一、熒光顯微鏡標本製作要求
1.載玻片
載玻片厚度應在0.8～1.2mmzhijian，taihoudepopian，yifangmianguangxishouduo，lingyifangmianbunengshijifaguangzaibiaobenshangjuji。zaibopianbixuguangjie，houdujunyun
，wumingxianzifayingguang。youshixuyongshiyingbolizaibopian。
2.蓋玻片
蓋玻片厚度在0.17mm左右，光潔。為了加強激發光，也可用幹澀蓋玻片，這是一種特製的表麵鍍有若幹層對不同波長的光起不同幹涉作用的物質（如氟化鎂）的蓋玻片，它可以使熒光順利通過
，而反射激發光，這種反射的激發光可激發標本。
3.標本
組(zu)織(zhi)切(qie)片(pian)或(huo)其(qi)他(ta)標(biao)本(ben)不(bu)能(neng)太(tai)厚(hou)，如(ru)太(tai)厚(hou)激(ji)發(fa)光(guang)大(da)部(bu)分(fen)消(xiao)耗(hao)在(zai)標(biao)本(ben)下(xia)部(bu)，而(er)物(wu)鏡(jing)直(zhi)接(jie)觀(guan)察(cha)到(dao)的(de)上(shang)部(bu)不(bu)能(neng)被(bei)充(chong)分(fen)激(ji)發(fa)。另(ling)外(wai)，細(xi)胞(bao)重(zhong)疊(die)或(huo)雜(za)質(zhi)掩(yan)蓋(gai)，影(ying)響(xiang)判(pan)斷(duan)。
4.封裱劑
封裱劑常用甘油，必須無自發熒光，無色透明，熒光的亮度在PH8.5～9.5時較亮，不易很快褪去。所以

，常用甘油和0.5mol/L PH9.0～9.5的碳酸鹽緩衝液的等量混合液作封裱劑。
5.鏡油
一yi般ban用yong暗an視shi野ye熒ying光guang顯xian微wei鏡jing和he油you鏡jing觀guan察cha標biao本ben時shi，必bi須xu使shi用yong鏡jing油you。最zui好hao使shi用yong特te製zhi的de無wu熒ying光guang鏡jing油you
，也ye可ke用yong上shang述shu甘gan油you代dai替ti
，液ye體ti石shi蠟la也ye可ke用yong
，隻zhi是shi折zhe光guang率lv較jiao低di，對dui圖tu像xiang質zhi量liang略lve有you影ying響xiang。
二、熒光顯微鏡基本操作
1.關閉房間內的電燈，開啟顯微鏡汞燈；
2.根據樣品標記的熒光素選擇相應的濾光片
；
3.放好樣品
，找到合適的視野；
4.如需拍照，請確認照相機內已裝好彩色膠卷（最好使用27定膠卷）
；
5.開啟自拍裝置
，選擇手動檔，通常拍攝速度在0.5-10秒內

；
6.使用結束
，關閉所有電源並做好使用記錄。
三、熒光圖像的記錄方法
熒ying光guang顯xian微wei鏡jing所suo看kan到dao的de熒ying光guang圖tu像xiang，一yi是shi具ju有you形xing態tai學xue特te征zheng，二er是shi具ju有you熒ying光guang的de顏yan色se和he亮liang度du，在zai判pan斷duan結jie果guo時shi
，必bi須xu將jiang二er者zhe結jie合he起qi來lai綜zong合he判pan斷duan。結jie果guo記ji錄lu根gen據ju主zhu觀guan指zhi標biao，即ji憑ping工gong作zuo者zhe目mu力li觀guan察cha。作zuo為wei一yi般ban定ding性xing觀guan察cha
，基ji本ben上shang可ke靠kao的de。隨sui著zhe技ji術shu科ke學xue的de發fa展zhan，在zai不bu同tong程cheng度du上shang采cai用yong客ke觀guan指zhi標biao記ji錄lu判pan斷duan結jie果guo，如ru用yong細xi胞bao分fen光guang光guang度du計ji，圖tu像xiang分fen析xi儀yi等deng儀yi器qi。但dan這zhe些xie儀yi器qi記ji錄lu的de結jie果guo

，也ye必bi須xu結jie合he主zhu觀guan的de判pan斷duan。
yingguangxianweijingsheyingjishuduiyujiluyingguangtuxiangshifenbiyao，youyuyingguanghenyituisejianruo，yaojishisheyingjilujieguo。fangfayuputongxianweisheyingjishujibenxiangtong。zhishixuyaocaiyonggaosuganguangjiaopianjike。yinziwaiguangduiyingguangcumiezuoyongda，ruFITC的標記物
，在紫外光下照射30s，熒光亮度降低50%。所以，曝光速度太慢，就不能將熒光圖像拍攝下來。一般研究型熒光顯微鏡都有半自動或全自動顯微攝影係統裝置。
四、使用熒光顯微鏡的注意事項
1.嚴格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程序。
2.應在暗室中進行檢查。進入暗室後，接上電源，點燃超高壓汞燈5～15min，待光源發出強光穩定後

，眼睛完全適應暗室

，再開始觀察標本。
3.防止紫外線對眼睛的損害，在調整光源時應戴上防護眼鏡。
4.檢查時間每次以1～2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發光強度逐漸下降
，熒光減弱；標本受紫外線照射3～5min後
，熒光也明顯減弱
；所以
，最多不得超過2～3h。
5.熒ying光guang顯xian微wei鏡jing光guang源yuan壽shou命ming有you限xian，標biao本ben應ying集ji中zhong檢jian查zha，以yi節jie省sheng時shi間jian
，保bao護hu光guang源yuan。天tian熱re時shi，應ying加jia電dian扇shan散san熱re降jiang溫wen，新xin換huan燈deng泡pao應ying從cong開kai始shi就jiu記ji錄lu使shi用yong時shi間jian。燈deng熄xi滅mie後hou欲yu再zai用yong時shi
，須xu待dai燈deng泡pao充chong分fen冷leng卻que後hou才cai能neng點dian燃ran。一yi天tian中zhong應ying避bi免mian數shu次ci點dian燃ran光guang源yuan。
6.標本染色後立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存
，可延緩熒光減弱時間
，防止封裱劑蒸發。
7.熒光亮度的判斷標準：一般分為四級，即“-”指無或可見微弱熒光。“+”指僅能見明確可見的熒光。“++”指可見有明亮的熒光。“+++”指可見耀眼的熒光。