最近不少用戶問我們關於熒光顯微鏡的使用方法,這裏摘錄幾篇關於熒光顯微鏡的文章:
熒光顯微鏡的應用與注意(體視)
使用
一、將材料片放在顯微鏡的載物台上。
二、打開熒光顯微鏡穩壓器,然後啟動紫外燈,紫外燈15min內不得關閉,關閉後3min內不得再啟動。
三、將激發濾光片轉至v,分色片調到v,選用495或475nm阻擋濾光片。
四、選用uvFL40、uvFL100熒光接物鏡鏡檢。
五、在玻片上加無熒光油,先用40 x,再用100 x調焦鏡檢.呈現熒光。
六、因熒光物質受紫外光照射時隨時間的增長熒光逐漸變弱,因此鏡檢時應經常變換視野。
七、亦可用uvFL10或uvFL20低倍鏡鏡檢材料(用低倍鏡時不加無熒光油)。
熒光圖像的記錄方法:
熒ying光guang顯xian微wei鏡jing所suo看kan到dao的de熒ying光guang圖tu像xiang,一yi是shi具ju有you形xing態tai學xue特te征zheng,二er是shi具ju有you熒ying光guang的de顏yan色se和he亮liang度du,在zai判pan斷duan結jie果guo時shi,必bi須xu將jiang二er者zhe結jie合he起qi來lai綜zong合he判pan斷duan。結jie果guo記ji錄lu根gen據ju主zhu觀guan指zhi標biao,即ji憑ping工gong作zuo者zhe目mu力li觀guan察cha。作zuo為wei一yi般ban定ding性xing觀guan察cha,基ji本ben上shang可ke靠kao的de。隨sui著zhe技ji術shu科ke學xue的de發fa展zhan,在zai不bu同tong程cheng度du上shang采cai用yong客ke觀guan指zhi標biao記ji錄lu判pan斷duan結jie果guo,如ru用yong細xi胞bao分fen光guang光guang度du計ji,圖tu像xiang分fen析xi儀yi等deng儀yi器qi。但dan這zhe些xie儀yi器qi記ji錄lu的de結jie果guo,也ye必bi須xu結jie合he主zhu觀guan的de判pan斷duan。
熒(ying)光(guang)顯(xian)微(wei)鏡(jing)攝(she)影(ying)技(ji)術(shu)對(dui)於(yu)記(ji)錄(lu)熒(ying)光(guang)圖(tu)像(xiang)十(shi)分(fen)必(bi)要(yao),由(you)於(yu)熒(ying)光(guang)很(hen)易(yi)褪(tui)色(se)減(jian)弱(ruo),要(yao)即(ji)時(shi)攝(she)影(ying)記(ji)錄(lu)結(jie)果(guo)。方(fang)法(fa)與(yu)普(pu)通(tong)顯(xian)微(wei)攝(she)影(ying)技(ji)術(shu)基(ji)本(ben)相(xiang)同(tong)。隻(zhi)是(shi)需(xu)要(yao)采(cai)用(yong)高(gao)速(su)感(gan)光(guang)膠(jiao)片(pian)如(ru)ASA200以上或24。以上。因紫外光對熒光猝滅作用大,如FITC的標記物,在紫外光下照射30s,熒光亮度降低50%。所以,曝光速度太慢,就不能將熒光圖像拍攝下來。一般研究型熒光顯微鏡都有半自動或全自動顯微攝影係統裝置。
注意事項:
(1)嚴格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作,不要隨意改變程序。
(2)應在暗室中進行檢查。進入暗室後,接上電源,點燃超高壓汞燈5~15min,待光源發出強光穩定後,眼睛完全適應暗室,再開始觀察標本。
(3)防止紫外線對眼睛的損害,在調整光源時應戴上防護眼鏡。
(4)檢查時間每次以1~2h為宜,超過90min,超高壓汞燈發光強度逐漸下降,熒光減弱;標本受紫外線照射3~5min後,熒光也明顯減弱;所以,最多不得超過2~3h。
(5)熒光顯微鏡光源壽命有限,標本應集中檢查,以節 省(sheng)時(shi)間(jian),保(bao)護(hu)光(guang)源(yuan)。天(tian)熱(re)時(shi),應(ying)加(jia)電(dian)扇(shan)散(san)熱(re)降(jiang)溫(wen),新(xin)換(huan)燈(deng)泡(pao)應(ying)從(cong)開(kai)始(shi)就(jiu)記(ji)錄(lu)使(shi)用(yong)時(shi)間(jian)。燈(deng)熄(xi)滅(mie)後(hou)欲(yu)再(zai)用(yong)時(shi),須(xu)待(dai)燈(deng)泡(pao)充(chong)分(fen)冷(leng)卻(que)後(hou)才(cai)能(neng)點(dian)燃(ran)。一(yi)天(tian)中(zhong)應(ying)避(bi)免(mian)數(shu)次(ci)點(dian)燃(ran)光(guang)源(yuan)。
(6)標本染色後立即觀察,因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存,可延緩熒光減弱時間,防止封裱劑蒸發。
(7)熒光亮度的判斷標準:一般分為四級,即“一”—無或可見微弱熒光。“+”—僅能見明確可見的熒光。“++”—可見有明亮。
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