近日
，蒙牛純牛奶被檢測出強致癌物——黃曲黴毒素M1，消息一出頓時又掀起一股食品安全隱患的討論。相比之前的三聚氰胺

，黃曲黴素是否更難檢測？

現整理出全套的專業檢測方案，讓乳和乳製品中黃曲黴毒素M1無處躲藏。

1. 試用範圍

牛奶，奶粉，發酵乳，幹酪，奶油等乳製品

2. 方法原理

黃曲黴毒素M1易溶於極性溶劑，因此均勻基質中的黃曲黴毒素M1可以通過甲醇/水震蕩分散提取，對於高脂肪/油含量的樣品基質加入正己烷予以脫脂。本方法采用免疫親和柱淨化，熒光檢測器測定乳製品中黃曲黴毒素M1。

3. 所需設備和耗材

黃曲黴毒素免疫親和柱：Welchrom? IAC (1ml

，25支/盒
；3ml
，15支/盒)（上海月旭提供）
；

高效液相裝置帶熒光檢測器；

均質機；

水平振蕩器
；

SPE轉接頭及50ml大容量上樣器：Welchrom? SPE Adapter（上海月旭提供）
；

分析天平（精度0.02 g)；

SPE裝置帶抽真空係統：Welchrom?  SPE Device（上海月旭提供）；

黃曲黴毒素M1標準品

；

PBS 緩衝溶液：稱取1.16 g Na2HPO4
，0.20 g KH2 PO4，8 g NaCl和0.2 g KCl 溶於900ml水中
，用HCL或NaOH調節pH至7.4，然後定容至1000ml
；

甲醇（色譜純）；

乙腈（色譜純）
；

正己烷（分析純）。

4. 樣品前處理

牛奶樣品

1. 稱取25g(精確至0.01 g)混勻的樣品，置於50 mL具塞離心管中，水浴加熱至35℃～37 ℃

，6000 r/min下離心10 min。收集全部上清液，待淨化
；

2. 發酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)

3. 稱取25 g(精確至0.01 g)混勻的樣品，用0.5mol/L的NaOH溶液調節pH值至7.4，9500r/min下均質5 min，水浴加熱至35℃～37 ℃，6000 r/min下離心10 min。收集全部上清液，待淨化。

4. 乳粉和粉狀嬰幼兒配方乳製品

5. 稱取10 g(精確至0.01 g)樣品置於250 mL燒杯中，加入50 mL約50 ℃的水於乳粉中，玻璃棒攪拌均勻。溶解後冷卻至室溫，移入100 mL容量瓶中，水洗燒杯並轉移洗滌液，用PBS定容至刻度後裝入離心管6000轉/分鍾下離心15 min，混合上清液，取50mL上清液待淨化。

幹酪

切取均質的樣品5g(精確至0.01 g)於50 mL離心管中，加2 mL水和30 mL甲醇，9500 r/min下勻漿5 min，超聲提取30 min
，6000r/min下離心10 min。收集上清液並移入250 mL分液漏鬥中
，同時加入30 mL正己烷，振搖2 min
，分層後，棄去正己烷層。重複用正己烷提取2次。提取液減壓濃縮至約2 mL

，轉移濃縮液至離心管，燒瓶用甲醇-水溶液(1+4)5 mL分2次洗滌並倒入50 mL離心管中，加PBS溶液稀釋至50 mL
，6000r/min下離心5 min，上清液待淨化。

奶油

稱取5g(精確至0.01 g)試樣，置於50 mL燒杯中，用20 mL正己烷將其溶解並移於250mL具塞錐形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇
，振蕩30 min後，將全部液體移於分液漏鬥中，待分層後

，將下層溶液全部移到100 mL圓底燒瓶中

，旋轉蒸發儀減壓濃縮至約5 mL，加PBS稀釋至約50mL，待淨化。

5. 免疫親和柱淨化（3cc）

1. 將IAC裝於固相萃取裝置上
，接上大體積上樣器
，10ml PBS溶液活化柱子，流速保持在2–3 ml/min
，確保上樣前柱子保留少量（0.5ml）的PBS溶液，活化液不收集；

2. 將待淨化液加入免疫親和柱
，流速不超過5 mL/min，不收集流出液
；

3. 用約20ml去離子水淋洗柱子
，流速不超過5 mL/min，抽真空1分鍾，不收集流出液
；

4. 用1.5ml甲醇洗脫，流速控製在1d/s
，收集洗脫液過膜後上機測試。

注：免疫親和柱從冰箱去除需升到室溫後使用

6. 色譜條件：

色譜柱：   Ultimate? XB-C18 250 mm x 4.6 mm，5μm（上海月旭提供）

預柱：     Ultimate? C18，5μm，ULT5BG18（上海月旭提供）

流動相：   水:甲醇:乙腈=11:4:5

柱溫：     35℃

檢測波長： 發射波長：365nm，激發波長：450nm

進樣量：   100μL