PCR中文翻譯為聚合酶鏈式反應。自1985年PCR技術發明以來,技術發展已非常成熟了,PCR儀主要可以劃分為三類,即:常規PCR儀、實時熒光定量PCR儀、數字PCR儀。
我們今天主要講實時熒光PCR儀。
PCR技術在近30年的不斷發展創新中,最受矚目的當屬熒光實時定量PCR技術(real-time quantitative PCR,或qPCR)。
定量PCR技術真正實現了PCR從定性到定量的飛躍,通過對PCR過程的實時監控,專一、靈敏快速、可重複地精確定量起始模板濃度,已經在科研和臨床診斷領域得到了越來越廣泛的應用。
PCR的工作原理是變性、退火、延伸三個步驟。
而對於實時熒光PCR儀的工作原理展開來講就是:將標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合後,完成高溫變性、低溫複性、適溫延伸的熱循環,並遵守聚合酶鏈反應規律,與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷,熒光素遊離於反應體係中,在特定光激發下發出熒光;隨著循環次數的增加,被擴增的目的基因片段呈指數規律增長,通過實時檢測與之對應的隨擴增而變化熒光信號強度,求得Ct值(也就是,循環閾值,即:每個反應管內的熒光信號到達設定閾值時所經曆的循環數),同時利用數個已知模板濃度的標準品作對照,即可得出待測標本目的基因的拷貝數。
這麼講可能你還不能完全理解,那你可以這麼去理解,一個實時熒光定量PCR儀yi,最zui關guan鍵jian的de是shi兩liang大da係xi統tong,一yi個ge光guang電dian係xi統tong,一yi個ge溫wen控kong係xi統tong。光guang電dian係xi統tong是shi用yong來lai進jin行xing光guang電dian信xin號hao收shou集ji和he轉zhuan換huan的de,溫wen控kong係xi統tong是shi用yong來lai維wei持chi核he酸suan擴kuo增zeng所suo需xu對dui應ying溫wen度du條tiao件jian的de。最zui後hou電dian腦nao自zi帶dai軟ruan件jian係xi統tong會hui通tong過guo相xiang關guan關guan係xi方fang程cheng式shi換huan算suan出chu臨lin床chuang定ding量liang結jie果guo。
關於實時熒光PCR儀的廠家主要如下:
進口廠家有羅氏診斷、美國伯樂、美國ABI(ABI已經被賽默飛收購)。
國產老牌廠家主要是:上海宏石、杭州博日、西安天隆。
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