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材料與方法
一：蒸 汽 滅 菌 器
二：序批式汙水處理係統
三：過氧化氫蒸汽消毒器
四：生物指示劑包括嗜熱脂肪杆菌( ATCC 7953) 芽孢和枯草杆菌黑色變種( ATCC 9372) 芽孢製備的菌片; 化學指示物包括壓力蒸氣滅菌專用 121 ℃ 和132 ℃指示卡( 國內產品) 。所用培養基包括兩種細菌芽孢專用恢複培養用營養肉湯培養基，為國內市售產品。
試驗方法
雙扉壓力蒸汽滅菌器鑒定
①滅菌效果驗證: 依據 RB /T 199 － 2015《實驗室設備生物安全性能技術規範》，分別使用化學指示卡( 121 ℃ 和132 ℃ ) 及嗜熱脂肪杆菌( ATCC 7953) 芽孢生物指示物對 2 台雙扉壓力蒸汽滅菌器進行滅菌效果驗證。
②B － D 檢測: 依據 RB /T 199 － 2015《實驗室設備生物安全性能技術規範》，使用 B － D 測試包對 2台雙扉壓力蒸汽滅菌器進行冷空氣排除和蒸汽穿透效果驗證。
序批式汙水處理係統滅菌效果驗證
依據RB /T 199 － 2015《實驗室設備生物安全性能技術規範》，使用嗜熱脂肪杆菌( ATCC 7953) 芽孢生物指示物對該係統運行一個滅菌周期( 滅菌溫度 125 ℃，20 h 以上) 後的效果進行驗證。
過氧化氫蒸汽消毒器消毒效果驗證
參考2002 年版《消毒技術規範》，采用汽霧過氧化氫消毒機，使用枯草杆菌黑色變種芽孢菌片分別對 ABSL－ 3 核心區、緩衝間及高效過濾單元進行消毒效果驗證。
結果
壓力蒸汽滅菌器鑒定
分別將化學指示卡、嗜熱脂肪杆菌芽孢生物指示物及 B － D 測試包按要求放入待檢測的兩台壓力蒸汽滅菌器內。運行檢測程序後，化學指示卡指示色塊完全變為黑色，與標準色一致; 嗜熱脂肪杆菌芽孢生物指示物經 56 ℃ 培養 48 h 後，培養基顏色仍為紫色陰性結果，陽性對照為黃色; B － D 測試包內測試圖由黃色變為均勻黑色。因此，壓力蒸汽滅菌器鑒定合格。
汙水處理係統效果驗證
將嗜熱脂肪杆菌芽孢生物指示物放入序批式高溫汙水處理係統測試口，運行一個消毒周期( 滅菌溫度 125 ℃，20 h 以上) 後取出，在 56 ℃ 培養箱培養 48 h 後觀察，培養基顏色仍為紫色陰性結果，陽性對照變為黃色。判定汙水處理係統滅菌效果驗證合格。
過氧化氫蒸汽消毒器消毒效果驗證
ABSL － 3 核心區和緩衝間環境消毒效果驗證 將枯草杆菌黑色變種芽孢菌片布置 16 個采樣點( 具體布點位置見圖 1) 。汽化過氧化氫消毒設備運行一個消毒周期( 使用有效含量 35% 過氧化氫消毒 劑 噴 霧 時 間 79 min，噴 液 量 12 g /min，維 持50 min，噴液量 4 g /min，自行降解 145 min。消毒劑總注入量 1 148 g) ，待儀器檢測房間內過氧化氫濃度降至 0． 9 ppm 後進入房間，采用無菌操作方式取菌片放入培養基( 含經鑒定合格的中和劑) 中，振打200 次，置於 37 ℃ 恒溫培養箱，同時設陽性對照組和陰性對照組，培養 7 d 觀察結果。結果顯示，在 95m3 的 ABSL － 3 核心區和緩衝間，溫 度 20． 4 ～24． 7 ℃，濕度 21% ～ 42% ，使用汽化過氧化氫消毒設備運行一個消毒周期，對枯草杆菌黑色變種芽孢的殺滅對數值 ＞ 6． 0; 定性培養，結果顯示全部無菌生長( 表 1) 。
高效過濾單元消毒效果驗證 根據高效過濾單元位置，將枯草杆菌黑色變種芽孢菌片布置 8個采樣點( 具體布點位置見圖 2) 。汽化過氧化氫消毒設備運行一個消毒周期( 使用有效含量 35% 過氧化氫消毒劑，噴霧時間 49 min，噴液量 2． 3 g /min，維持 90 min，降解 30 min。消毒劑總注入量 112． 5 g) ，待儀器檢測房間內過氧化氫濃度降至 10 ppm 後，采用無菌操作方式取樣放入培養基( 含經鑒定合格的中和劑) 中，振打 200 次，置於 37 ℃ 恒溫培養箱，同時設陽性對照組和陰性對照組，培養 7 d 觀察結果。結果顯示，在環境溫度 20． 4 ～ 24． 7 ℃，濕度 21% ～42% 條件下，使用汽化過氧化氫消毒設備運行一個消毒周期，對高效過濾單元不同位點布置的枯草杆菌黑色變種芽孢的殺滅對數值均 ＞ 6． 0，同時經樣片中和肉湯管定性培養，結果顯示全部無菌生長
討論
高等級生物安全實驗室通常是指 P3、P4 生物安全實驗室，一般用於操作危險等級較高的病原微生物如主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴重的甚至是致死疾病的致病微生物或毒素; 或者對人體具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明、目前尚無有效疫苗或治療方法的致病微生物或其毒素。
高等級生物安全實驗室在標本處理、儀器設備使用、實驗操作、實驗動物處理、廢物處理等多個環節均有可能產生生物汙染。生物安全實驗室的核心是安全，包括實驗結束。對於批量廢物、廢液的處理，以及實驗室環境空氣、關鍵大型儀器設備如排風高效過濾器、生物安全櫃、隔離器、動物籠具等，采取安全、有效的消毒滅菌措施，建立客觀、科學的消毒滅菌效果評價方法與指標，對於保障實驗室生物安全、保護實驗人員健康是十分必要的。
在本研究中，根據雙扉壓力蒸汽滅菌器、序批式汙水處理係統、過氧化氫蒸汽消毒器的相關消毒機理與作用方式，分別依據或參考我國 RB /T199 －2015《實驗室設備生物安全性能技術規範》與 2002年版《消毒技術規範》相關方法開展消毒滅菌效果性能評價，根據生物、化學指示物的顏色或菌量變化進行結果判定，驗證各種關鍵設備的消毒滅菌效果，為相關實驗室安全性判定提供依據。
國外發達國家如法國、美國、deguodengzaigaodengjishengwuanquanshiyanshifangmianqibujiaozao，fazhanjiaokuai。zhenduigaodengjishengwuanquanshiyanshiguanjianshebeiruhuaxuelinyuxiaoduzhuangzhitongchangcaiyonggeguoshengchanqiyedechanpinjishuzhibiao。feishuichulixitong、dongwucantichulixitongyemeiyouzhidingxiangguanjishubiaozhun，tongchangjiejianzhengqimiejunqijidongwutuzaichulishebeidexiangguanbiaozhun，duiyugaodengjishengwuanquanshiyanshibingbuwanquanshihe。duiyuhuanjingxiaodushebei，guowaiyouzhenduiyiliaohuanjingxiaodumiejunxiaoguopingjiadebiaozhun，danduiyugaodengjishengwuanquanshiyanshihuanjingxiaodubingmeiyouzhenduixingbiaozhun。jinnianlaikaishiyingyongbingtuiguangdeqihuaguoyanghuaqingdengshebei，zaimeiguoyeduoweihuanbaoshu、醫療保健流行病學會、感染控製與流行病專業學會、醫療保健環境學會等相關機構在關注其效果評價。在歐洲，法國已形成針對汽化過氧化氫係統的測試標準NF72 － 281，但其他國家還未采用，該標準正在進行評估以成為歐洲標準
