
⑤斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查幹擾是否來自於外部，加以更正。采用精密級穩壓電源。
⑥在係統中加入脈衝阻尼器。
10.不規則的基線噪音產生的原因？
1、產生原因
①漏液
②流動相汙染、變質或由低質溶劑配成
③流動相各溶劑不相溶
④檢測器/記錄儀電子元件的問題
⑤係統內有氣泡
⑥檢測器內有氣泡
⑦流通池汙染（即使是極少的汙染物也會產生噪音。）
⑧檢測器燈能量不足
⑨色譜柱填料流失或阻塞
⑩流動相混合不均勻或混合器工作不正常
2、解決方法
①檢查接頭是否鬆動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液
②檢查流動相的組成
③選擇互溶的流動相
④斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查並更正
⑤用強極性溶液清洗係統
⑥清洗檢測器，在檢測器後麵安裝背景壓力調節器
⑦用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池
⑧更換燈
⑨更換色譜柱
⑩維修或更換混合器，在流動相不走梯度時，建議不使用泵的混合裝置
11.保留時間漂移的故障排除
保留時間不重現有兩種不同的情況：既ji保bao留liu時shi間jian漂piao移yi和he保bao留liu時shi間jian波bo動dong。前qian者zhe是shi指zhi保bao留liu時shi間jian僅jin沿yan單dan方fang向xiang發fa生sheng變bian化hua，而er後hou者zhe指zhi保bao留liu時shi間jian無wu固gu定ding規gui律lv的de波bo動dong。將jiang此ci兩liang種zhong情qing況kuang區qu分fen開kai來lai對dui找zhao到dao問wen題ti的de原yuan因yin往wang往wang很hen有you幫bang助zhu。如ru，保bao留liu時shi間jian的de漂piao移yi往wang往wang由you柱zhu老lao化hua引yin起qi；而柱老化不可能引起保留時間的無規律波動。事實上，保留時間漂移的多半原因是不同機理的色譜柱老化，如固定相流失（例如通過水解），色譜柱汙染（由樣品或流動相所致）等。
保留時間漂移的幾種最常見的原因如下：
一、色譜柱平衡
如果我們觀察到保留時間漂移，首先應考慮色譜柱是否已用流動相完全平衡。通常平衡需要10-20個柱體積的流動相，但如果在流動相中加入少量添加劑（如離子對試劑）則ze需xu要yao相xiang當dang長chang的de時shi間jian來lai平ping衡heng色se譜pu柱zhu。流liu動dong相xiang汙wu染ran也ye可ke能neng是shi原yuan因yin之zhi一yi。溶rong於yu流liu動dong相xiang中zhong的de少shao量liang汙wu染ran物wu可ke能neng慢man慢man富fu集ji到dao色se譜pu柱zhu上shang，從cong而er造zao成cheng保bao留liu時shi間jian的de漂piao移yi。應ying注zhu意yi：水是很容易汙染的流動相成分。
二、固定相穩定性
固定相的穩定性都是有限的，即使在推薦的pH範圍內使用，固定相也會慢慢水解。例如，矽膠基質在pH4時水解穩定性最好。水解速度與流動相類型和 配體有關。雙官能團配體和三官能團配體比單官能團配體的鍵合相要穩定；長鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩定；烷wan基ji鍵jian合he相xiang比bi氰qing基ji鍵jian合he相xiang穩wen定ding的de多duo。經jing常chang清qing洗xi色se譜pu柱zhu亦yi會hui加jia速su色se譜pu柱zhu固gu定ding相xiang的de水shui解jie。其qi他ta矽gui膠jiao基ji質zhi鍵jian合he相xiang在zai水shui溶rong液ye環huan境jing中zhong也ye可ke以yi發fa水shui解jie，如ru氨an基ji鍵jian合he相xiang等deng。
三、色譜柱汙染
保留時間漂移的另一個常見原因是色譜柱汙染。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器，它可以過濾並吸附流動相攜帶的任何物質。汙染源可以是：流動相本身，流動相容器，連接管、泵、進樣器和儀器密封墊，以及樣品等。通常通過實驗可判斷汙染的來源。
樣(yang)品(pin)中(zhong)如(ru)果(guo)存(cun)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)上(shang)保(bao)留(liu)很(hen)強(qiang)的(de)組(zu)分(fen)，就(jiu)可(ke)能(neng)是(shi)使(shi)保(bao)留(liu)時(shi)間(jian)漂(piao)移(yi)的(de)潛(qian)在(zai)根(gen)源(yuan)。這(zhe)些(xie)根(gen)源(yuan)通(tong)常(chang)是(shi)樣(yang)品(pin)基(ji)質(zhi)。避(bi)免(mian)色(se)譜(pu)柱(zhu)汙(wu)染(ran)最(zui)簡(jian)單(dan)的(de)方(fang)法(fa)是(shi)防(fang)患(huan)於(yu)未(wei)然(ran)。通(tong)常(chang)使(shi)用(yong)在(zai)給(gei)定(ding)色(se)譜(pu)條(tiao)件(jian)下(xia)的(de)強(qiang)溶(rong)劑(ji)，但(dan)並(bing)非(fei)所(suo)有(you)汙(wu)染(ran)物(wu)都(dou)可(ke)以(yi)在(zai)流(liu)動(dong)相(xiang)中(zhong)溶(rong)解(jie)。使(shi)用(yong)保(bao)護(hu)柱(zhu)是(shi)個(ge)非(fei)常(chang)有(you)效(xiao)的(de)方(fang)法(fa)。反(fan)衝(chong)色(se)譜(pu)柱(zhu)僅(jin)是(shi)不(bu)得(de)已(yi)時(shi)采(cai)用(yong)的(de)辦(ban)法(fa)。
四、流動相組成
流動相組成的緩慢變化也是保留時間漂移的常見原因。如流動相中易揮發組分的揮發及循環使用流動相等。
五、疏水坍塌
當小孔徑、端基封口良好的反相填料色譜柱使用接近100%的(de)水(shui)為(wei)流(liu)動(dong)相(xiang)時(shi)，有(you)時(shi)會(hui)發(fa)生(sheng)分(fen)離(li)突(tu)然(ran)喪(sang)失(shi)及(ji)被(bei)分(fen)析(xi)物(wu)質(zhi)保(bao)留(liu)明(ming)顯(xian)降(jiang)低(di)或(huo)完(wan)全(quan)不(bu)保(bao)留(liu)的(de)現(xian)象(xiang)，這(zhe)就(jiu)是(shi)疏(shu)水(shui)坍(tan)塌(ta)。此(ci)現(xian)象(xiang)是(shi)由(you)流(liu)動(dong)相(xiang)不(bu)浸(jin)潤(run)固(gu)定(ding)相(xiang)表(biao)麵(mian)而(er)致(zhi)。挽(wan)救(jiu)的(de)辦(ban)法(fa)實(shi)現(xian)用(yong)含(han)大(da)量(liang)有(you)機(ji)組(zu)分(fen)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)浸(jin)潤(run)固(gu)定(ding)相(xiang)，再(zai)用(yong)高(gao)水(shui)含(han)量(liang)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)進(jin)行(xing)平(ping)衡(heng)。色(se)譜(pu)柱(zhu)長(chang)期(qi)儲(chu)存(cun)也(ye)會(hui)發(fa)生(sheng)此(ci)現(xian)象(xiang)。使(shi)用(yong)內(nei)嵌(qian)極(ji)性(xing)基(ji)團(tuan)的(de)反(fan)相(xiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)或(huo)非(fei)端(duan)基(ji)封(feng)口(kou)的(de)色(se)譜(pu)柱(zhu)也(ye)可(ke)避(bi)免(mian)發(fa)生(sheng)坍(tan)塌(ta)。
12.為何出現肩峰或分叉？
①樣品體積過大－－用流動相配樣,總的樣品體積小於第一峰的15%；
②樣品溶劑過強－－采用較弱的樣品溶劑；
③柱塌陷或形成短路通道－－更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件；
④柱內燒結不鏽鋼失效－－更換燒結不鏽鋼,加在線過濾器,過濾樣品；
⑤進樣器損壞－－更換進樣器轉子。
13.為何出現鬼峰？
①進樣閥殘餘峰－－每次用後用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗；
②樣品中未知物－－處理樣品；
③柱未平衡－－重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑（尤其是離子對色譜）；
④三氟乙酸（TFA）氧化－－每天新配,用抗氧化劑；
⑤水汙染（反相）－－通過變化平衡時間檢查水質量，用HPLC級的水。
14.為何出現峰拖尾？
①柱超載――降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相；
②峰幹擾――清潔樣品,調整流動相；
③矽羥基作用――加三乙胺,用堿致鈍化柱,增加緩衝液或鹽的濃度降低流動相PH值,純化樣品；
④柱內燒結不鏽鋼失效――更換燒結不鏽鋼,加在線過濾器,過濾樣品；
⑤柱塌陷或形成短路通道――更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件；
⑥死體積或柱外體積過大――連接點降至最低,對所有連接點作合適調整,盡可能采用細內徑的連接管；
⑦柱效下降――用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱。
15.除了流速外，還有哪些因素能引起壓力改變？
改變流動相組成和溫度；改變柱長、柱內徑和填料粒度；柱突然阻塞壓力升高（正常情況下其它條件不變柱壓都是逐漸升高的）。
16.什麼是強溶劑、弱溶劑？
改gai變bian流liu動dong相xiang的de組zu成cheng或huo溶rong劑ji溶rong劑ji強qiang度du就jiu可ke以yi改gai變bian峰feng容rong量liang因yin子zi和he保bao留liu時shi間jian。在zai一yi定ding條tiao件jian下xia，減jian少shao保bao留liu時shi間jian或huo縮suo短duan分fen析xi時shi間jian的de溶rong劑ji為wei強qiang溶rong劑ji，增zeng加jia保bao留liu時shi間jian或huo延yan長chang分fen析xi時shi間jian的de溶rong劑ji為wei弱ruo溶rong劑ji。
17.怎樣才會使峰位發生重排？
在分析多組分樣品時，僅改變流動相的強度（組成百分比）而不改變其組成，一般僅僅改變所有組分的保留時間，不會發生峰位的重排。
下列條件改變可能發生峰位重排：流動相中換了強溶劑；PH值的改變；柱填料的改變；柱溫的改變；流動相的組成改變（如加入離子對試劑三乙基胺等）。
18.除了在線脫氣，常用的實驗室脫氣方式還有哪些？
加熱回流脫氣，脫氣效果最佳，但無法保持；氦脫氣，此方法脫氣效果佳，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價格太貴，所以用的不多；真空脫氣，效果僅次於氦脫氣，但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發損失；超聲脫氣，隻能脫去約百分之三十的空氣，但在實驗室中最常用。目前還是盡量爭取用在線脫氣，方便且效果好。
19.評價一個色譜柱的最基本指標有那些？
評價一根色譜柱的基本指標是：塔板數、峰不對稱因子、柱壓降、適用範圍和鍵合相濃度以及峰容量。
20.為何出現峰展寬？
①樣品體積過大－－用流動相配樣,總的樣品體積小於第一峰的15%；
②在進樣閥中造成峰擴展－－進樣前後排出氣泡以降低擴散；
③數據係統采樣速率太慢－－設定速率應是每峰大於10點；
④檢測器時間常數過大－－設定時間常數為感興趣第一峰半寬的10%；
⑤流動相粘度過高－－增加柱溫,采用低粘度流動相；
⑥檢測池體積過大－－用小體積池,卸下熱交換器；
⑦保留時間過長－－等度洗脫時增加強溶劑含量,也可用梯度洗脫；
⑧柱外體積過大－－將連接管徑和連接管長度降至最小；⑨樣品過載－－進小濃度小體積樣品 。
21.色譜雙峰產生的可能及判斷和處理
HPLC分析中，在色譜柱正常，樣品靈敏度足夠，分析方法合適，色譜峰在出峰時間較短的條件下（不包括梯度），fengxingyingduichengerjianrui。danshi，zaiduiyangpinlejiechengdubugou，fangfabutuo，yangpinchulifangfajijinyangfangshibuhelixia，huichuxiangezhongyixiangbudaodewenti，erduisepufengnanyizuochuhelidejieshi，youqiduiyuxinshougengshiruci。 色譜雙峰指的是明是一種物質，但在色譜圖中出現雙峰，而表明含二種物質。出現這種情況分為四種原因。
1、色譜柱
如果你分析樣品時發現每個色譜峰都雙峰出現 （出峰越快，雙峰的可能性會減少），尤其采用單一純物質時，可以肯定色譜柱出問題－柱(zhu)頭(tou)受(shou)損(sun)或(huo)柱(zhu)頭(tou)固(gu)定(ding)相(xiang)變(bian)髒(zang)或(huo)流(liu)失(shi)。如(ru)果(guo)進(jin)樣(yang)量(liang)少(shao)，原(yuan)來(lai)色(se)譜(pu)柱(zhu)正(zheng)常(chang)，色(se)譜(pu)峰(feng)的(de)形(xing)狀(zhuang)多(duo)為(wei)一(yi)大(da)峰(feng)帶(dai)一(yi)小(xiao)峰(feng)，不(bu)一(yi)定(ding)拖(tuo)尾(wei)，這(zhe)一(yi)般(ban)應(ying)是(shi)柱(zhu)頭(tou)受(shou)堵(du)，將(jiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)反(fan)過(guo)來(lai)接(jie)，用(yong)流(liu)動(dong)相(xiang)衝(chong)洗(xi)或(huo)酸(suan)洗(xi)或(huo)其(qi)它(ta)溶(rong)劑(ji)，將(jiang)堵(du)在(zai)柱(zhu)頭(tou)的(de)殘(can)留(liu)物(wu)衝(chong)掉(diao)，再(zai)反(fan)過(guo)來(lai)，一(yi)般(ban)情(qing)況(kuang)下(xia)就(jiu)行(xing)了(le)。當(dang)然(ran)不(bu)反(fan)衝(chong)，正(zheng)衝(chong)有(you)時(shi)也(ye)會(hui)正(zheng)常(chang)的(de)。如(ru)果(guo)峰(feng)拖(tuo)尾(wei)，雙(shuang)峰(feng)強(qiang)弱(ruo)相(xiang)差(cha)不(bu)大(da)，柱(zhu)頭(tou)固(gu)定(ding)相(xiang)變(bian)髒(zang)或(huo)流(liu)失(shi)可(ke)能(neng)性(xing)更(geng)大(da)，這(zhe)是(shi)可(ke)以(yi)將(jiang)進(jin)樣(yang)那(na)頭(tou)擰(ning)開(kai)，將(jiang)微(wei)孔(kong)濾(lv)片(pian)超(chao)聲(sheng)，柱(zhu)頭(tou)刮(gua)去(qu)一(yi)部(bu)分(fen)填(tian)料(liao)，重(zhong)新(xin)填(tian)上(shang)新(xin)填(tian)料(liao)擰(ning)緊(jin)，不(bu)過(guo)這(zhe)種(zhong)活(huo)，需(xu)要(yao)一(yi)定(ding)技(ji)術(shu)，同(tong)時(shi)不(bu)能(neng)老(lao)幹(gan)那(na)種(zhong)事(shi)，否(fou)則(ze)用(yong)不(bu)了(le)幾(ji)次(ci)，色(se)譜(pu)柱(zhu)就(jiu)會(hui)應(ying)柱(zhu)效(xiao)很(hen)低(di)而(er)報(bao)廢(fei)。
2、溶劑極性及進樣量
許多HPLC分析者對此可能不以為然，一般的 HPLC的書籍和文獻都不會提到這方麵的內容，而這確是雙峰產生的一個很重要的原因。目前HPLC分析 多為反相色譜，流動相多為甲醇、乙腈、水shui，加jia各ge種zhong添tian加jia劑ji以yi改gai善shan分fen離li性xing能neng。樣yang品pin一yi般ban用yong與yu流liu動dong相xiang相xiang溶rong的de溶rong劑ji溶rong解jie。最zui佳jia的de溶rong解jie方fang法fa是shi用yong流liu動dong相xiang溶rong解jie，但dan是shi很hen多duo情qing況kuang是shi不bu一yi致zhi的de。當dang用yong溶rong劑ji極ji性xing強qiang度du大da的de試shi劑ji，如ru 純甲醇、純乙腈，純乙醇，而分析體係中以水為主，樣品進樣量大，如定量管為20ul，此條件下完全可以肯定，單一的純物質出雙峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一樣），且拖尾，保留時間會提前（相對進樣量少而言），將(jiang)進(jin)樣(yang)量(liang)減(jian)少(shao)一(yi)半(ban)以(yi)上(shang)，峰(feng)型(xing)將(jiang)變(bian)為(wei)正(zheng)常(chang)。這(zhe)是(shi)樣(yang)品(pin)的(de)溶(rong)劑(ji)與(yu)流(liu)動(dong)相(xiang)極(ji)性(xing)相(xiang)差(cha)太(tai)大(da)，而(er)流(liu)動(dong)相(xiang)來(lai)不(bu)及(ji)將(jiang)其(qi)稀(xi)釋(shi)達(da)到(dao)平(ping)衡(heng)造(zao)成(cheng)的(de)。上(shang)麵(mian)提(ti)到(dao)進(jin)樣(yang)量(liang)造(zao)成(cheng)雙(shuang)峰(feng)的(de)一(yi)個(ge)原(yuan)因(yin)，另(ling)一(yi)個(ge)原(yuan)因(yin)是(shi)，進(jin)樣(yang)量(liang)不(bu)一(yi)定(ding)大(da)，但(dan)絕(jue)對(dui)量(liang)很(hen)大(da)，色(se)譜(pu)圖(tu)上(shang)的(de)雙(shuang)峰(feng)緊(jin)靠(kao)在(zai)一(yi)起(qi)，基(ji)本(ben)上(shang)齊(qi)高(gao)，不(bu)拖(tuo)尾(wei)（如果出峰很快，也可能是色譜柱問題）。將樣品稀釋再進樣就可以了，這是由於進樣量過大，色譜柱過載造成的。
3、樣品的特性
有(you)些(xie)樣(yang)品(pin)由(you)於(yu)其(qi)化(hua)學(xue)結(jie)構(gou)的(de)特(te)點(dian)，存(cun)在(zai)互(hu)變(bian)異(yi)構(gou)現(xian)象(xiang)，而(er)這(zhe)種(zhong)互(hu)變(bian)異(yi)構(gou)體(ti)無(wu)法(fa)分(fen)開(kai)，而(er)是(shi)以(yi)一(yi)個(ge)動(dong)態(tai)平(ping)衡(heng)存(cun)在(zai)。在(zai)色(se)譜(pu)分(fen)析(xi)時(shi)，在(zai)一(yi)個(ge)特(te)定(ding)的(de)條(tiao)件(jian)下(xia)，一(yi)種(zhong)物(wu)質(zhi)將(jiang)出(chu)現(xian)雙(shuang)峰(feng)，雙(shuang)峰(feng)靠(kao)的(de)很(hen)近(jin)，基(ji)本(ben)齊(qi)高(gao)，不(bu)拖(tuo)尾(wei)，條(tiao)件(jian)稍(shao)一(yi)變(bian)化(hua)，尤(you)其(qi)pH，雙峰現象將消失，如紅黴素等。有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰，但在LC－MS下，用質譜檢測器，其質譜的總離子流圖上較明顯，例如我分析過的農藥啶蟲眯（吡蟲清）。
4、參數
記錄的參數一般都內定的，不必修改，但GC和HPLC的參數是不完全一致的，例如C－R3A數據記錄儀上的一般記錄時間間隔GC為2ms，HPLC為5ms，如果記錄間隔時間縮短，一個峰將變為二個峰或更多。
22.為什麼在實驗過程中有時會出現倒峰？
所用的流動相在檢測波長下有吸收，而進在此波長下沒有吸收或吸收低於流動相的溶液，在流動相中會出現洞穴，通過柱後出現倒峰。
23.為何會出現“胖”峰和平頭峰？怎樣避免？
用比流動相強度大的大體積樣品進樣，通常會損害色譜圖的質量，而出現“胖”峰和平頭峰。應遵循下列規則選用溶劑溶解樣品：
A.最好用流動相溶解樣品進樣。
B.用yong大da體ti積ji弱ruo溶rong劑ji溶rong解jie樣yang品pin，如ru反fan相xiang色se譜pu中zhong用yong水shui溶rong解jie樣yang品pin進jin樣yang，主zhu要yao缺que點dian是shi每mei次ci進jin樣yang後hou在zai色se譜pu圖tu的de開kai頭tou出chu現xian大da的de負fu峰feng，有you時shi還hai波bo及ji到dao樣yang品pin峰feng。
C.需要時用強溶劑溶解進樣。
24.前延峰的發生及處理？
因柱溫問題很易引起前延峰，有些樣品在常溫下 fenlikejianqianyanfeng，tigaowenduhouqianyanfengdexianxiangxiaoshi。zailiziduisepuzhong，qianyanfengdelingyigeyuanyinshiyongfeiliudongxiangzuoyangpinrongji。yincizailiziduisepuzhongyaoqiujinyongliudongxiangrongjieyangpin，erqiejinyangliangbuyaotaida，fouzehuidaozhiqianyanfenghuoqitawenti。zaiRP-HPLC中樣品溶液的強度大於流動相引起前延峰。增加流動相的強度，減少樣品溶液的強 度，在離子對色譜中增加離子強度，可以克服前延峰的效應。此外使用流動相溶解樣品是解決的最簡單實用的方法。
25.如何簡單判斷比例閥是否內漏？
設定泵使用一個單獨通路（A），打開Purge閥，流速5ml/min，提起其他溶劑瓶內的溶劑過濾頭直至離開液麵，觀察這些通路（B、C、D）內的溶劑是否隨著流動，正常時均不應流動。
26.峰變寬的原因？
A.在使用過程中柱本身退化，逐漸降低柱效。
B.柱外峰寬效應。一根很好的專用柱用於另一液相色譜係統引起塔板數降低，說明新係統有很大的柱外峰寬效應。
C.化學效應，多數是流動相和固定相相互作用所致，改變流動相可使寬峰有所改善。
27.柱平衡慢的常見原因有哪些？
柱平衡慢的常見原因是，組分在舊的或新的流動相中對柱吸附強，或者在新的流動相中濃度小甚至為零。A流動相含有胺改良劑；B流動相含有離子對試劑；矽膠柱；流(liu)動(dong)相(xiang)中(zhong)有(you)四(si)氫(qing)呋(fu)喃(nan)。可(ke)考(kao)慮(lv)采(cai)用(yong)專(zhuan)用(yong)柱(zhu)用(yong)於(yu)特(te)殊(shu)的(de)方(fang)法(fa)，不(bu)用(yong)時(shi)將(jiang)柱(zhu)折(zhe)下(xia)來(lai)，注(zhu)滿(man)適(shi)當(dang)的(de)溶(rong)劑(ji)或(huo)流(liu)動(dong)相(xiang)，密(mi)封(feng)保(bao)管(guan)，不(bu)再(zai)作(zuo)其(qi)它(ta)的(de)分(fen)析(xi)。
28.對內標物的要求有哪些？
A.內標物的結構或理化性質應與被分析組分相 似或相近；
B.內標物的保留值應稍大於或小於被分析物的保留，不能相差過大；
C.內標物的峰要與所有被分析物的峰有良好的分離度（R大於1.5），不能讓內標物成了幹擾物；
D.無結構相似的內標物，可用保留相近的內標物；
E.儀器對分析物的響應與內標基本一致，出峰麵積大小不能相差懸殊。
29.什麼是HPLC的“無限直徑效應”？
在HPLCfenxizhongyouyushiyonglegaoxiaoweiligudingxiangjigaoyaliudongxiang，yangpinyizhusaishizhurusepuzhuhou，yinzhudezulida，yangpinfenzizaizhuzhongdefenzikuosanhenxiao，zhizhitacongsepuzhuliuchuyeweiyusepuzhuneibijiechu，yineryinqidesepufengxingkuozhanhenxiao，nengbaochigaozhuxiao。
30.如何評價一台檢測器？
A.噪聲：通常噪聲是指由儀器的電氣元件、溫度波動、電壓的線性脈衝以及其他非溶質作用產生的高頻噪聲和基線的無規則波動；
B.基線飄移：漂移是基線的一種向上或向下的緩慢移動，可在較長時間（0.5~1h）內觀察到。它可掩蔽噪聲和小峰。漂移與整個液相色譜係統有關，而不僅是由檢測器引起的；
C.靈敏度（最小檢出濃度或最小檢出量）：在一個特定分離工作中， 檢測器是否有足夠的靈敏度是十分重要的。當比較檢測器時，常使用敏感度這一性能指標。敏感度即指信號與噪聲的比值（信噪比）等於2時，在單位時間內進入檢測器的溶質的濃度或質量；
D.線性範圍：在進行定量分析時，希望檢測器有寬的線性範圍，以便在一次分析中可同時對主要組分和痕量組分同時進行檢測；
E.檢測器的池體積：它應小於最早流出的死時間色譜峰的洗脫體積的1/10，否則會產生嚴重的柱外譜帶擴展。
