一、激光掃描共聚焦顯微鏡的基本原理和發展

kexueyanjiugongzuoduigenggaotuxiangfenbianlvdezhuiqiuchanshenglejiguangsaomiaogongjujiaoxianweijing。suizhemianyiyingguangjishuzaishengwuxueyanjiulingyudeguangfanyingyong
，yanjiurenyuanzhuyidao
，yingguangxianweizhaopiandefenbianlvjiaodi，chuantongdeyingguangxianweijingshiyongchangguangyuan
，yinbiaobenlinjinjiegou（細胞或亞細胞結構）產(chan)生(sheng)的(de)衍(yan)射(she)光(guang)和(he)散(san)射(she)光(guang)的(de)幹(gan)擾(rao)

，使(shi)標(biao)本(ben)中(zhong)細(xi)微(wei)結(jie)構(gou)的(de)成(cheng)像(xiang)不(bu)夠(gou)清(qing)晰(xi)。激(ji)光(guang)共(gong)聚(ju)焦(jiao)顯(xian)微(wei)鏡(jing)的(de)主(zhu)要(yao)原(yuan)理(li)是(shi)利(li)用(yong)激(ji)光(guang)掃(sao)描(miao)束(shu)通(tong)過(guo)光(guang)柵(zha)針(zhen)孔(kong)形(xing)成(cheng)點(dian)光(guang)源(yuan)
，在(zai)熒(ying)光(guang)標(biao)記(ji)標(biao)本(ben)的(de)焦(jiao)平(ping)麵(mian)上(shang)逐(zhu)點(dian)掃(sao)描(miao)
，采(cai)集(ji)點(dian)的(de)光(guang)信(xin)號(hao)通(tong)過(guo)探(tan)測(ce)針(zhen)孔(kong)到(dao)達(da)光(guang)電(dian)倍(bei)增(zeng)管(guan)（PMT）

，zaijingguoxinhaochuli，zaijisuanjijianshipingshangxingchengtuxiang。youyujiguangguangyuandeguangzhazhenkonghetancezhenkongduiwujingjiaopingmianshigongede，jiaopingmianshangdediantongshijujiaoyuguangzhazhenkonghetancezhenkong，jinxingdiansaomiaoshi，saomiaodianyiwaidedianbuhuichengxiang，jingzhudiansaomiaohoucaixingchengzhenggebiaobendeguangxueqiepian（Optic section）。

二、圖像激光掃描共聚焦顯微鏡的主要生物學應用

1 、組織和細胞中熒光標記的分子和結構的檢測

標本製備方法主要有免疫熒光組織和細胞化學法、熒光蛋白標記分子法

、yingguangxibaoranliaobiaojifadeng。yuchuantongdeyingguangxianweijingxiangbi
，chuleyoujiaogaodefenbianlvyiwai，yigezhuyaodebutongshijiguangsaomiaogongjujiaoxianweijingkeyiliyongjiguangdiansaomiaochengxiang，xingchengsuoweide“光學切片”
，jinerkeyiliyongyanzongzhoushangyidongbiaobenjinxingduogeguangxueqiepiandediejiaxingchengzuzhihuoxibaozhongyingguangbiaojijiegoudezongtituxiang，yincikeyiyongyuguanchaqiepianheyixiebiaomianbupingdebiaoben，tebieshiyanjiujuyouchangtuqideshenjingyuanshigengyoushiyongjiazhi。tongshikeyizuosanweituxiangzhongjianhebiaojiqiangdudebandingliangfenxi。

2
、定量或半定量測量Ca2+和pH等細胞內離子濃度及變化

利用Fluo23 、Fura2等熒光探針可以測量Ca2+zaihuoxibaoneidenongdujibianhua。yibanlaishuo
，dianshenglijiluzhuangzhijiashexiangjishujiancexibaoneiliziliangbianhuadesuduxiangduijiaokuai
，danqituxiangbenshendejiazhijiaodi，erjiguangsaomiaogongjujiaoxianweijingkeyitigonggenghaodeyaxibaojiegouzhonggailizinongdudongtaibianhuadetuxiang
，zheduiyuyanjiugaidenglizixibaoneidonglixueyouyiyi。zuihaoyudianshenglidengjishuxiangjiehelaiguanchalizibianhuayudianshenglixuezhibiaodexiangguanxing。

3
、熒光光漂白及恢複技術

利li用yong高gao能neng量liang激ji光guang束shu將jiang細xi胞bao內nei某mou一yi部bu分fen中zhong選xuan定ding靶ba區qu域yu的de某mou種zhong熒ying光guang淬cui滅mie，然ran後hou觀guan察cha鄰lin近jin相xiang同tong的de熒ying光guang標biao記ji物wu重zhong新xin擴kuo散san入ru該gai區qu域yu的de速su度du和he方fang式shi，從cong而er分fen析xi細xi胞bao內nei蛋dan白bai質zhi運yun輸shu、受(shou)體(ti)在(zai)細(xi)胞(bao)膜(mo)上(shang)的(de)流(liu)動(dong)和(he)大(da)分(fen)子(zi)組(zu)裝(zhuang)等(deng)細(xi)胞(bao)生(sheng)物(wu)學(xue)過(guo)程(cheng)。一(yi)般(ban)來(lai)說(shuo)，需(xu)要(yao)用(yong)熒(ying)光(guang)蛋(dan)白(bai)等(deng)標(biao)記(ji)物(wu)標(biao)記(ji)需(xu)要(yao)研(yan)究(jiu)的(de)分(fen)子(zi)，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)表(biao)達(da)後(hou)再(zai)做(zuo)以(yi)上(shang)的(de)實(shi)驗(yan)。

4、長時程觀察細胞遷移和生長

muqianjiguangsaomiaogongjujiaoxianweijingderuanjianyibanjunkezidongkongzhidijinxingdingshihedingfangshidejiguangsaomiao，erqieyouyuxinyidaijiguangsaomiaogongjujiaoxianweijingdetancexiaolvdetigao
，zhixuyaohenxiaodejiguangnengliangjiukeyidadaojiaohaodetuxiangzhiliang

，congerjianxiaolemeicisaomiaoshijiguangshuduixibaodesunshang
，yinci，keyiyongyushuxiaoshidechangshichengdingshisaomiao，jiluxibaoqianyiheshengchangdengxibaoshengwuxuexianxiang。

5、其他的生物學應用

用高能量激光束進行細胞損傷和損毀實驗
，一般要用紫外激光束進行細胞損毀；細胞間通訊研究；光解籠鎖活化技術等。

三
、激光共聚焦顯微鏡在以下研究領域中應用較為廣泛

1、細胞生物學：細胞結構、細胞骨架、細胞膜結構、流動性、受體
、細胞器結構和分布變化、細胞凋亡；

2
、生物化學：酶、核酸
、FISH
、受體分析；

3、藥理學：藥物對細胞的作用及其動力學；

4
、生理學：膜受體、離子通道
、離子含量
、分布、動態；

5、遺傳學和組胚學：細胞生長
、分化、成熟變化
、細胞的三維結構、染色體分析、基因表達、基因診斷；

6
、神經生物學：神經細胞結構、神經遞質的成分、運輸和傳遞；

7、微生物學和寄生蟲學：細菌、寄生蟲形態結構；

8、病理學及病理學臨床應用：活檢標本的快速診斷
、腫瘤診斷、自身免疫性疾病的診斷；

9
、生物學
、免疫學、環境醫學和營養學。