黴菌菌絲比較粗大（菌絲和孢子的直徑達到3-10μm），通常是細菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因而可用低倍
、高(gao)倍(bei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)。黴(mei)菌(jun)菌(jun)絲(si)細(xi)胞(bao)容(rong)易(yi)收(shou)縮(suo)變(bian)形(xing)
，孢(bao)子(zi)容(rong)易(yi)飛(fei)揚(yang)，在(zai)製(zhi)備(bei)黴(mei)菌(jun)標(biao)本(ben)時(shi)，常(chang)用(yong)乳(ru)酸(suan)石(shi)炭(tan)酸(suan)溶(rong)液(ye)作(zuo)為(wei)介(jie)質(zhi)，具(ju)有(you)不(bu)使(shi)細(xi)胞(bao)變(bian)形(xing)，可(ke)殺(sha)菌(jun)防(fang)腐(fu)，不(bu)易(yi)幹(gan)燥(zao)

，能(neng)保(bao)持(chi)較(jiao)長(chang)時(shi)間(jian)等(deng)優(you)點(dian)。

一

、實驗目的
1. 學習並掌握觀察黴菌形態的基本方法；
2. 了解常見黴菌（根黴
、毛黴
、曲黴、青黴、紅曲黴、白地黴）的基本形態特征。

二
、實驗材料
1. 菌種：根黴（Rhizopus sp.）、毛黴（Mucor sp.）、曲黴（Aspergillus sp.）
、青黴（Penicillium sp.）
、紅曲黴（Monascus sp.）的平板培養物
，白地黴（Geotrichum candidum）搖瓶培養液。
2. 培養基：土豆瓊脂培養基（PDA）或察氏培養基。
3. 溶液或試劑：乳酸石炭酸棉藍染色液。
4. 其他：無菌吸管
，平皿，載玻片，蓋玻片，解剖針，顯微鏡等。

三、實驗原理
黴菌菌絲比較粗大（菌絲和孢子的直徑達到3-10μm），通常是細菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因而可用低倍
、高(gao)倍(bei)鏡(jing)觀(guan)察(cha)。黴(mei)菌(jun)菌(jun)絲(si)細(xi)胞(bao)容(rong)易(yi)收(shou)縮(suo)變(bian)形(xing)，孢(bao)子(zi)容(rong)易(yi)飛(fei)揚(yang)

，在(zai)製(zhi)備(bei)黴(mei)菌(jun)標(biao)本(ben)時(shi)
，常(chang)用(yong)乳(ru)酸(suan)石(shi)炭(tan)酸(suan)溶(rong)液(ye)作(zuo)為(wei)介(jie)質(zhi)
，具(ju)有(you)不(bu)使(shi)細(xi)胞(bao)變(bian)形(xing)
，可(ke)殺(sha)菌(jun)防(fang)腐(fu)
，不(bu)易(yi)幹(gan)燥(zao)，能(neng)保(bao)持(chi)較(jiao)長(chang)時(shi)間(jian)等(deng)優(you)點(dian)。若加入棉藍，又具有一定的染色效果。
黴菌的有些結構在製片過程中易被破壞
，影響觀察
，可采用載片培養法。此法便於直接在顯微鏡下觀察，尤其適用於根黴的假根、曲黴的足細胞及分生孢子鏈等結構的著生和生長情況的觀察。並且還可以在同一標本上觀察到微生物發育的不同階段的形態。

四
、操作步驟
（一）一般觀察法：
1. 點種培養：用接種針沾取斜麵少許孢子在無菌的察氏培養基中央穿刺接種（倒置培養皿穿刺接種），30℃下培養7-10天，形成巨大菌落培養物。
2. 直接製片：在(zai)載(zai)玻(bo)片(pian)中(zhong)央(yang)加(jia)一(yi)滴(di)乳(ru)酸(suan)石(shi)炭(tan)酸(suan)棉(mian)藍(lan)染(ran)色(se)液(ye)於(yu)潔(jie)淨(jing)
，打(da)開(kai)黴(mei)菌(jun)平(ping)板(ban)培(pei)養(yang)物(wu)，用(yong)解(jie)剖(pou)針(zhen)從(cong)菌(jun)落(luo)的(de)邊(bian)緣(yuan)挑(tiao)取(qu)少(shao)量(liang)帶(dai)有(you)孢(bao)子(zi)的(de)菌(jun)絲(si)
，放(fang)入(ru)載(zai)玻(bo)片(pian)的(de)染(ran)液(ye)中(zhong)，細(xi)心(xin)地(di)把(ba)菌(jun)絲(si)挑(tiao)散(san)開(kai)

，加(jia)蓋(gai)玻(bo)片(pian)
，注(zhu)意(yi)不(bu)要(yao)產(chan)生(sheng)氣(qi)泡(pao)，置(zhi)於(yu)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，菌(jun)絲(si)呈(cheng)蘭(lan)色(se)，顏(yan)色(se)的(de)深(shen)度(du)隨(sui)菌(jun)齡(ling)的(de)增(zeng)加(jia)而(er)減(jian)弱(ruo)。
觀察根黴時，注意觀察其菌絲有無橫隔
、假根
、孢子囊柄
、孢子囊

、囊軸

、囊托、孢子囊孢子及厚垣孢子。
觀察毛黴時
，注意觀察其菌絲無橫隔、孢子囊柄、囊軸、孢子囊孢子及後垣孢子。
觀察曲黴時，注意觀察其菌絲有橫隔

、足細胞、分生孢子梗
、頂囊、小梗（形狀、層數及著生情況）

、分生孢子。
觀察青黴時
，注意觀察其菌絲有橫隔、分生孢子梗

、帚狀枝（小梗的輪數及對稱性）、分生孢子。
觀察紅曲黴時
，注意觀察其菌絲有橫隔、分生孢子著生情況
、閉囊殼、子囊孢子。
（二）載玻片濕室培養觀察法
yechengzaipianpeiyangfa，yongwujuncaozuojiangpeiyangjiqiongzhibocengzhiyuzaibopianshang


，jiezhonghougaishanggaibopianpeiyang，meijunjizaizaibopianhegaibopianzhijiandeyouxiankongjianneiyangaibopianhengxiangshengchang。peiyangyidingshijianhou，jiangzaibopianshangdepeiyangwuzhiyuxianweijingxiaguancha。zaipianpeiyangfazhibeidebiaobenpiankezhijiezaixianweijingxiaguancha，zhezhongpeiyangguanchafangfabaochilemeijundeziranshengchangzhuangtai，youqishiyongyugenmeidejiagen、匍匐菌絲

，曲黴的足細胞的觀察，並且還可在同一標本片上觀察黴菌的不同生長階段的形態。
載玻片濕室培養觀察法具體操作：
1. 準備濕室：在培養皿底部鋪一張圓形濾紙片

，濾紙片上依次放上“U”形載玻片擱架、載玻片、蓋玻片（兩片），蓋上皿蓋
，外用紙包紮，高壓滅菌（9.8×104Pa）20分鍾後，60℃烘箱幹燥
，備用。
2. 取菌接種：用(yong)接(jie)種(zhong)環(huan)挑(tiao)取(qu)少(shao)量(liang)待(dai)觀(guan)察(cha)的(de)黴(mei)菌(jun)孢(bao)子(zi)
，置(zhi)於(yu)濕(shi)室(shi)的(de)載(zai)玻(bo)片(pian)上(shang)
，每(mei)張(zhang)載(zai)玻(bo)片(pian)可(ke)接(jie)同(tong)一(yi)菌(jun)種(zhong)的(de)孢(bao)子(zi)兩(liang)處(chu)。接(jie)種(zhong)時(shi)隻(zhi)要(yao)將(jiang)帶(dai)菌(jun)的(de)接(jie)種(zhong)環(huan)在(zai)載(zai)玻(bo)片(pian)上(shang)輕(qing)輕(qing)碰(peng)幾(ji)下(xia)即(ji)可(ke)。
（接種量要少

，以免培養後菌絲過於稠密而影響觀察）
3. 加培養基：用無菌細口滴管吸取少許融化並冷卻至45℃的培養基，滴加到載玻片的接種處，培養基應滴得圓而薄，直徑約為0.5cm（滴加量一般以1/2小滴為宜），注意無菌操作。
4. 加蓋玻片：zaipeiyangjiweichediningguqian，yongwujunniezijiangminneidegaibopiangaizaiqiongzhibocengshang，yongnieziqingyagaibopian，shigaibopianhezaibopianzhijiandejulixiangdangjiejin，danbunengyabian。
（蓋玻片不能緊貼載玻片，要彼此留有小縫隙，一是為了通氣
，二是使各部分結構平行排列，易於觀察。）
5. 倒保濕劑：每皿倒入約3mL 20%的無菌甘油
，使皿內濾紙完全濕潤，以保持皿內濕度，蓋上皿蓋。製成載玻片濕室
，28℃培養。
觀察：將培養好的載玻片取出，置於顯微鏡下直接觀察。