把所有出峰的組分含量之和按100%計的定量方法,稱為歸一化法。
各成分校正因子一致時可用該法,該法簡便、準確,特別是進樣量不容易準確控製時,進樣濃度及進樣量的變化的影響很小。
其他操作條件,如流速、柱溫等變化對定量結果的影響也很小。GC應用廣於HPLC。
外標法(標準曲線法、直接比較法)
首先用欲測組分的標準樣品繪製標準工作曲線。具體作法是:用yong標biao準zhun樣yang品pin配pei製zhi成cheng不bu同tong濃nong度du的de標biao準zhun係xi列lie,在zai與yu欲yu測ce組zu分fen相xiang同tong的de色se譜pu條tiao件jian下xia,等deng體ti積ji準zhun確que量liang進jin樣yang,測ce量liang各ge峰feng的de峰feng麵mian積ji或huo峰feng高gao,用yong峰feng麵mian積ji或huo峰feng高gao對dui樣yang品pin濃nong度du繪hui製zhi標biao準zhun工gong作zuo曲qu線xian,此ci標biao準zhun工gong作zuo曲qu線xian應ying是shi通tong過guo原yuan點dian的de直zhi線xian。若ruo標biao準zhun工gong作zuo曲qu線xian不bu通tong過guo原yuan點dian,說shuo明ming測ce定ding方fang法fa存cun在zai係xi統tong誤wu差cha。標準工作曲線的斜率即為絕對校正因子。
dangyucezufenhanliangbianhuabuda,bingyizhizheyizufendedagaihanliangshi,yekeyibubihuizhibiaozhungongzuoquxian,eryongdandianxiaozhengfa,jizhijiebijiaofadingliang。dandianxiaozhengfashijishangshiliyongyuandianzuoweibiaozhungongzuoquxianshangdelingyigedian。yinci,dangfangfacunzaixitongwuchashi(即標準工作曲線不通過原點),單點校正法的誤差較大。因此規定,y=ax+b 。b的絕對值應不大於100%響應值是y的2%。
標準曲線法的優點:繪hui製zhi好hao標biao準zhun工gong作zuo曲qu線xian後hou測ce定ding工gong作zuo就jiu很hen簡jian單dan了le,計ji算suan時shi可ke直zhi接jie從cong標biao準zhun工gong作zuo曲qu線xian上shang讀du出chu含han量liang,這zhe對dui大da量liang樣yang品pin分fen析xi十shi分fen合he適shi。特te別bie是shi標biao準zhun工gong作zuo曲qu線xian繪hui製zhi後hou可ke以yi使shi用yong一yi段duan時shi間jian,在此段時間內可經常用一個標準樣品對標準工作曲線進行單點校正,以確定該標準工作曲線是否還可使用。
標準曲線法的缺點:每次樣品分析的色譜條件(檢測器的響應性能,柱溫度,流動相流速及組成,進樣量,柱效等)很難完全相同,因此容易出現較大誤差。另外,標準工作曲線繪製時,一般使用欲測組分的標準樣品(或已知準確含量的樣品),因此對樣品前處理過程中欲測組分的變化無法進行補償。
內標法
選擇適宜的物質作為欲測組分的參比物,定量加到樣品中去,依據欲測組分和參比物在檢測器上的響應值(峰麵積或峰高)之比和參比物加入的量進行定量分析的方法稱為內標法。
內(nei)標(biao)法(fa)的(de)關(guan)鍵(jian)是(shi)選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)內(nei)標(biao)物(wu)。內(nei)標(biao)物(wu)應(ying)是(shi)原(yuan)樣(yang)品(pin)中(zhong)不(bu)存(cun)在(zai)的(de)純(chun)物(wu)質(zhi),該(gai)物(wu)質(zhi)的(de)性(xing)質(zhi)應(ying)盡(jin)可(ke)能(neng)與(yu)欲(yu)測(ce)組(zu)分(fen)相(xiang)近(jin),不(bu)與(yu)被(bei)測(ce)樣(yang)品(pin)起(qi)化(hua)學(xue)反(fan)應(ying),同(tong)時(shi)要(yao)能(neng)完(wan)全(quan)溶(rong)於(yu)被(bei)測(ce)樣(yang)品(pin)中(zhong)。內nei標biao物wu的de峰feng應ying盡jin可ke能neng接jie近jin欲yu測ce組zu分fen的de峰feng,或huo位wei於yu幾ji個ge欲yu測ce組zu分fen的de峰feng中zhong間jian,但dan必bi須xu與yu樣yang品pin中zhong的de所suo有you峰feng不bu重zhong疊die,即ji完wan全quan分fen開kai。一yi般ban會hui選xuan擇ze標biao準zhun物wu質zhi的de同tong位wei素su物wu質zhi作zuo為wei內nei標biao物wu。
內標法的優點:進樣量的變化,色譜條件的微小變化對內標法定量結果的影響不大,特別是在樣品前處理(如濃縮、萃取,衍生化等)前加入內標物,然後再進行前處理時,可部分補償欲測組分在樣品前處理時的損失。若要獲得很高精度的結果時,可以加入數種內標物,以提高定量分析的精度。
內標法的缺點:選擇合適的內標物比較困難,內標物的稱量要準確,操作較麻煩。使用內標法定量時要測量欲測組分和內標物的兩個峰的峰麵積(或峰高),根據誤差疊加原理,內標法定量的誤差中,由於峰麵積測量引起的誤差是標準曲線法定量的2-2,但(dan)是(shi)由(you)於(yu)進(jin)樣(yang)量(liang)的(de)變(bian)化(hua)和(he)色(se)譜(pu)條(tiao)件(jian)變(bian)化(hua)引(yin)起(qi)的(de)誤(wu)差(cha),內(nei)標(biao)法(fa)比(bi)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)法(fa)要(yao)小(xiao)很(hen)多(duo),所(suo)以(yi)總(zong)的(de)來(lai)說(shuo),內(nei)標(biao)法(fa)定(ding)量(liang)比(bi)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)法(fa)定(ding)量(liang)的(de)準(zhun)確(que)度(du)和(he)精(jing)密(mi)度(du)都(dou)要(yao)好(hao)。
標準加入法
biaozhunjiarufashizhishangshiyizhongteshudeneibiaofa,shizaixuanzebudaoheshideneibiaowushi,yiyucezufendechunwuzhiweineibiaowu,jiarudaodaiceyangpinzhong,ranhouzaixiangtongdeseputiaojianxia,cedingjiaruyucezufenchunwuzhiqianhouyucezufendefengmianji(或峰高),從而計算欲測組分在樣品中的含量的方法。
標準加入法的優點:buxuyaolingwaidebiaozhunwuzhizuoneibiaowu,zhixuyucezufendechunwuzhi,jinyangliangbubishifenzhunque,caozuojiandan。ruozaiyangpindeqianchulizhiqianjiujiaruyizhizhunqueliangdeyucezufen,zekeyiwanquanbuchangyucezufenzaiqianchuliguochengzhongdesunshi,shisepufenxizhongjiaochangyongdedingliangfenxifangfa。
標準加入法的缺點:要求加入欲測組分前後兩次色譜測定的色譜條件完全相同,以保證兩次測定時的校正因子完全相等,否則將引起分析測定的誤差。
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