色譜分析過程中，緩衝液是不可或缺的，因為要用它來調節流動相的pH值，緩衝鹽使用不當，那柱子根本扛不住。

比如說
，色譜柱壓升高、柱效下降、保留時間異常等不良影響
，今天小編與大家一一分享。

1）柱壓升高
；

原因：緩衝鹽使用不當導致緩衝鹽析出，堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙，阻礙流動相傳質，引起柱壓升高。

2）相同化合物的保留時間發生變化；

原因：如果沒有衝洗幹淨就進行進樣，色譜柱內含有的鹽會使化合物的保留時間發生變化。

3）柱效下降
；

原因：

i）有些緩衝鹽會滲入到鍵合相的深處，損害矽膠基體
，導致色譜柱鍵合相流失，柱床變鬆，柱效下降
；

ii）凝結在鍵合相表麵，使C18碳tan鏈lian難nan以yi舒shu展zhan，對dui物wu質zhi的de保bao留liu能neng力li下xia降jiang，導dao致zhi柱zhu效xiao下xia降jiang。因yin此ci用yong過guo緩huan衝chong鹽yan後hou需xu要yao對dui色se譜pu柱zhu進jin行xing衝chong洗xi，水shui中zhong緩huan衝chong鹽yan濃nong度du較jiao大da時shi應ying特te別bie引yin起qi注zhu意yi。  

使用前和使用後的處理都是有講究的！

1. 使用前的處理: 在使用緩衝鹽作流動相之前需要用不含緩衝鹽的流動相衝洗色譜柱，直至基線平穩。 原則上，用於衝洗的流動相與分析時所用的流動相含水的比例相同（或含水更多）
，不同的隻是用於衝洗用的流動相中不含緩衝鹽。

理由：緩衝鹽通常易溶於水，難溶於有機溶劑。用含緩衝鹽的（特別是做流動相的水為飽和的緩衝鹽溶液時）流(liu)動(dong)相(xiang)進(jin)行(xing)分(fen)析(xi)時(shi)，如(ru)果(guo)分(fen)析(xi)前(qian)色(se)譜(pu)柱(zhu)中(zhong)用(yong)於(yu)保(bao)存(cun)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)中(zhong)含(han)水(shui)的(de)比(bi)例(li)相(xiang)對(dui)較(jiao)小(xiao)，不(bu)先(xian)衝(chong)洗(xi)掉(diao)，接(jie)下(xia)來(lai)做(zuo)樣(yang)品(pin)的(de)時(shi)候(hou)所(suo)用(yong)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)中(zhong)如(ru)果(guo)有(you)機(ji)溶(rong)劑(ji)含(han)量(liang)大(da)，而(er)其(qi)比(bi)例(li)中(zhong)所(suo)含(han)的(de)水(shui)又(you)不(bu)足(zu)以(yi)溶(rong)解(jie)該(gai)緩(huan)衝(chong)鹽(yan)時(shi)，緩(huan)衝(chong)鹽(yan)將(jiang)會(hui)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)柱(zhu)體(ti)上(shang)析(xi)出(chu)
，沉(chen)積(ji)下(xia)來(lai)，這(zhe)將(jiang)可(ke)能(neng)導(dao)致(zhi)上(shang)述(shu)對(dui)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)損(sun)害(hai)。

2. 使用後的處理：用與分析時含水比例相同的流動相（與分析用流動相唯一的區別是，用於衝洗的流動 相不含緩衝鹽）進行衝洗約30min，直zhi至zhi基ji線xian平ping穩wen。如ru果guo該gai色se譜pu柱zhu在zai接jie下xia來lai很hen長chang的de一yi段duan時shi間jian內nei不bu使shi用yong，要yao長chang期qi保bao存cun
，則ze需xu再zai加jia上shang一yi步bu，即ji用yong純chun的de有you機ji溶rong劑ji衝chong洗xi一yi遍bian，直zhi至zhi基ji線xian平ping穩wen。 

用與分析時含水比例相同的流動相（與分析用流動相唯一的區別是
，用於衝洗的流動相不含緩衝鹽）進行衝洗約30min，直zhi至zhi基ji線xian平ping穩wen。如ru果guo該gai色se譜pu柱zhu在zai接jie下xia來lai很hen長chang的de一yi段duan時shi間jian內nei不bu使shi用yong，要yao長chang期qi保bao存cun
，則ze需xu再zai加jia上shang一yi步bu，即ji用yong純chun的de有you機ji溶rong劑ji衝chong洗xi一yi遍bian
，直zhi至zhi基ji線xian平ping穩wen。緩衝液可以提供離子平衡的反離子，並使流動相保持一定的離子強度和ph值，減少拖尾。

注意事項，是關注的重點！

1、避免使用鹽酸鹽
，鹽酸鹽對鋼質有腐蝕作用。

2、緩衝液最好要現配現用，往往緩衝液是良好的菌類培養液，隔天或放置長時間實驗時會有很多怪現象發生。

3、實驗後不可用有機溶劑直接過度
，有機溶劑會處使鹽類析出，造成液路或色譜柱堵塞

，可用95：5的水甲醇衝洗。

4、使用緩衝液要及時掌握pH範圍

，做到胸中有數。

5

、清洗液路和柱子時，有溫控可加熱到30攝氏度易於衝洗。

6
、長時間用緩衝溶液要注意觀察接頭處有無析出
，若有白色鹽類析出，可考慮一定周期用10%硝酸衝洗一下液路（拆下柱子
，走30ml,再用5倍水衝洗）可以避免液路的堵塞。

7、選擇緩衝液要用可靠的試劑，避免不純的鹽類造成不必要的麻煩。

如果流動相中有機溶劑的比例很高是不能用來衝洗緩衝鹽的，是洗不出來的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇衝洗，是可以把緩衝鹽衝洗出來的，然後用純的有機溶劑來保護柱子。

最好的方法是使用與流動相相同濃度不含鹽的流動相進行清洗，但就是速度慢一些。用水是為了快速替換，一般在15分鍾以內最好，且用0.8的流速較好。如果用純水衝，容易造成鍵合的碳鏈的流失，最好用5%~10%甲醇水溶液衝。可以用純水代替流動相中的緩衝液，有機相不變。這樣衝洗柱子比較穩妥。 

小結