PCR實驗室核酸檢測常見六大問題
發布日期：2022-06-10
核心提示：檢驗科人員是核酸檢測工作的主力軍，我們不但要保證檢測結果的有效性，還時刻麵臨著被感染的風險。本文為大家講解《PCR實驗室新冠核酸檢測操作注意事項》，重點從新冠病毒生理特性、熒光PCR原理、PCR實驗室籌備規範、樣本檢測環節操作、實驗室數據分析、常見問題解析等幾個方麵討論學習，一起來看看吧~
目前所見傳染源主要是新型冠狀病毒感染的患者。無症狀感染者也可能成為傳染源。經jing呼hu吸xi道dao飛fei沫mo和he密mi切qie接jie觸chu傳chuan播bo是shi主zhu要yao的de傳chuan播bo途tu徑jing。在zai相xiang對dui封feng閉bi的de環huan境jing中zhong長chang時shi間jian暴bao露lu於yu高gao濃nong度du氣qi溶rong膠jiao情qing況kuang下xia存cun在zai經jing氣qi溶rong膠jiao傳chuan播bo的de可ke能neng。由you於yu在zai糞fen便bian及ji尿niao中zhong可ke分fen離li到dao新xin型xing冠guan狀zhuang病bing毒du，應ying注zhu意yi糞fen便bian及ji尿niao對dui環huan境jing汙wu染ran造zao成cheng氣qi溶rong膠jiao或huo接jie觸chu傳chuan播bo。
重複進行“變性 - 退火 - 延伸” 三個過程，模板DNA的量就會呈指數倍增加，理論上講經過 n 個循環之後，模板量就會達到2的n次方。答：如果是個別單一通道翹尾，不管是FAM還是VIC通tong道dao，首shou先xian按an照zhao要yao求qiu複fu查zha，複fu查zha建jian議yi重zhong新xin采cai樣yang，如ru果guo不bu方fang便bian重zhong新xin采cai樣yang建jian議yi對dui原yuan有you樣yang本ben進jin行xing重zhong新xin提ti取qu核he酸suan驗yan證zheng，如ru果guo複fu查zha陰yin性xing判pan讀du陰yin性xing，如ru果guo複fu查zha還hai是shi同tong一yi通tong道dao翹qiao尾wei，就jiu要yao對dui結jie果guo仔zai細xi審shen核he，一yi是shi要yao排pai除chu實shi驗yan室shi汙wu染ran，二er是shi要yao對dui病bing人ren信xin息xi了le解jie清qing楚chu，從cong臨lin床chuang症zheng狀zhuang及ji接jie觸chu史shi排pai查zha，如ru果guo沒mei法fa確que認ren，建jian議yi必bi須xu重zhong新xin采cai樣yang複fu查zha，如ru有you必bi要yao可ke以yi采cai用yong另ling一yi家jia試shi劑ji來lai驗yan證zheng。如ru果guo出chu現xian大da量liang的de弱ruo陽yang性xing擴kuo增zeng翹qiao尾wei，首shou要yao原yuan因yin是shi考kao慮lv實shi驗yan室shi汙wu染ran，可ke以yi通tong過guo做zuo環huan境jing樣yang本ben和he陰yin性xing對dui照zhao做zuo驗yan證zheng排pai除chu。②N基因和1ab基因是新冠病毒的特有基因嗎，靈敏度哪個更高？是否會和其他冠狀病毒片段重疊？答：N基因跟1ab都是特異的，不會跟其他呼吸道病原體交叉反應。設計時候，兩個基因的序列不一樣，導致靈敏度不一樣，N基因的靈敏度比1ab靈敏度高。答：新冠病毒由於是RNA病毒，容易降解，另外檢測結果也和取樣，核酸提取以及樣本本身的核酸濃度有關，需要逐一分析，同時可以結合臨床症狀判讀。
④采用生理鹽水做陰性對照，內標也會增長，怎麼解釋？答：因yin為wei試shi劑ji采cai用yong的de是shi內nei源yuan性xing內nei標biao，內nei源yuan性xing內nei標biao是shi用yong人ren源yuan基ji因yin標biao記ji，此ci基ji因yin存cun在zai於yu人ren的de表biao皮pi細xi胞bao內nei，操cao作zuo過guo程cheng中zhong就jiu可ke能neng會hui出chu現xian人ren源yuan性xing的de汙wu染ran，另ling外wai環huan境jing汙wu染ran也ye有you可ke能neng導dao致zhi內nei標biao增zeng長chang，這zhe也ye是shi前qian麵mian提ti到dao的de建jian議yi做zuo環huan境jing樣yang本ben質zhi控kong。答：如(ru)果(guo)新(xin)冠(guan)樣(yang)本(ben)內(nei)標(biao)不(bu)出(chu)，該(gai)樣(yang)本(ben)必(bi)須(xu)複(fu)查(zha)，可(ke)重(zhong)新(xin)混(hun)勻(yun)該(gai)樣(yang)本(ben)提(ti)取(qu)核(he)酸(suan)，如(ru)果(guo)重(zhong)新(xin)提(ti)取(qu)該(gai)樣(yang)本(ben)內(nei)標(biao)還(hai)是(shi)不(bu)出(chu)，在(zai)排(pai)除(chu)提(ti)取(qu)問(wen)題(ti)的(de)情(qing)況(kuang)下(xia)，說(shuo)明(ming)采(cai)樣(yang)不(bu)合(he)格(ge)，要(yao)通(tong)知(zhi)臨(lin)床(chuang)重(zhong)新(xin)采(cai)樣(yang)複(fu)查(zha)。
⑥采集環境樣本檢測新冠狀病毒，為啥大部分樣本內標不出，偶爾個別樣本檢測出內標？答：因為新冠試劑檢測的是人內源性內標，環境樣本一般不含有人源細胞，所以檢測不出內標；偶爾檢出內標，可能該環境樣本上有人源性細胞粘附，故而檢出內標。
編輯：songjiajie2010
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