六、奶牛胚胎移植產業化的相關技術

    peitaishengwujishushishengwujishudezhongyaoneirongzhiyi，suobaokuodejutijishuneirongheyanjiuderedianhenduo，youxiejishuyibijiaochengshu，kaishihuojijiangyongyupeitaiyizhichanyehuadeshijian
，danshangyouhenduojishuneirongrengchuyushiyanshijieduan，lishijiyingyonghaiyouxiangdangdejuli。
  （一） 、胚胎的冷凍保存
    胚pei胎tai冷leng凍dong保bao存cun的de成cheng功gong使shi奶nai牛niu的de胚pei胎tai移yi植zhi不bu再zai受shou時shi間jian和he空kong間jian的de限xian製zhi，完wan全quan可ke以yi根gen據ju受shou體ti母mu牛niu的de發fa情qing情qing況kuang人ren為wei確que定ding胚pei胎tai移yi植zhi的de時shi間jian。其qi次ci
，使shi胚pei胎tai的de國guo際ji
、國內交換以及長期保存成為可能，大大推動了胚胎移植產業化的進程。
    目前常用的胚胎冷凍方法主要有兩種：
    1、慢性冷凍保存
    此法是將胚胎置於抗凍保護劑溶液中，經緩慢降溫，一般降溫速度為1每分鍾攝氏度到3每分鍾攝氏度
，達到一定的溫度後投入液氮（-196攝氏度），即ji可ke長chang期qi保bao存cun。經jing冷leng凍dong保bao存cun的de胚pei胎tai在zai移yi植zhi前qian經jing解jie凍dong進jin行xing移yi植zhi。這zhe種zhong方fang法fa由you於yu降jiang溫wen速su度du慢man
，可ke在zai胚pei胎tai完wan全quan凍dong結jie前qian脫tuo出chu細xi胞bao內nei的de水shui分fen，防fang止zhi冰bing晶jing形xing成cheng對dui胚pei胎tai的de傷shang害hai。整zheng個ge冷leng凍dong過guo程cheng需xu要yao2-4xiaoshi

，bijiaofeishi。muqianyiyougezhongleixingdepeitailengdongyi，keyijinxingdiannaochengxukongzhi，baozhenglemeiyipidelengdongzhiliang。gaifayizaiguoneiwaiguangfanyingyong
，chengweiyizhongchangguidepeitailengdongbaocunfangfa。
    2


、玻璃化冷凍保存
    此ci法fa是shi將jiang胚pei胎tai置zhi於yu特te製zhi的de高gao濃nong度du的de冷leng凍dong保bao護hu液ye中zhong，隻zhi需xu要yao幾ji分fen鍾zhong的de平ping衡heng時shi間jian即ji投tou入ru液ye氮dan中zhong完wan成cheng冷leng凍dong保bao存cun過guo程cheng。胚pei胎tai解jie凍dong後hou的de生sheng存cun能neng力li不bu低di於yu慢man速su冷leng凍dong保bao存cun。此ci法fa不bu需xu冷leng凍dong儀yi和he特te殊shu設she備bei，在zai沒mei有you實shi驗yan室shi的de現xian場chang條tiao件jian下xia即ji可ke操cao作zuo。由you於yu整zheng個ge冷leng凍dong過guo程cheng隻zhi需xu幾ji分fen種zhong的de時shi間jian，縮suo短duan了le操cao作zuo的de時shi間jian
，具ju有you很hen好hao的de推tui廣guang和he應ying用yong前qian景jing。
  （二） 
、體外受精
    奶(nai)牛(niu)的(de)體(ti)外(wai)受(shou)精(jing)是(shi)指(zhi)精(jing)子(zi)和(he)卵(luan)子(zi)在(zai)體(ti)外(wai)人(ren)為(wei)控(kong)製(zhi)的(de)實(shi)驗(yan)室(shi)條(tiao)件(jian)下(xia)完(wan)成(cheng)受(shou)精(jing)的(de)技(ji)術(shu)
，也(ye)是(shi)奶(nai)牛(niu)胚(pei)胎(tai)生(sheng)產(chan)的(de)方(fang)式(shi)之(zhi)一(yi)，以(yi)這(zhe)種(zhong)方(fang)式(shi)得(de)到(dao)的(de)胚(pei)胎(tai)叫(jiao)體(ti)外(wai)胚(pei)胎(tai)。
    目前，進行體外受精的卵子（卵母細胞）有兩種獲取方法：
    1、宰場剛屠宰的母牛體內摘取卵巢

，以一定的方法處理後，從卵巢上收集卵母細胞，要求卵泡直徑為3-10bomi。ranhoujiangzhexieluanmuxibaozaieryanghuatanpeiyangxiangneipeiyangchengshu，zaiyujinghuonengchulidegongniujingzifangzaiyiqiwanchengshoujing，jierbashoujingluanpeiyangzhinangpeijieduanjinxingyizhihuolengdongbaocun。congfeiqideluanchaozhongcaijiluanmuxibaoshengchanpeitaidefangshi，cailiaolaiyuanfengfu
，shengchanchengbendi，bianyugongchanghuacaozuo
，kezuodaochengpishengchandemude。cunzaiwentishimuniudelaiyuanjixipuwufaqueding
；其次，這類胚胎移植的受胎率低，應用時應慎重考慮。
    2
、從活體母牛卵巢直接收集卵母細胞
    這種方法要借助超聲波探測儀、內窺鏡或腹腔鏡等直接由活體母牛的卵巢上吸取可用的卵母細胞。隨後的體外培養和受精過程與屠宰場獲取的卵巢卵母細胞相同。
    值得注意的是不管采用哪種方法生產的體外胚胎普遍存在活力較低，移植後產犢率低，胎兒初生重高，容易造成母牛難產等實際問題。
  （三） 
、胚胎切割
    胚pei胎tai切qie割ge是shi指zhi運yun用yong顯xian微wei鏡jing操cao作zuo儀yi或huo其qi他ta簡jian單dan設she備bei將jiang附fu植zhi前qian的de囊nang胚pei期qi胚pei胎tai分fen割ge為wei若ruo幹gan具ju有you繼ji續xu發fa育yu潛qian能neng部bu分fen的de技ji術shu，是shi提ti高gao胚pei胎tai利li用yong率lv的de有you效xiao方fang法fa之zhi一yi。
    在(zai)進(jin)行(xing)胚(pei)胎(tai)切(qie)割(ge)時(shi)為(wei)了(le)便(bian)於(yu)操(cao)作(zuo)和(he)切(qie)割(ge)後(hou)的(de)胚(pei)胎(tai)發(fa)育(yu)
，一(yi)般(ban)選(xuan)用(yong)發(fa)育(yu)到(dao)桑(sang)椹(shen)胚(pei)或(huo)囊(nang)胚(pei)最(zui)為(wei)適(shi)宜(yi)。一(yi)般(ban)借(jie)助(zhu)微(wei)針(zhen)或(huo)微(wei)刀(dao)對(dui)準(zhun)胚(pei)胎(tai)內(nei)細(xi)胞(bao)團(tuan)的(de)部(bu)分(fen)進(jin)行(xing)均(jun)等(deng)的(de)直(zhi)接(jie)下(xia)切(qie)，以(yi)保(bao)證(zheng)切(qie)割(ge)後(hou)的(de)部(bu)分(fen)有(you)均(jun)等(deng)的(de)發(fa)育(yu)能(neng)力(li)。從(cong)理(li)論(lun)上(shang)講(jiang)胚(pei)胎(tai)的(de)切(qie)割(ge)可(ke)能(neng)是(shi)無(wu)限(xian)的(de)

，但(dan)是(shi)實(shi)踐(jian)證(zheng)明(ming)隻(zhi)有(you)二(er)分(fen)胚(pei)的(de)發(fa)育(yu)能(neng)力(li)最(zui)強(qiang)。近(jin)幾(ji)年(nian)通(tong)過(guo)實(shi)驗(yan)證(zheng)明(ming)，二(er)分(fen)胚(pei)直(zhi)接(jie)移(yi)植(zhi)的(de)受(shou)胚(pei)率(lv)也(ye)可(ke)達(da)40%以上

，這無異是提高了胚胎利用率，但對這一技術仍需加強研究
，簡化操作，提高效率。
    五
、胚胎的性別控製
    奶nai牛niu的de性xing別bie控kong製zhi是shi指zhi采cai用yong某mou些xie人ren為wei的de技ji術shu方fang法fa控kong製zhi受shou精jing後hou胚pei胎tai性xing別bie，這zhe是shi從cong根gen本ben上shang控kong製zhi後hou代dai的de性xing別bie比bi例li，又you稱cheng性xing比bi控kong製zhi。目mu前qian，人ren們men將jiang奶nai牛niu早zao期qi胚pei胎tai在zai移yi植zhi前qian進jin行xing性xing別bie鑒jian定ding，以yi達da到dao按an生sheng產chan需xu要yao獲huo得de單dan一yi性xing別bie犢du牛niu的de需xu要yao的de方fang法fa也ye納na入ru奶nai牛niu性xing別bie控kong製zhi內nei容rong。
    奶牛隻有母牛產奶，一般情況下，非超群公、母牛所生的公犢生產價值極低。無論采用何種技術方法使奶牛多產母牛
、shaochangongniuyizhishirenmenchangqinulidemubiao。yixiefangfasuiranjijingnuli，danshouxiaoshenwei。xiamianjinjieshaoliangzhongnainiuxingbiekongzhidefangfa，bujiujiangduinainiudexingbiekongzhifahuimingxianzuoyong。
     (一）

、X和Y精子的分離
目前，X和Y精子的分離的準確而有效的方法是流式細胞器分離。其理論根據是X精子是DNA的含量比Y精子高3-4%。具體的方法是：yongteyideranliaoduijingzijinxingranse
，suihoujiangjingziliantongshaoliangxishiyezhuyitongguoliushixibaoqidejiguangshu
，qitanceqikeganzhijingziransehoudefaguangqiangdubingjiangzheyixinxichuandigeijisuanji，jingfenbianhoujisuanjilingyejingchongdianqishifaguangjiaoqiangdejingzifenli
，jinrulianggebutongdeshoujirongqi。zheyang，zhengdianheshoujiqirongqidedaodeshiX精子
，負電荷收集器容器則為Y精子。用分離後的精子進行人工受精、體外受精或是顯微受精就可以得到單一性別率高的胚胎或犢牛。國外此法已開始用於商業化的運作，分離的準確率達90%以上。每小時可得到一個輸精劑量的分離精子。存在的主要問題是：流式細胞器的造價很高

，投入大
；fenlidesudusuiyoujiaodatigao，danyeyouxiajiangqushi。suizhezheyijishudebuduangaijinhetigao，zheyixingbiekongzhijishujianggeinainiuyedailaijudaxiaoyiheguangkuodeyingyongqianjing。
  （二）、SRY片段PCR擴增胚胎性別鑒定法
    最近10年來發展的用公牛特異性DNA探針和PCR（聚合酶鏈式反應）擴增技術對奶牛早期胚胎進行性別鑒定的一種準確有效的方法。其主要操作步驟是：從被測胚胎取部分卵裂球用以提取DNA
，再用SRY基因的片段作引物，以所取的胚胎細胞DNA為模板進行PCR擴增，最後用SRY特異探針對擴增的產物進行檢測。雄性胚胎顯示呈陽性，雌性胚胎為陰性。也可對擴增產物進行電泳，根據SRY條帶的有無判斷胚胎為雄、雌ci。隨sui著zhe這zhe項xiang技ji術shu的de深shen入ru研yan究jiu和he進jin展zhan
，目mu前qian隻zhi需xu幾ji個ge卵luan裂lie球qiu即ji可ke完wan成cheng檢jian測ce的de取qu樣yang，減jian少shao了le對dui胚pei胎tai的de傷shang害hai。經jing鑒jian定ding的de胚pei胎tai，移yi植zhi後hou產chan犢du性xing別bie的de準zhun確que率lv可ke達da95%以上。
    cifazhenggecaozuozhixujishifenzhong，youjiaohaodeyingyongqianjing
，yikaishileshangyeyunzuo。cunzaidezhuyaowentishixuyaoshiyanshitiaojianhejiancerenyuandejishushuipingjiaogao
，fouzehuiyoujiayangxingjieguochuxian
，yingxiangzhunquelv；其次，檢測試劑盒成本較高，無疑會增加被檢測胚胎的成本。

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